一种复方阿胶浆口服液的质量检测方法技术

本发明专利技术公开了一种复方阿胶浆口服液的质量检测方法，该方法采用高效液相色谱-串联三重四级杆质谱同时在线检测4味药材10种化合物。本发明专利技术通过大量实验优选出最佳的流动相组成，梯度洗脱程序、流速，质谱条件及相关化合物参数，经过方法学的考察，本发明专利技术提供的复方阿胶浆口服液质量检测方法，稳定性、选择性和重复性好，分析结果可靠；方法灵敏度高，可以较好实现复方阿胶浆口服液的定性、定量分析，从而客观、全面、准确地评价复方阿胶浆口服液的质量，对控制复方阿胶浆口服液的质量和保证临床疗效具有重要意义。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术公开了，该方法采用高效液相色谱-串联三重四级杆质谱同时在线检测4味药材10种化合物。本专利技术通过大量实验优选出最佳的流动相组成，梯度洗脱程序、流速，质谱条件及相关化合物参数，经过方法学的考察，本专利技术提供的复方阿胶浆口服液质量检测方法，稳定性、选择性和重复性好，分析结果可靠；方法灵敏度高，可以较好实现复方阿胶浆口服液的定性、定量分析，从而客观、全面、准确地评价复方阿胶浆口服液的质量，对控制复方阿胶浆口服液的质量和保证临床疗效具有重要意义。【专利说明】
本专利技术涉及复方中药的质量检测方法，具体的说，涉及。
技术介绍
复方阿胶浆口服液由山东东阿阿胶股份公司生产的由阿胶、红参、党参、熟地黄和山楂五味药材经现代工艺加工精制而成一种复方中药口服液，具有补益气血、健脾胃，滋补肝肾的功能，主要用于气血两虚，头晕目眩，心悸失眠，食欲不振及贫血。 复方阿胶浆口服液由下述原料药制成，阿胶5份、红参6份、熟地8份、党参12份、山楂5份，将上述各组分制成本专利技术药物的制备方法如下: ①按照上述用量称取原料中药材； ②上述原料中药材加适量水提取、浓缩、过滤，备用； ③阿胶加适量水溶化，加入步骤②的药液中，充分混匀，备用。 ④在步骤③中加入适量的白糖，加热使溶解，混匀，既得口服液。 步骤③所得混合溶液，还可加入药学上可接受的辅料和/或赋形剂，采用现代工艺还可制成临床可接受的任何剂型，如片剂、丸剂、胶囊剂、颗粒剂等。 作为经典的复方中药口服液，复方阿胶浆不仅用于补血，它还被广泛用于抗癌、抗肿瘤等其他疾病的辅助治疗中。 但是，目前复方阿胶浆口服液的质量标准检测方法仅限于总黄酮、总皂苷等指标，没有针对活性化学成分的定量检测方法，根本不能全面反应产品的质量，仅以此来控制中药复方制剂的质量不是十分合理；且目前市场上同类产品的竞争日益激烈，因此为了维护患者的利益，建立复方阿胶浆口服液中活性成分的检测方法具有重要意义。 基于上述需求，本专利技术的目的是弥补现有分析方法的不足，提供一种能同时检测复方阿胶浆中四味药材中10种化合物的定量分析方法，该方法可以客观、全面、准确的评价复方阿胶浆口服液的质量，对于控制复方阿胶浆口服液的质量和保证疗效具有重要的意义。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供。 复方阿胶浆口服液中含有红参、党参、地黄和山楂等中药成分，以上4味中药中含有绿原酸、党参炔苷、麦角留苷、黄芩苷、人参皂苷等活性成分。 液相色谱-质谱联用仪是液相色谱与质谱联用的仪器。它结合了液相色谱仪有效分离热不稳性及高沸点化合物的分离能力与质谱仪很强的组分鉴定能力，是一种分离分析复杂有机混合物的有效手段。为了能高效地同时检测以上不同药材中不同类别的化合物，减少检测的工作量，本专利技术经过大量实验对流动相组成、流动的洗脱梯度、流速和质谱源参数、化合物参数等进行了筛选。所述质量检测方法能同时检测并定量分析复方阿胶浆中的四味药材10中化合物，能够高效、准确地评价和控制复方阿胶浆的质量。 为了实现以上目的，本专利技术所提供的复方阿胶浆口服液的质量检测方法是采用高效液相色谱-串联三重四级杆质谱对样品进行分析，样品先去除蛋白，然后采用内标法进行分析，其内标物为柚皮苷和地高辛。 具体的说，本专利技术所述的复方阿胶浆口服液的质量检测方法，包括以下步骤: (I)乙腈沉淀蛋白预处理:用移液管准确移取1-1OmL复方阿胶浆口服液样品于离心管中，加入80%甲醇-水40-200 μ L和内标溶液20-100 μ L，振荡均匀；加体积为样品体积2-5倍的乙腈，振荡器混匀5-30min，静置，离心；移取上清液0.2_2mL，离心浓缩后加入30%甲醇-水0.2-2mL复溶；离心取上清液进样5 μ L分析； (2)高效液相色谱-串联三重四级杆质谱检测:梯度洗脱:进样量5 μ L，分析时间70分钟，色谱条件为:色谱柱:反相C18柱，流动相:Α相0.01-0.1 %甲酸-水，B相 0.01-0.1%甲酸-乙腈，流速为0.20-0.80mL/min ;然后进入质谱仪检测。 步骤⑴中，所述内标溶液为柚皮苷和地高辛溶液。其中地高辛溶液为低浓度内标液，为含量较低成分的作内标；柚皮苷溶液为高浓度内标液，为含量较高的成分做内标溶液； 柚皮苷和地高辛溶液的配置方法如下:取柚皮苷适量，精密称定，柚皮苷对照品浓溶液加80%甲醇-水稀释制成不同浓度柚皮苷对照品稀溶液；取地高辛适量，精密称定，地高辛对照品浓溶液加80%甲醇-水稀释制成不同浓度地高辛对照品稀溶液。 其中，柚皮苷溶液的浓度范围为0.02-0.5mg/mL ;优选0.2mg/mL ;地高辛溶液的浓度范围为 0.02-0.2mg/mL ;优选 0.05mg/mL。 优选的，所述乙腈的用量为样品体积的3倍。 步骤⑴中，所述静置是在4°C冰箱静置10_24h ； 步骤(I)中，所述离心的条件如下:4°C，2500rpm，10-30min ； 优选的，步骤⑴如下进行:用移液管准确移取2mL复方阿胶浆口服液样品于15mL离心管中，加入80%甲醇-水80 μ L和柚皮苷和地高辛内标溶液各40 μ L，振荡均匀；加乙腈6mL，振荡器混匀lOmin，于4°C冰箱静置12h ；4°C，2500rpm离心20min ;移取上清液 0.5mL,离心浓缩后加入30%甲醇-水ImL复溶；离心取上清液进样5 μ L分析； 步骤(2)中，流动相的流速为0.50mL/min ； 步骤(2)中，柱温为30°C ； 作为优化的色谱条件，本专利技术提供的复方阿胶浆口服液的质量检测方法，以上步骤(2)中，线性梯度洗脱程序为:0分钟流动相A:B的比例为85:15 ；20分钟流动相A:B的比例为75:25 ；35分钟流动相A:B的比例为68:32 ；45分钟流动相A:B的比例为65:35 ；70分钟流动相A: B的比例22:78。 绿原酸、党参炔苷、麦角留苷、黄芩苷、人参皂苷等10种化合物在复方阿胶浆口服液中含量较低，在质谱中响应差别较大，因此在液相色谱条件下分离和检测较为困难，本专利技术首先对流动相的组成进行了考察，根据实验结果，步骤(2)中，优选采用A、B两相分别为浓度0.02%甲酸的水溶液和0.02%甲酸的乙腈作为流动相的组成。 优选的，所述步骤(2)中高效液相色谱的梯度洗脱如下进行:进样量5 μ L，分析时间70分钟，色谱条件为:色谱柱:反相C18柱，流动相:Α相0.02%甲酸-水，B相0.02%甲酸-乙腈，梯度洗脱，流速为0.50mL/min，柱温:30°C ;其中线性梯度洗脱程序为:0分钟流动相A: B的比例为85:15 ; 20分钟流动相A: B的比例为75:25 ; 35分钟流动相A: B的比例为68:32 ；45分钟流动相A:B的比例为65:35 ；70分钟流动相A:B的比例22:78(也就是说线性梯度洗脱程序为:0-20min, A 相 85% -75% ；20-35min, A 相 75% -68% ;35_45min，A 相68% -65% ；45-70min, A 相 65% -22% )。 其中，本专利技术采用的高效液相色谱仪为Agilentl200高效液相色谱仪，配有四元栗，色谱柱为本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种复方阿胶浆口服液的质量检测方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)乙腈沉淀蛋白预处理：用移液管准确移取1‑10mL复方阿胶浆口服液样品于离心管中，加入80％甲醇‑水40‑200μL和内标溶液20‑100μL，振荡均匀；加体积为样品体积2‑5倍的乙腈，振荡器混匀5‑30min，静置，离心；移取上清液0.2‑2mL，离心浓缩后加入30％甲醇‑水0.2‑2mL复溶；离心取上清液进样5μL分析；(2)高效液相色谱‑串联三重四级杆质谱检测：梯度洗脱：进样量5μL，分析时间70分钟，色谱条件为：色谱柱：反相C18柱，流动相：A相0.01‑0.1％甲酸‑水，B相0.01‑0.1％甲酸‑乙腈，流速为0.20‑0.80mL/min；然后进入质谱仪检测。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：瞿海斌，周祥山，田守生，王春艳，沈丽娟，李民，张路，李士栋，
申请(专利权)人：山东东阿阿胶股份有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37