一种利用HPLC指纹图谱鉴定果蔬真伪及农残含量的方法技术

本发明专利技术属于分析检测技术领域，具体涉及一种利用HPLC指纹图谱鉴定果蔬真伪及农残含量的方法。本发明专利技术首先以培植过程中不使用任何农药、化肥、植物生长调节剂的果蔬作为标准样品，对其进行高效液相色谱测定，得到标准指纹图谱，然后利用“指纹图谱相似度评价系统的操作规范”软件，对标准样品和待测样品的指纹图谱进行匹配，求出标准样品与待测样品的相似度，进而确定待测果蔬真伪及农残含量，本发明专利技术所建立的HPLC色谱指纹图谱可对被测样品所有化学物质进行整体表征，以指纹图谱的形式，向人们提供被测样品的各种信息，突破了人们一直沿用的多指标的检测方法，具有稳定、精密度高、重现性好的特点。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术属于分析检测
，具体涉及一种利用HPLC指纹图谱鉴定果蔬真伪及农残含量的方法。本专利技术首先以培植过程中不使用任何农药、化肥、植物生长调节剂的果蔬作为标准样品，对其进行高效液相色谱测定，得到标准指纹图谱，然后利用“指纹图谱相似度评价系统的操作规范”软件，对标准样品和待测样品的指纹图谱进行匹配，求出标准样品与待测样品的相似度，进而确定待测果蔬真伪及农残含量，本专利技术所建立的HPLC色谱指纹图谱可对被测样品所有化学物质进行整体表征，以指纹图谱的形式，向人们提供被测样品的各种信息，突破了人们一直沿用的多指标的检测方法，具有稳定、精密度高、重现性好的特点。【专利说明】一种利用HPLC指纹图谱鉴定果蔬真伪及农残含量的方法
本专利技术属于分析检测
，具体涉及一种利用HPLC指纹图谱鉴定果蔬真伪 及农残含量的方法。
技术介绍
果蔬是人们每天必须消费的食品之一，目前，为了增加果蔬的产量，不可避免的会 使用到农药制剂，从而导致果蔬中农药残留，容易引起食物中毒，特别对于热销的区域性特 色果蔬，不法商贩受利益的驱使，假冒伪劣产品也越来越多，而且由于片面的追求产量，大 量的喷洒农药、激素等，致使产品质量下降，严重危害了食品安全。 目前，在检测领域中，人们一直采用多指标检测方法，该方法只有靠被检测物的标 准样品，对检测的目标化合物进行定性定量，如果没有标准样品的农药残留则无法进行检 测。目前农药的标准样品都是常见的被人们公认的几种农药，判断果蔬是否安全，如果该果 蔬使用了一种我们不熟悉的一种新农药或激素或植物生长调节剂等，会无法检出，因此仅 以人们常见几种农药的检测，显然不够全面和公正。
技术实现思路
针对上述问题，本专利技术提出了一种利用HPLC指纹图谱鉴别果蔬真伪农残含量的 方法，该方法具有稳定、精密度高、重现性好的特点。 其具体步骤为： (1)在标准样品的原产地对标准样品进行培植，所述培植过程中不使用任何农药、 化肥、植物生长调节剂，追溯生长的全过程，以保证整个生长过程无任何污染； (2)将获得的标准样品洗净、绞碎； (3)准确称取绞碎的标准样品25. 0g于锥形瓶中，加入50mL分析纯乙腈，高速匀浆 2min，过滤到盛有5g氯化钠的具塞量筒中，剧烈震荡后静置30min ; (4)用移液管取30mL乙腈层（上层）于圆底烧瓶中，在40°C条件下旋转蒸发至干， 加入1. 5mL色谱甲醇，涡旋溶解后，加入lmL水混匀； (5)将上述液体过0· 22um有机滤膜于进样小瓶中，得标准样品溶液，上HPLC-PDA， 测定HPLC标准指纹图谱； 所述的HPLC标准指纹图谱的色谱条件为：仪器：HPLC-Waters2695, PDA -Waters2996,色谱柱：TechMateC18-ST，5um，120A，4. 6*250nm，柱温：35 度，进样量：10uL， 流速：1.0mL/min，波长：251nm，流动相为乙腈-0. 1%磷酸水溶液，梯度洗脱，洗脱程序为： Omin - 20min - 40min - 50min - 55min，流动相中乙臆的体积百分比为6% - 15% - 24% -6%- 6% ;在此条件下分析标准样品溶液，得到标准样品指纹图谱； (6)对12批标准样品建立了 HPLC指纹图谱，通过分析比较，确定标准样品共有特 征峰； (7)用待测样品代替标准样品，重复上述步骤（2)-(5)，得到待测样品指纹图谱； (8)将标准样品指纹图谱与待测样品指纹图谱匹配，利用软件数据处理，求出相似 度，进行对比； 所述的软件为中药色谱指纹图谱相似度评价系统的操作规范。 本专利技术所述的标准样品的培植过程中不使用任何农药、化肥、植物生长调节剂，追 溯生长的全过程，以保证整个生长过程无任何污染，为后续的鉴定提供了标准对照。 为了把标准样品中的各种物质提取到乙腈溶剂中，将标准样品洗净绞碎后，加入 乙腈，高速匀浆；由于标准样品中含有一定的水分，加入乙腈后，为了保证水与乙腈更好地 分层，需要向其中加入氯化钠，改变水溶液的极性，使得水与乙腈能够更好的分层。 为了便于转相并且为后续创造一个适合的色谱条件，将上述的乙腈溶液减压真空 浓缩，真空度为〇. 08-0. IMPa。 为了保证减少指纹图谱中的杂质峰的量，并且减少杂质，提高色谱柱的寿命，将上 述真空浓缩后的体系中加入色谱甲醇以及水混匀，过〇. 22um有机滤膜。 为了保证结果的准确性和全面性，对12批标准样品建立了 HPLC指纹图谱，通过分 析比较，确定标准样品共有特征峰。 同理，重复上述步骤（2)-(5)，得到待测样品指纹图谱，将标准样品指纹图谱与待 测样品指纹图谱匹配，利用"中药色谱指纹图谱相似度评价系统的操作规范"软件数据处 理，求出相似度，相似度越接近1即相似度越高。相似度在0. 9以上，即可视为是同一类物 质。 若相似度小于0. 90,本领域技术人员可以采用现有技术中常用的红外光谱测定方 法对标准样品和待测样品的红外进行测定，进行比对验证。 本专利技术所述的标准样品选自潍县萝卜或青州蜜桃或莱阳梨或沾化冬枣或韭菜。 所述的潍县萝卜有13个共有特征峰，其保留时间依次为3. 2分钟、4. 0分钟、4. 3 分钟、6. 1分钟、7. 2分钟、9. 1分钟、13. 4分钟、15. 2分钟、20分钟、29. 1分钟、33. 8分钟、 35. 6分钟、42. 5分钟。 所述的青州蜜桃有15个共有特征峰，其保留时间依次为2. 7分钟、11. 6分钟、12. 8 分钟、16. 8分钟、19. 5分钟、21. 5分钟、22. 3分钟、28. 1分钟、31. 8分钟、32. 0分钟、33. 0分 钟、35. 8分钟、36. 4分钟、37. 1分钟、37. 8分钟。 所述的莱阳梨有18个共有特征峰，其保留时间依次为2. 7分钟、3. 0分钟、3. 8分 钟、11. 9分钟、16. 2分钟、20. 3分钟、21. 0分钟、22. 0分钟、29. 8分钟、31. 88分钟、33分钟、 36. 8分钟、37. 5分钟、38. 2分钟、38. 5分钟、43. 0分钟、43. 2分钟、51. 3分钟。 所述的沾化冬枣有17个共有特征峰，其保留时间依次为19. 5分钟、20. 5分钟、21 分钟、23. 5分钟、25. 3分钟、26. 5分钟、26. 8分钟、29. 2分钟、30分钟、31. 5分钟、32. 5分钟、 34. 5分钟、35分钟、40. 9分钟、43. 8分钟、47. 9分钟、48. 5分钟。 所述的韭菜有17个共有特征峰，其保留时间依次为2. 89分钟、3. 0分钟、3. 9分 钟、5. 2分钟、14. 2分钟、20. 0分钟、26. 1分钟、26. 5分钟、27. 2分钟、27. 6分钟、29. 8分钟、 31. 2分钟、33. 2分钟、35. 3分钟、37. 8分钟、40. 2分钟、45. 5分钟。 综上所述，本专利技术所建立的HPLC色谱指纹图谱可对被测样品所有化学物质进行 整体表征，以指纹图谱的形式，向人们提供被测样品的本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种利用HPLC指纹图谱鉴定果蔬真伪及农残含量的方法，其特征在于，其具体步骤为：(1)在标准样品的原产地对标准样品进行培植，所述培植过程中不使用任何农药、化肥、植物生长调节剂，追溯生长的全过程，以保证整个生长过程无任何污染；(2)将获得的标准样品洗净、绞碎；(3)准确称取绞碎的标准样品25.0g于锥形瓶中，加入50mL分析纯乙腈，高速匀浆2min，过滤到盛有5g氯化钠的具塞量筒中，剧烈震荡后静置30min；(4)用移液管取30mL上层乙腈层于圆底烧瓶中，在40℃条件下旋转蒸发至干，加入1.5mL色谱甲醇，涡旋溶解后，加入1mL水混匀；(5)将上述液体过0.22um有机滤膜于进样小瓶中，得标准样品溶液，上HPLC‑PDA，测定HPLC标准指纹图谱；所述的HPLC标准指纹图谱的色谱条件为：仪器：HPLC‑Waters2695，PDA–Waters2996，色谱柱：TechMateC18‑ST，5um，120A，4.6*250nm，柱温：35度，进样量：10uL，流速：1.0mL/min，波长：251nm，流动相为乙腈‑0.1％磷酸水溶液，梯度洗脱，洗脱程序为：0min→20min→40min→50min→55min，流动相中乙腈的体积百分比为6％→15％→24％→6％→6％；在此条件下分析标准样品溶液，得到标准样品指纹图谱；(6)对12批标准样品建立了HPLC指纹图谱，通过分析比较，确定标准样品共有特征峰；(7)用待测样品代替标准样品，重复上述步骤(2)‑(5)，得到待测样品指纹图谱；(8)将标准样品指纹图谱与待测样品指纹图谱匹配，利用软件数据处理，求出相似度，进行对比；所述的软件为中药色谱指纹图谱相似度评价系统的操作规范。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：李桂凤，万松军，张政军，左金琼，王雪蕊，王欠欠，邱法武，
申请(专利权)人：山东绿原农业科技研究院，
类型：发明
国别省市：山东;37