本发明专利技术涉及槐耳多糖蛋白及其制备方法和用途，本发明专利技术的槐耳多糖蛋白的单糖组成为岩藻糖、阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖、木糖及甘露糖，其质量比为3.2：2.0：33.5：5.5：1.2：50.4，该多糖蛋白的重均分子量为7.0×105～5.0×106Da，优选为2.69×106Da。本发明专利技术的多糖蛋白可以用于制备治疗肿瘤的药物。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术涉及，本专利技术的槐耳多糖蛋白的单糖组成为岩藻糖、阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖、木糖及甘露糖，其质量比为3.2：2.0：33.5：5.5：1.2：50.4，该多糖蛋白的重均分子量为7.0×105～5.0×106Da，优选为2.69×106Da。本专利技术的多糖蛋白可以用于制备治疗肿瘤的药物。【专利说明】
本专利技术涉及一种。
技术介绍
槐耳为多孔菌科真菌槐栓菌（Trametes robiniophila Murr.)的子实体，是一种 重要的民间药用真菌，在中国具有1600余年的用药历史。Ainsworth真菌分类系统将其归 属于真菌门、担子菌亚门、层菌纲、多孔菌科、栓菌属。槐耳子实体中等至较大，木栓质，无菌 柄，生于槐、刺槐等阔叶树的树干上，分布于河北、陕西、辽宁、湖南、广西、福建等地，是一种 可以导致树木心材腐朽的木腐菌。本品味苦、辛，性平无毒，有"治风"、"破血"、"益力"的 功效，临床上用于治疗多种疾病。由于老龄中国槐日益稀少，导致槐耳资源非常稀少，难以 满足临床用药需求，更难以满足槐耳相关产品的工业化生产需求。为了解决槐耳的资源问 题，启东盖天力药业有限公司经过长期的研究和实践，攻克了槐耳菌丝体大规模发酵难题， 实现了菌丝体的工业化生产，并以槐耳菌质(槐耳菌丝体发酵物）提取物为原料开发了槐耳 颗粒和槐杞黄颗粒等药品，满足了临床用药需求。 近年来大量的化学成分及药理活性研究资料证实槐耳菌质提取物的有效成分为 槐耳多糖蛋白，其主要功效是治疗或辅助治疗肿瘤性疾病。然而，目前对于槐耳多糖蛋白的 组成、结构及制备方法研究很少。在化学成分研究方面，仅粗多糖的单糖组成及比例分析有 文献报道，缺乏对其均一多糖的分离纯化和结构研究，如均一多糖蛋白所含的糖残基种类、 比例、在主链中的排列次序、蛋白部分所占的比例、组成等，而这些信息对于阐明槐耳菌质 真正的药效成分、槐耳多糖蛋白的作用机制及构效关系等至关重要。同样在槐耳多糖蛋白 的生物活性研究方面，多以粗多糖作为研究对象，缺乏应用均一多糖组分获得的体内、体外 药理学研究数据，导致无法深入了解槐耳多糖蛋白与人体免疫细胞或肿瘤细胞表面相关多 糖受体的作用过程，因而无法深入的阐明其作用原理。
技术实现思路
为了克服现有技术的缺陷，本专利技术提供一种。 本专利技术的上述目的是通过以下技术方案来实现的。 -方面，本专利技术提供一种槐耳多糖蛋白，该多糖蛋白的单糖组成为岩藻糖、阿拉伯 糖、半乳糖、葡萄糖、木糖及甘露糖，其质量比为3. 2 :2. 0 :33. 5 :5. 5 :1. 2 :50. 4。 优选地，所述多糖蛋白的重均分子量为7. OX 105?5. OX 106Da，优选为 2. 69X 106Da。 优选地，该多糖蛋白的制备方法包括如下步骤： (1)将浓度为2%?20% (质量/体积)，优选为8% (质量/体积）的槐耳菌质提取 物水溶液采用Sevage法去除游离蛋白，收集糖类部分； (2)将步骤（1)得到的糖类部分加入无水乙醇中，使其形成醇浓度为30%?80%(体 积)，优选为30%?50% (体积)，更优选为40% (体积）的糖溶液，离心，得到沉淀物； (3)将步骤（2)得到的沉淀物加水溶解，过滤，浓缩、透析收集袋内部分；以及 (4)使用离子交换柱色谱对步骤（3)收集到的袋内部分进行分离，其中使用的洗脱 液为水、〇. IMol/L?1. OM〇1/L NaCl水溶液，优选为0. IMol/L?0. 3Mol/L NaCl水溶液，更 优选为0. IMol/L的NaCl水溶液。 优选地，所述多糖蛋白的制备方法还包括对NaCl溶液洗脱得到的产品进行透析 除盐的步骤。 优选地，所述多糖蛋白的制备方法还包括采用Sepharose CL-6B琼脂糖凝胶柱对 透析除盐后的产品进行分离纯化的步骤。 另一方面，本专利技术提供一种上述多糖蛋白的制备方法，该制备方法包括如下步 骤： (1)将浓度为2%-20% (质量/体积)，优选为8% (质量/体积）的槐耳菌质提取物 水溶液采用Sevage法去除游离蛋白，收集糖类部分； (2)将步骤（1)得到的糖类部分加入无水乙醇中，使其形成醇浓度为30%?80%(体 积)，优选为30%?50% (体积)，更优选为40% (体积）的糖溶液，离心，得到沉淀物； (3)将步骤（2)得到的沉淀物加水溶解，过滤，浓缩、透析收集袋内部分；以及 (4)使用离子交换柱色谱对步骤（3)收集到的袋内部分进行分离，其中使用的洗脱 液为水、〇. IMol/L?1. 0Mol/L NaCl水溶液，优选为0. IMol/L?0. 3Mol/L NaCl水溶液，更 优选为0. IMol/L的NaCl水溶液，即得。 优选地，所述制备方法还包括对NaCl溶液洗脱得到的产品进行透析除盐的步骤。 优选地，所述制备方法还包括采用Sepharose CL-6B琼脂糖凝胶柱对透析除盐后 的产品进行分离纯化的步骤。 在一个具体实施方案中，所述制备方法包括如下步骤： ( 1)准确称取槐耳菌质提取物槐耳清膏300g，加入适量蒸馏水将其稀释为浓度约 为8% (质量/体积）的稀溶液，之后采用Sevage法除去游离蛋白，重复操作5次，收集糖类 部分； (2)向步骤（1)得到的槐耳菌质糖类部分中缓缓加入无水乙醇使其成为醇浓度为 40% (体积)的糖溶液，4°C静置24小时后，以3000转/分钟的速度离心10分钟，沉淀，得到 沉淀物； (3)称取适量步骤（2)得到的沉淀物，将其溶解于150ml蒸馏水中，过滤，减压浓缩 至体积50ml;透析收集袋内部分，以及 (4)使用DEAE-52离子交换柱色谱对步骤（3)收集到的袋内部分进行分离，先用 水洗脱，再采用〇. IMol/L NaCl溶液进行洗脱，0. IMol/L NaCl溶液洗脱部分在浓缩后进行 透析除盐，透析过程为对流水透析三天，蒸馏水透析两天；以及 (5)采用Sepharose CL-6B琼脂糖凝胶柱对步骤（4)得到的产品进行分离纯化，直 至高效液相色谱法检测为纯品为止。 又一方面，本专利技术提供上述多糖蛋白在制备治疗肿瘤的药物中的用途。 与现有技术相比，本专利技术至少具有以下有益效果： 本专利技术首次采用系统的水提取、醇沉淀、去游离蛋白、透析小分子、离子交换色谱 及凝胶分子排阻色谱分离的手段从槐耳菌质中分离获得了一个均一的多糖蛋白组分，并综 合的应用分子量分析、单糖组成及氨基酸组成分析、红外光谱分析及甲基化分析等手段，对 其进行了化学结构特点的确认，明确了其重均分子量、单糖组成及比例、氨基酸组成及比 例，以及所含糖残基的连接方式。这样一个结构特点明晰、分子量均一的槐耳菌质多糖组 分，是研究槐耳多糖有效成分及其生物活性的理想分子模型，为阐明槐耳多糖的免疫调节 及抗肿瘤有效成分和作用机制奠定了基础，本专利技术将为槐耳菌质深层次开发及相关制剂的 质量控制提供科学依据。 【专利附图】【附图说明】 以下，结合附图来详细说明本专利技术的实施方案，其中： 图1为槐耳菌质提取物槐耳清膏分级醇沉淀流程图； 图2为槐耳菌质提取物槐耳清本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种槐耳多糖蛋白，该多糖蛋白的单糖组成为岩藻糖、阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖、木糖及甘露糖，其质量比为3.2：2.0：33.5：5.5：1.2：50.4。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：徐无为，陆正鑫，
申请(专利权)人：启东盖天力药业有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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