一种酶溶性高纯超螺旋结构Ⅰ型胶原蛋白的制备方法技术

技术编号:10661543 阅读:244 留言:0更新日期:2014-11-19 20:45
本发明专利技术是一种酶溶性高纯超螺旋结构Ⅰ型胶原蛋白,也是一种低抗原性高纯超螺旋结构Ⅰ型胶原蛋白的制备方法,其特征在于:选取主要含有Ⅰ型胶原蛋白的鱼鳞作为原料,经碱处理去除杂蛋白和脂肪,酸处理去除鱼鳞的钙盐后,添加弱酸溶液作为提取剂,同时加入胃蛋白酶进行低温搅拌浸提,浸提后冷冻离心得酶溶性Ⅰ型胶原蛋白粗提液;然后将酶溶性Ⅰ型胶原蛋白粗提液通过膜分离技术纯化,再用冷冻干燥,即得纯度不低于90%,保持三螺旋结构的酶溶性Ⅰ型胶原蛋白。运用本发明专利技术方法所制备的胶原蛋白产品抗原性低,构型明确,三螺旋结构完整,通过HPLC检测,为纯度≥90%的Ⅰ型胶原蛋白,通过MALDI-TOF-MS检测,质谱图无杂峰,其分子量为288kDa。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种酶溶性高纯超螺旋结构Ⅰ型胶原蛋白的制备方法,其特征在于,其步骤如下:(1)原料预处理将鱼鳞投入反应釜中,加入鱼鳞重量2~10倍的碱溶液,搅拌1~12小时,除掉鱼鳞包括脂肪和杂蛋白在内的杂质,用水洗净,加入鱼鳞重量2~10倍的酸溶液,搅拌1~12小时,再用水洗净,其中碱溶液的质量体积浓度为1~4%,酸溶液的质量体积浓度为3~8%,预处理温度控制在0~25℃之间;(2)Ⅰ型胶原蛋白提取向处理后的原料中添加0.05~10mol/L的弱酸作为提取剂,浸提温度为0~10℃,原料与提取剂的重量比为1:10,同时加入原料重量0.05%~5%的胃蛋白酶进行2~72小时的搅拌浸提,提取步骤重复0~5次,浸提液混合汇总,再进行冷冻离心过滤,所得的离心上清液为酶溶性Ⅰ型胶原蛋白粗提液,(3)Ⅰ型胶原蛋白分离纯化膜分离工艺技术纯化酶溶性I型胶原蛋白粗提液,粗提液用孔径为0.2~0.1μm或相对分子量为300KD~200KD的超滤膜,超滤膜流速为0.91~1.82立方米/小时,膜压力为0.1~0.4Mpa,温度为0~10℃,去除残余的胃蛋白酶、小分子杂质和无机盐,浓缩得到色谱纯度≥90%,具备三螺旋结构的高纯I型胶原蛋白溶液;(4)Ⅰ型胶原蛋白冷冻干燥冷冻干燥热敏性的I型胶原蛋白溶液,得到酶溶性高纯超螺旋结构I型胶原蛋白成品。...

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员:陈思谨易瑞灶陈晖洪碧红谢全灵
申请(专利权)人:国家海洋局第三海洋研究所
类型:发明
国别省市:福建;35

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