【技术实现步骤摘要】
【技术保护点】
一种利用otef启动子进行球孢白僵菌遗传转化方法,其特征在于,包括以下步骤:1)otef:GFP质粒载体的构建利用特异引物以质粒otef:CAR为模板扩增得otef全序列,克隆到pUCm‑T载体上,形成pUC‑otef,并测序验证;然后用XbaI和NcoI双酶切pUC‑otef和PF质粒,回收otef片段,克隆到用相同酶切的PF载体上,形成otef:GFP载体;2)球孢白僵菌DNA提取100mg菌粉液氮研磨成粉末;置于预先加入600μL提取液的1.5mlEP管静置2min;加入100μL10%SDS,充分混合后加入300μL氯化苄,剧烈振荡混匀;50℃水浴1h,不用颠倒;加入100μL3MNaAc,4℃放置十分钟后使用,,冰浴15min后12000r/min离心10min;吸取上清液转入新的离心管,加入体积比为25:24:1的水饱和酚/氯仿/Tris饱和酚抽提,12000r/min离心10min;取上清加入RNA酶,65℃水浴30min;加入体积比为25:24:1的水饱和酚/氯仿/Tris饱和酚抽提,12000r/min离心10min;取上清,加入2倍体积的冰预冷无水乙醇,‑20℃冰柜 ...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员:李启云,徐文静,路杨,张佳诗,张正坤,郑岩,杜茜,隋丽,任金平,田志来,
申请(专利权)人:吉林省农业科学院,
类型:发明
国别省市:吉林;22
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