本发明专利技术公开了一种新型黑曲霉（Aspergillus niger）菌株FS-UV1，保藏编号CCTCC NO:M2013553。该菌株对黄曲霉毒素具有良好的降解效果，降解率达到95.3%；较原菌株提高了37.8%；对玉米赤霉烯酮的降解效率达到93%，较原菌株提高了7%，对呕吐毒素的降解率达到52.6%，较原菌株提高了9.5%。大鼠实验证明该新型菌株是一种无毒副作用的安全有效的降解方法。
【技术实现步骤摘要】
一种黑曲霉菌株及其在多种真菌毒素降解中的应用
本专利技术涉及一种黑曲霉，特别是一种诱变获得的，对黄曲霉毒素B1具有良好降解效果的菌株。
技术介绍
真菌毒素对食品尤其是对粮食的危害极大，真菌可在粮食作物田间生长及收获后储藏过程中毒素的生物合成及代谢。据联合国粮农组织估计,全世界谷物供应25％受真菌毒素污染而不能食用，对真菌毒素的防治成为保证食品安全刻不容缓的头等大事。而微生物防治具有安全、高效、经济、应用性强、环境友好型等优势，成为近年来备受推崇的防治方法。而真菌毒素中危害较大当属黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮以及呕吐毒素。自从1960年英国爆发了火鸡的黄曲霉毒素中毒事件以来，国内外对黄曲霉毒素开展了大量深入而广泛的研究。由于真菌的繁殖速度快、孢子的数量大、散布远，因此粮食等农作物在种植、收获、贮藏和加工过程中极易受到产毒真菌和黄曲霉毒素的污染。在已发现的18种黄曲霉毒素中，以AFB1的致畸性、致突变性和致癌性最强。早在1993年，AFB1已被国际癌症研究机构定为人类I类致癌物。研究表明多种细菌对黄曲霉毒素具有生物防治作用。如杆菌、伯克霍尔德菌、链霉菌、链球菌和乳酸菌等均可抑制产毒霉菌的生长，产毒作用。畅晓渊发现从埃及传统奶酪中分离出的扩展短杆菌对黄曲霉生长有较强的抑制作用；从泰国发酵豆酱中分离出的地衣芽胞杆菌和短小杆菌不仅能抑制黄曲霉生长，而且还能降解74～85％的AFB1；Cho从韩国酱油中分离出一株短小芽孢杆菌，发现该菌分泌的伊枯草素能抑制产毒黄曲霉和寄生曲霉的生长；高雅从豆瓣中分离出一株能抑制黄曲霉生长的枯草芽孢杆菌；章挺也从枯草芽孢杆菌中分离出抑制黄曲霉孢子萌发的表面活性肽和杆菌霉素D。因此分离出一种对黄曲霉毒素具有良好防治及降解效果的菌株具有十分重要的意义。紫外诱变是应用最广泛的一种物理诱变方法，郭继平采用紫外诱变对米曲霉K61菌株进行改造,最终筛选出一株蛋白酶活力高且遗传性能稳定的突变株Y29；潘涛在紫外诱变过程中筛选到一株稳定高产菌株10min-5,柠檬酸产量增加了5.33％；赵琼等以木醋杆菌(Acetobacterxylinum)C5为出发菌株,对其进行紫外诱变,将照射时间3min作为紫外诱变剂量,经过初筛和复筛,获得1株细菌纤维素高产菌株A.xylinumC544,该突变株的产量是原始菌株的1.5倍；可见菌株经过诱变后往往可以表现出比原菌株更加优良的特性。因而，对菌株进行诱变筛选选育出对黄曲霉毒素降解效果较好的菌株具有良好的应用前景。
技术实现思路
本专利技术提供了一种新型黑曲霉(Aspergillusniger)，已于2013年11月6日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCCNO:M2013553；以其18SrDNA全序列为基础的系统发育树如说明书附图1所示。本专利技术提供了一种诱变黑曲霉，该菌株对黄曲霉毒素B1具有良好的降解效果，降解率达到95.3％；较原菌株提高了37.8％；对玉米赤霉烯酮的降解效率达到93％，较原菌株提高了7％，对呕吐毒素的降解率达到52.6％，较原菌株提高了9.5％。所述黑曲霉保藏条件如下：从生长良好的固态平板培养基PDA上接取3环诱变黑曲霉到发酵培养基中，28℃摇床(200rpm)培养36h，取0.65mL移入含有0.3mL无菌甘油的甘油管中，放入-70℃超低温冰箱保存。所述固态平板培养基PDA为(w/v)：马铃薯300g、葡萄糖20g、琼脂20g、氯霉素0.1g、蒸馏水1L、自然pH、121℃高压灭菌15min。所述液体发酵培养基PDB为(w/v)：马铃薯300g、葡萄糖20g、蒸馏水1L，自然pH，121℃高压灭菌15min。所述诱变黑曲霉的培养条件为：将已保藏甘油管的诱变黑曲霉接入液体培养基，28℃，130rpm，摇床培养36h。所述黑曲霉的获得方法为：将从酱醅中筛选出来的黑曲霉亲代接种到PDA固体培养基中，28℃130rpm，培养36h，取50ml生理盐水洗下孢子，振荡均匀，形成单孢子悬浮液,制成108CFU/ml的菌悬液。取上述孢子悬液5ml,经200w紫外照射5min，微波处在高档时加热80s。将诱变后的菌株接种于PDB培养基，从菌落中挑取适当孢子按上述方式制成108CFU/ml菌悬液，接种到30ml培养基中，28℃130rpm，摇床培养36h。吸取10ul发酵液于酪蛋白平板上进行复筛。将上述复筛后菌株及原菌株接种到30ml培养基中，28℃130rpm，摇床培养36h。向发酵液中加入0.05ppmAFB1、0.5ppm玉米赤霉烯酮及0.5ppm呕吐毒素，比较原菌株及新型诱变菌株对AFB1、玉米赤霉烯酮及呕吐毒素的降解效果。本专利技术是从酱醅中分离得到的经紫外微波复合诱变的对AFB1具有良好降解效果的新型菌株，对黄曲霉毒素B1的降解率达到95.3％，较原菌株对AFB1提高了37.8％；对玉米赤霉烯酮的降解效率达到93％，较原菌株提高了7％；对呕吐毒素的降解率达到52.6％，较原菌株提高了9.5％。诱变后的菌株可应用食品，农产品，粮食以及饲料等领域中多种真菌毒素的降解中，达到降低真菌毒素尤其是黄曲霉毒素B1含量的目的。附图说明图1：新型黑曲霉FS-UV1的系统发育树图2：新型黑曲霉FS-UV1对AFB1、玉米赤霉烯酮、呕吐毒素的降解效果图3：新型黑曲霉FS-UV1的酶活性图4：新型黑曲霉FS-UV1降解玉米浆中毒素大鼠实验切片图A：饲料组；B：标准品组；C：花生粕组；D：实验组。具体实施方式实施例1：酱醅中黑曲霉的筛选方法从发酵4d后的酱中用含β-环糊精的PDA培养基定性地分离出酱醅中的非产毒丝状真菌，然后用ELISA方法对所分离菌株的产毒能力进行定量分析，最后筛选出非产毒的霉菌。对能抑制黄曲霉产毒菌进行复筛，筛选出能降解AFB1的菌株，降解率为58％。筛选出AFB1的防治菌株。通过菌落特征观察和个体形态观察，并将菌株的18SrDNA与GenBank数据库(http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi)中已知序列对比，发现其与黑曲霉(Aspergillusniger)同源性达100％。结合菌株的形态特征和分子生物学鉴定，可确定菌株为黑曲霉。本菌株保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCCM2013703。实施例2：紫外微波复合诱变黑曲霉制备方法取上述孢子悬液5ml,经200w紫外照射5min，微波处在高档时加热80s。将诱变后的菌株接种于PDB培养基，从菌落中挑取适当孢子按上述方式制成108CFU/ml菌悬液，接种到30ml培养基中，28℃130rpm，摇床培养36h。吸取10ul发酵液于酪蛋白平板上进行复筛。通过菌落特征观察，个体形态观察，并将菌株的18SrDNA与GenBank数据库(http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi)中已知序列对比，发现其与黑曲霉(Aspergillusniger)同源性达100％。结合菌株的形态特征和分子生物学鉴定，可确定菌株为黑曲霉。新型黑曲霉FS-UV1的进化树如图1。本菌株已于2013年11月6日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCCNO:M2013553，保藏地址为中国武汉武汉大学。实施例3：新型黑曲霉对多种真菌毒素本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种新型黑曲霉(Aspergillus niger)FS‑UV1，于2013年11月6日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCC NO:M2013553，保藏地址为中国武汉武汉大学。
【技术特征摘要】
1.一种黑曲霉(Aspergillusniger)FS-UV1，于2013年11月6日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCCNO:M2013553，保藏地址为中国武汉，武汉大学。2.根据权利要求1所述的黑曲霉应用于降解毒素污染的...
【专利技术属性】
技术研发人员：孙秀兰，张晓雪，李耘，张银志，钱和，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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