具有内切葡聚糖酶活性的多肽和编码该多肽的多核苷酸制造技术

本发明专利技术涉及具有内切葡聚糖酶活性的分离的多肽，以及编码所述多肽的分离的多核苷酸。本发明专利技术还涉及包含所述多核苷酸的核酸构建体、载体和宿主细胞，以及用于产生和使用所述多肽的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】【专利摘要】本专利技术涉及具有内切葡聚糖酶活性的分离的多肽，以及编码所述多肽的分离的多核苷酸。本专利技术还涉及包含所述多核苷酸的核酸构建体、载体和宿主细胞，以及用于产生和使用所述多肽的方法。【专利说明】具有内切葡聚糖酶活性的多肽和编码该多肽的多核苷酸对于在联邦资助的研究和开发下完成的专利技术的权利的声明本专利技术是在由美国能源部授予的合作协议(Cooperative Agreement)DE-FC36-08G018080下以政府支持完成的。政府在本专利技术中具有一定权利。涉及序列表本申请包含计算机可读形式的序列表，其通过提述并入本文。专利技术背景
本专利技术涉及具有内切葡聚糖酶活性的多肽，催化域，和碳水化合物结合域，和编码所述多肽，催化域，和碳水化合物结合域的多核苷酸。本专利技术亦涉及包含所述多核苷酸的核酸构建体、载体和宿主细胞，以及产生和使用所述多肽，催化域，和碳水化合物结合域的方法。
技术介绍
纤维素是简单糖葡萄糖通过β -1, 4-键共价连接的聚合物。许多微生物产生水解连接的葡聚糖的酶。这些酶包括内切葡聚糖酶、纤维二糖水解酶和葡糖苷酶。内切葡聚糖酶在随机位置消化纤维素聚合物，使其暴露于纤维二糖水解酶攻击(attack)。纤维二糖水解酶从纤维素聚合物的末端顺序地释放纤维二糖的分子。纤维二糖是水溶性的β -1, 4-连接的葡萄糖二聚体。β -葡糖苷酶将纤维二糖水解成葡萄糖。 将含木素纤维素原料(lignocellulosic feedstock)转化为乙醇具有以下优势:大量原料现成可用，避免燃烧或填埋材料的合意性和乙醇燃料的清洁性。木材、农业残余物、草本作物和城市固体废物被认为是用于乙醇生产的原料。这些材料主要由纤维素、半纤维素和木质素组成。一旦木素纤维素转化为可发酵的糖如葡萄糖，所述可发酵的糖可容易地由酵母发酵为乙醇。 UNIPR0T_G2Y5P1 公开了来自 Botryotinia fuckeliana 的糖基水解酶家族 5 蛋白。W02008151079 公开了嗜热毁丝霉(Mycel1phthora thermophila)内切葡聚糖酶，SEQID N0:32(GENESEQP:AUM17218)。UNIPR0T:B0Y8K1 公开了来自 Neosartorya fumigata 的推定的内切葡聚糖酶。UNIPR0T:B0XRX9公开了来自Neosartorya fumigate的可能的葡聚糖内切 _1，6-β -葡糖苷酶 B。UNIPROT:Β6Η2Ρ2 公开了来自 Penicillium chrysogenum的蛋白。W02011057140公开了烟曲霉(Aspergillus fumigatus)GH5内切葡聚糖酶II(GENESEQP:AZ105010)。UNIPROT: AlDGPl 公开了来自 Neosartorya fischeri 的推定的内切葡聚糖酶/纤维素酶。UNIPROT:B6QR50 B6QR50_PENMQ公开了来自Penicilliummarneffei的推定的内切_1，6-β -葡糖苷酶。W02009033071公开了来自真菌/后生动物(Metazoa)组的真菌酶序列 SEQ ID NO: 170 (GENESEQP: Aff136308)。ΤΡ2003164284-Α 公开了来自米曲霉的内切葡聚糖酶(GENESEQP:ADZ51810)。US2008229451公开了来自粗糙脉孢霉的蛋白 SEQ:3080 (GENESEQP:AVA14940)。 在本领域存在对供用于纤维素材料的水解的新的具有内切葡聚糖酶活性的多肽的需求。 本专利技术提供了具有内切葡聚糖酶活性的多肽和编码所述多肽的多核苷酸。
技术实现思路
本专利技术涉及具有内切葡聚糖酶活性的分离的多肽，其选自下组: (a)多肽，其与SEQ ID NO:4的成熟多肽具有至少90%序列同一性，多肽，其与SEQID NO: 14的成熟多肽具有至少71%序列同一性，多肽，其与SEQ ID N0:18的成熟多肽或SEQ ID N0:24的成熟多肽具有至少65%序列同一性，多肽，其与SEQ ID NO: 10的成熟多肽或SEQ ID NO: 22的成熟多肽，SEQ ID NO: 2的成熟多肽具有至少70%序列同一性，多肽，其与SEQ ID N0:6, SEQ ID N0:8或SEQ ID NO: 16的成熟多肽具有至少75%序列同一性，多肽，其与SEQ ID NO: 12的成熟多肽具有至少76%序列同一性，或多肽，其与SEQ ID NO:20的成熟多肽具有至少80%序列同一性； (b)多肽，其由多核苷酸编码，所述多核苷酸在低、中等、中等-高、高、或非常高严格条件下与以下杂交:(i) SEQ ID NO: 3的成熟多肽编码序列，SEQ ID NO: 13的成熟多肽编码序列，SEQ ID NO:1的成熟多肽编码序列，SEQ ID NO: 5的成熟多肽编码序列，SEQ ID NO: 7的成熟多肽编码序列，SEQ ID NO: 11的成熟多肽编码序列，SEQ ID NO: 15的成熟多肽编码序列，SEQ ID NO:21的成熟多肽编码序列，SEQ ID NO:23的成熟多肽编码序列，或其cDNA序列，(ii)SEQ ID N0:9, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 19 的成熟多肽编码序列，或(iii)⑴或(ii)的全长互补物 ； (c)多肽，其由多核苷酸编码，所述多核苷酸与SEQ ID NO:3的成熟多肽编码序列具有至少90%序列同一性，多肽，其由多核苷酸编码，所述多核苷酸与SEQ ID N0:13的成熟多肽编码序列具有至少71%序列同一性，多肽，其由多核苷酸编码，所述多核苷酸与SEQID NO: 17的成熟多肽编码序列或SEQ ID N0:23的成熟多肽编码序列具有至少65%序列同一性，多肽，其由多核苷酸编码，所述多核苷酸与SEQ ID NO:9的成熟多肽编码序列，SEQ IDNO:21的成熟多肽编码序列，或SEQ ID NO:1的成熟多肽编码序列具有至少70%序列同一性，多肽，其由多核苷酸编码，所述多核苷酸与SEQ ID NO:5的成熟多肽编码序列，SEQ IDNO:7的成熟多肽编码序列或SEQ ID NO: 15的成熟多肽编码序列具有至少75%序列同一性，多肽，其由多核苷酸编码，所述多核苷酸与SEQ ID NO: 11的成熟多肽编码序列具有至少76%序列同一性，多肽，其由多核苷酸编码，所述多核苷酸与SEQ ID NO: 19的成熟多肽编码序列具有至少80%序列同一性； (d)SEQ ID NO:4的成熟多肽的变体，SEQ ID NO: 14的成熟多肽的变体，SEQ IDN0:2的成熟多肽的变体，SEQ ID N0:6的成熟多肽的变体，SEQ ID N0:8的成熟多肽的变体，SEQ ID NO: 10的成熟多肽的变体，SEQ ID NO: 12的成熟多肽的变体，SEQ ID NO: 16的成熟多肽的变体，SEQ ID NO: 18的成熟多肽的变体，SEQ ID NO:20的成熟多肽的变体，SEQID NO:22的成熟多肽的变体，或SEQ ID NO:24的成熟多肽的变体，其在一个或多本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种具有内切葡聚糖酶活性的分离的多肽，其选自下组：(a)多肽，其与SEQ ID NO:4的成熟多肽具有至少90％，例如至少91％，至少92％，至少93％，至少94％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％，至少99％，或100％序列同一性，多肽，其与SEQ ID NO:14的成熟多肽具有至少71％，例如至少75％，至少78％，至少80％，至少81％，至少82％，至少83％，至少84％，至少85％，至少86％，至少87％，至少88％，至少89％，至少90％，至少91％，至少92％，至少93％，至少94％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％，至少99％，或100％序列同一性，多肽，其与SEQ ID NO:18的成熟多肽或SEQ ID NO:24的成熟多肽具有至少65％，例如至少70％，至少75％，至少78％，至少80％，至少81％，至少82％，至少83％，至少84％，至少85％，至少86％，至少87％，至少88％，至少89％，至少90％，至少91％，至少92％，至少93％，至少94％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％，至少99％，或100％序列同一性，多肽，其与SEQ ID NO:10的成熟多肽，SEQ ID NO:22的成熟多肽，或SEQ ID NO:22的成熟多肽具有至少70％，例如至少75％，至少78％，至少80％，至少81％，至少82％，至少83％，至少84％，至少85％，至少86％，至少87％，至少88％，至少89％，至少90％，至少91％，至少92％，至少93％，至少94％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％，至少99％，或100％序列同一性，多肽，其与SEQ ID NO:6的成熟多肽，SEQ ID NO:8的成熟多肽，或SEQ ID NO:16的成熟多肽具有至少75％，例如至少78％，至少80％，至少81％，至少82％，至少83％，至少84％，至少85％，至少86％，至少87％，至少88％，至少89％，至少90％，至少91％，至少92％，至少93％，至少94％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％，至少99％，或100％序列同一性，多肽，其与SEQ ID NO:12的成熟多肽具有至少76％，例如至少78％，至少80％，至少81％，至少82％，至少83％，至少84％，至少85％，至少86％，至少87％，至少88％，至少89％，至少90％，至少91％，至少92％，至少93％，至少94％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％，至少99％，或100％序列同一性，或多肽，其与SEQ ID NO:20的成熟多肽具有至少80％，例如至少81％，至少82％，至少83％，至少84％，至少85％，至少86％，至少87％，至少88％，至少89％，至少90％，至少91％，至少92％，至少93％，至少94％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％，至少99％，或100％序列同一性；(b)多肽，其由多核苷酸编码，所述多核苷酸在低、中等、中等‑高、高、或非常高严格条件下与以下杂交：(i)SEQ ID NO:3的成熟多肽编码序列，SEQ ID NO:13的成熟多肽编码序列，SEQ ID NO:1的成熟多肽编码序列，SEQ ID NO:5的成熟多肽编码序列，SEQ ID NO:7的成熟多肽编码序列，SEQ ID NO:11的成熟多肽编码序列，SEQ ID NO:15的成熟多肽编码序列，SEQ ID NO:21的成熟多肽编码序列，或SEQ ID NO:23的成熟多肽编码序列，或其cDNA序列(ii)，SEQ ID NO:9的成熟多肽编码序列，SEQ ID NO:17的成熟多肽编码序列，或SEQ ID NO:19的成熟多肽编码序列，或(iii)(i)或(ii)的全长互补物；(c)多肽，其由多核苷酸编码，所述多核苷酸与SEQ ID NO:3的成熟多肽编码序列具有至少90％，例如至少91％，至少92％，至少93％，至少94％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％，至少99％，或100％序列同一性，多肽，其由多核苷酸编码，所述多核苷酸与SEQ ID NO:13的成熟多肽编码序列具有至少71％，例如至少75％，至少78％，至少80％，至少81％，至少82％，至少83％，至少84％，至少85％，至少86％，至少87％，至少88％，至少89％，至少90％，至少91％，至少92％，至少93％，至少94％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％，至少99％，或100％序列同一性，多肽，其由多核苷酸编码，所述多核苷酸与SEQ ID NO:17的成熟多肽编码序列或SEQ ID NO:23的成熟多肽编码序列具有至少65％，例如至少70％，至少75％，至少78％，至少80％，至少81％，...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘晔，张羽，段俊欣，汤岚，
申请(专利权)人：诺维信股份有限公司，
类型：发明
国别省市：美国;US