本发明专利技术涉及人GFAP抗原表位肽、抗原、抗体、用途及试剂盒。本发明专利技术的人GFAP抗原表位肽的氨基酸序列，为序列表SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的序列之一。本发明专利技术的GFAP抗原由人GFAP抗原表位肽与蛋白载体偶联制得。本发明专利技术的GFAP单克隆抗体或多克隆抗体由本发明专利技术的GFAP抗原制得。本发明专利技术的GFAP单克隆抗体或多克隆抗体用于制备GFAP体外诊断试剂盒。本发明专利技术的人GFAP抗原表位肽具有良好的抗原性，用其制备的抗原（免疫原）免疫动物能够产生高度特异性的单克隆抗体和多克隆抗体，从而可应用于人GFAP的体外检测。
【技术实现步骤摘要】
人GFAP抗原表位肽、抗原、抗体、用途及试剂盒
本专利技术属于多肽化学和免疫学领域，具体涉及人胶质纤维酸性蛋白（GFAP）抗原表位肽、用该抗原表位肽制备的GFAP特异性抗原和相应的单克隆抗体或多克隆抗体、所述抗体在制备人GFAP体外诊断试剂盒上的用途，人GFAP体外诊断试剂盒，以及一种用于定量检测待测物中人GFAP蛋白的荧光免疫层析试纸及其制备方法。
技术介绍
近年来，对神经生化标志物的研究已引起许多研究者的注意,寻找一种可靠的、非侵入性的、能反映中枢神经系统损害范围及预后的生化标志物是众多研究者的共同心愿。通过对血液和脑脊液（CSF）的研究，目前已经发现一些生化标志物可以用来判断神经系统的损害范围以及对预后进行预测，这在疾病的早期要优于CT以及MRI等影像学检查。其中，胶质纤维酸性蛋白（GFAP）就是这样一种生化标志物。胶质纤维酸性蛋白（GFAP）是一种分子量为50-52KDa的酸性蛋白，其属于细胞骨骼蛋白，是星形细胞的标志蛋白，在星形细胞中有丰富的、唯一的表达。胶质纤维酸性蛋白是成熟星形胶质细胞特有的中间丝成分，其对神经生理功能和各种病理的发展过程具有重要的作用。在正常情况下，GFAP受星形胶质细胞的动力调节。损伤后增生的GFAP阳性星形胶质细胞能促进星形胶质细胞的有丝分裂，并使原始祖细胞分化成为成熟的星形胶质细胞。各种中枢神经系统损伤均可引起星形胶质细胞反应。星形胶质细胞反应的标志为细胞数增加，细胞体肥大，星形胶质细胞分支增多，并且GFAP的表达增强。因此，GFAP可以作为中枢神经系统损伤范围及预后的生化标志物。此外，GFAP在神经胶质瘤中的表达也会出现异常，因此其也可以作为反映神经胶质瘤的恶性程度的特异性标志物。研究发现，GFAP与神经系统病理过程（如脑外伤、脑梗死、脑卒中、神经退行性病）有明显的相关性。当患者的中枢神经系统发生损伤时，GFAP从受损伤的神经胶质细胞中溢出，进入细胞间液，可溶性的GFAP由细胞间液进入脑脊液，穿过破坏的血脑屏障进入血液循环。因此，可以由患者血清中的GFAP水平来判断神经系统损伤的病情及预后。检测血清中的GFAP水平的最理想的方法为免疫检测。因此，寻找合适的具有免疫原性的GFAP抗原表位肽、制备特异性的GFAP抗原及抗体即成为了重点。
技术实现思路
为解决上述现有技术中所存在的问题，本专利技术提供了一种人GFAP抗原表位肽，用该抗原表位肽制备的GFAP特异性抗原和相应的单克隆抗体或多克隆抗体，其在制备人GFAP试剂盒上的用途，以及人GFAP体外诊断试剂盒。具体而言，本专利技术提供了：一种人GFAP抗原表位肽，其中所述GFAP抗原表位肽的氨基酸序列为如下两者之一：(1)Thr-Val-Arg-Gln-Lys-Leu-Gln-Asp-Glu-Thr-Asn-Leu-Arg-Leu-Glu-Ala-Glu-Asn-Asn-Leu-Ala-Ala-Tyr；(2)Tyr-Gln-Glu-Ala-Leu-Ala-Arg-Leu-Glu-Glu-Glu-Gly-Gln-Ser-Leu-Lys-Asp。本专利技术还提供了一种GFAP抗原，其是通过使所述的人GFAP抗原表位肽(1)与载体蛋白偶联制备而成的。本专利技术还提供了一种GFAP抗原，其是通过使所述的人GFAP抗原表位肽(2)与载体蛋白偶联制备而成的。本专利技术还提供了一种人GFAP抗体，其是由所述的GFAP抗原制备而成的单克隆抗体或多克隆抗体，其中所述GFAP抗原是通过使所述的人GFAP抗原表位肽(1)与载体蛋白偶联制备而成的。本专利技术还提供了一种人GFAP抗体，其是由所述的GFAP抗原制备而成的单克隆抗体或多克隆抗体，其中所述GFAP抗原是通过使所述的人GFAP抗原表位肽(2)与载体蛋白偶联制备而成的。本专利技术还提供了根据所述的人GFAP抗体在制备人GFAP体外诊断试剂盒上的用途。本专利技术还提供了一种人GFAP体外诊断试剂盒，其包含所述的人GFAP抗体作为包被抗体，其中所述包被抗体优选为单克隆抗体。优选地，所述试剂盒还包含结合抗体，所述结合抗体为所述的人GFAP抗体，并且该结合抗体优选为多克隆抗体，并且当所述结合抗体来源于所述的人GFAP抗原表位肽(1)和(2)中的一者时，所述包被抗体来源于所述的人GFAP抗原表位肽(1)和(2)中的另一者。优选地，所述试剂盒还包含酶标记的第二抗体。本专利技术与现有技术相比具有以下优点和积极效果：1.本专利技术的人GFAP抗原表位肽具有良好的抗原性，用其制备的抗原（免疫原）免疫动物能够产生高度特异性的单克隆抗体和多克隆抗体。2.用本专利技术制备的GFAP单克隆抗体和多克隆抗体能够高度特异地与血液样本中的GFAP结合。3.本专利技术的人GFAP体外诊断试剂盒可以有效地检测血清中的胶质纤维酸性蛋白GFAP的水平，可用来判断神经系统的损害范围和对预后进行预测。4.本专利技术将荧光分析技术与快速层析免疫技术相结合，提供了一种用于定量检测待测物中人GFAP蛋白的荧光免疫层析试纸，用该试纸检测待测物中的人GFAP蛋白，操作简便、快速，只需10分钟就能完成样品检测，并且检测范围宽、特异性高、灵敏度好，能够迅速及时地帮助诊断病情，监测预后。5.本专利技术在制备所述人GFAP蛋白的荧光免疫层析试纸的过程中，通过大量的试验摸索，优化了各方面的制备条件，使得用本专利技术的荧光免疫层析试纸进行检测时，荧光信背比大大提高，从而提高了检测灵敏度和结果可信度；此外，本专利技术还通过试纸的检测区与质控区的荧光强度比值的变化来反应样品中GFAP的含量，这与传统的层析技术只考查检测区的绝对荧光强度相比，最大程度上减少了外界条件和背景等的影响，进一步提高了检测结果可信度。具体实施方式以下通过具体实施方式的描述对本专利技术作进一步说明，但这并非是对本专利技术的限制，本领域技术人员根据本专利技术的基本思想，可以做出各种修改或改进，但是只要不脱离本专利技术的基本思想，均在本专利技术的范围之内。一、人GFAP抗原表位肽本文中所述的人GFAP蛋白是本领域已知的，其氨基酸序列是本领域已知的，可以在NCBI等专业数据库中查到。本专利技术提供了一种人GFAP抗原表位肽(1)和(2)，其氨基酸序列分别如序列表SEQIDNo.1和SEQIDNo.2所示，为：(1)T-V-R-Q-K-L-Q-D-E-T-N-L-R-L-E-A-E-N-N-L-A-A-Y；和(2)Y-Q-E-A-L-A-R-L-E-E-E-G-Q-S-L-K-D。本专利技术的专利技术人经过大量的理论研究和实验摸索，最终筛选得到两种具有良好的抗原性的抗原表位肽。GFAP抗原表位肽(1)是人GFAP蛋白N端第150至172位的一段含23个氨基酸的肽段。GFAP抗原表位肽(2)是人GFAP蛋白C端第324至340位的一段含17个氨基酸的肽段。这两个肽段均具有亲水性、抗原性强并且易于合成的特点。目前，本专利技术研究发现，本专利技术的GFAP抗原表位肽具有如下功能：1.具有抗原性；2.与载体蛋白连接后作为免疫原刺激动物产生特异性的抗体；3.用抗原表位肽制备的抗体可特异性地与人GFAP结合。本专利技术的GFAP抗原表位肽的制备方法可用化学合成法：利用美国ABI431A型多肽自动合成仪，通过固相法合成抗原表位肽。本专利技术的抗原表位肽(1)和(2)的分子量分别为2690.27、1979.35本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种人GFAP抗原表位肽，其中所述GFAP抗原表位肽的氨基酸序列为如下两者之一：(1)Thr‑Val‑Arg‑Gln‑Lys‑Leu‑Gln‑Asp‑Glu‑Thr‑Asn‑Leu‑Arg‑Leu‑Glu‑Ala‑Glu‑Asn‑Asn‑Leu‑Ala‑Ala‑Tyr；(2)Tyr‑Gln‑Glu‑Ala‑Leu‑Ala‑Arg‑Leu‑Glu‑Glu‑Glu‑Gly‑Gln‑Ser‑Leu‑Lys‑Asp。
【技术特征摘要】
1.一种人GFAP抗原表位肽，其中所述GFAP抗原表位肽的氨基酸序列为如下两者之一：(1)Thr-Val-Arg-Gln-Lys-Leu-Gln-Asp-Glu-Thr-Asn-Leu-Arg-Leu-Glu-Ala-Glu-Asn-Asn-Leu-Ala-Ala-Tyr；(2)Tyr-Gln-Glu-Ala-Leu-Ala-Arg-Leu-Glu-Glu-Glu-Gly-Gln-Ser-Leu-Lys-Asp。2.一种GFAP抗原，其是通过使权利要求1所述的人GFAP抗原表位肽(1)与载体蛋白偶联制备而成的。3.一种GFAP抗原，其是通过使权利要求1所述的人GFAP抗原表位肽(2)与载体蛋白偶联制备而成的。4.一种人GFAP抗体，其是由权利要求2所述的GFAP抗原制备而成的单克隆抗体或多克隆抗体。5.一种人GFAP抗体，其是由权利要求3...
【专利技术属性】
技术研发人员：朱建安，
申请(专利权)人：深圳市安群生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44
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