本实用新型专利技术公开一种基于M13噬菌体快速检测赭曲霉毒素A的免疫层析试纸，试纸吸附层包括吸附纤维层、金标抗体纤维层、纤维素膜层和吸水材料层，纤维素膜层上设有用展示OTA模拟表位的M13噬菌体印制的检测印迹以及用羊抗小鼠IgG抗体溶液的对照印迹；金标抗体为胶体金标记的OTA单克隆抗体或多克隆抗体。本实用新型专利技术实现了基于M13噬菌体的免疫层析技术在快速检测OTA残留中的应用，用展示有OTA模拟表位的M13噬菌体取代了传统试纸条检测印记上印制的OTA偶联物，避免了OTA偶联物对于试纸生产者、实验人员和环境的危害；该试纸检测的特异性强、灵敏度高，检测简便、直观、准确，成本低，适用范围广。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本技术公开一种基于M13噬菌体快速检测赭曲霉毒素A的免疫层析试纸，试纸吸附层包括吸附纤维层、金标抗体纤维层、纤维素膜层和吸水材料层，纤维素膜层上设有用展示OTA模拟表位的M13噬菌体印制的检测印迹以及用羊抗小鼠IgG抗体溶液的对照印迹；金标抗体为胶体金标记的OTA单克隆抗体或多克隆抗体。本技术实现了基于M13噬菌体的免疫层析技术在快速检测OTA残留中的应用，用展示有OTA模拟表位的M13噬菌体取代了传统试纸条检测印记上印制的OTA偶联物，避免了OTA偶联物对于试纸生产者、实验人员和环境的危害；该试纸检测的特异性强、灵敏度高，检测简便、直观、准确，成本低，适用范围广。【专利说明】基于M13噬菌体检测赭曲霉毒素 A的免疫层析试纸
本技术涉及一种免疫层析试纸，特别是涉及一种用于快速检测赭曲霉毒素 A 的免疫层析试纸。
技术介绍
赭曲霉毒素（Ochratoxin)是曲霉属和青霉属的某些菌株产生的次级代谢产物，它 包含七种结构类似的化合物，其中毒性最大、分布最广、产毒量最高、对农作物污染最重、与 人类健康关系最密切的是赭曲霉毒素 A (Ochratoxin Α，0ΤΑ)，其作用的靶器官主要是肾脏 和肝脏，是一种强烈的肾、肝毒素，并具有较强的致癌、致畸和致突变作用。由于0ΤΑ广泛存 在于农产品及畜产品，且能经食物链进入人体，对人类生命健康造成危害，因此，如何实现 对0ΤΑ的快速、准确检测意义重大。 目前，对0ΤΑ检测方法有化学分析法、仪器分析法和免疫学分析法等。其中免疫学 分析法以敏感度高、检出限低的优势在0ΤΑ定性、定量检测中广泛应用，实现了 0ΤΑ快速、简 便、高灵敏检测，对保障我国农产品安全有着积极意义。但是，免疫学检测方法是建立在以 标记毒素或偶联毒素为竞争抗原基础上的有毒检测体系，存在毒素标品昂贵，对生产及操 作人员的健康有害，以及偶联反应重复性差等缺陷，制约了它的应用和推广。 近年来，利用噬菌体随机肽库技术得到的模拟表位肽替代毒素作为竞争抗原，建 立的无毒检测体系，推动了 0ΤΑ免疫学检测的快速发展。噬菌体随机肽库技术是以大量随 机编码的多肽序列插入噬菌体展示载体，形成噬菌体展示文库。每个噬菌体粒子或者噬菌 体只展示一种序列的外源肽链，不同的噬菌体粒子或者噬菌体展示不同序列的外源肽链。 免疫试纸法具有半定量和一定的定量能力，可以提供待测物的初步信息，该法灵 敏度高，分析过程简单，用作0ΤΑ的检测有独特优势，是需要优先发展的检测技术。
技术实现思路
本技术要解决的技术问题：针对现有技术存在的不足，提供一种安全、特异、 灵敏、简便、快速检测赭曲霉毒素 A的免疫层析试纸。 本技术的技术方案： -种基于M13噬菌体检测赭曲霉毒素 A的免疫层析试纸，包括底层的支撑层、中间 层的吸附层和固定在吸附层上的保护层，吸附层从测试端依次为吸附纤维层、金标抗体纤 维层、纤维素膜层及手柄端的吸水材料层，在纤维素膜层上设有用展示0ΤΑ模拟表位的M13 噬菌体印制的隐形检测印迹，还设有用羊抗或兔抗小鼠 IgG或羊抗兔IgG抗体溶液印制的 隐形对照印迹；所述金标抗体纤维层采用吸附金标抗体的玻璃纤维棉制成，金标抗体采用 胶体金纳米颗粒标记的0ΤΑ的单克隆抗体或多克隆抗体。 所述0ΤΑ模拟表位的多肽序列为MPLWXDL，X为任意氨基酸。 所述吸附纤维层用玻璃纤维棉、尼龙膜、聚偏二氟乙烯膜或聚酯膜制成；吸水材料 层用吸水滤纸制成，支撑层用不吸水的韧性材料制成；纤维素膜层用硝酸纤维素膜、纯纤维 素膜或羧化纤维素膜制成。 所述隐形检测印迹和隐形对照印迹为平行排列的" I I "直线式印迹、"十十"字型 排列印迹、"-Γ-Γ"字型排列印迹、"-，，字型排列印迹、" I-卜"字型排列印迹或"-M "字 型排列印迹。 所述保护层为覆盖在吸附纤维层、金标抗体纤维层及吸水材料层上的保护膜，在 吸附纤维层与金标抗体纤维层交界处对应的保护膜上印制有样品标记线，该标记线偏向吸 附纤维层一侧0. 3-0. 7cm。 本技术的积极有益效果： (1)本技术实现了基于M13噬菌体的免疫层析技术在快速检测0ΤΑ残留中的 应用，该试纸特点在于其用展示有0ΤΑ模拟表位的M13噬菌体取代了传统试纸检测印记上 印制的0ΤΑ偶联物，避免了 0ΤΑ偶联物对于试纸生产者、实验人员和环境的危害。 (2)特异性强，灵敏度高。本技术试纸以胶体金标记高亲和力的单克隆抗体或 多克隆抗体为基础制备而成，金标抗体中金颗粒与抗体分子之间无共价键形成，二者通过 异性电荷间的范德华力相结合，胶体金标记对抗体的特异性及亲和力影响很小，且具有较 高的标记率。因此，该试纸具有较强的特异性和较高的灵敏度，可检测到5ng/ml的微量赭 曲霉毒素 A。 (3)安全性好。该试纸中展示有0ΤΑ模拟表位的M13噬菌体具有无毒无害的特点， 使得基于M13噬菌体组装的试纸对于试纸生产者、检测者和环境均无任何危害，安全。 (4)简便、快速。使用本技术试纸，无需其他任何试剂和仪器，可现场操作。只 需将试纸插入被检样品中ΚΓ20秒，取出后5分钟内即可判定检测结果。 (5)结果显示形象、直观、准确。本技术试纸以显示红色" | "和" | | "（或 "十"、"丁"、"1"、" 印迹作为检测的阳性和阴性标记，即在纤维素膜上显示一条 红色" I "印迹，表示被检样品中含有0ΤΑ;显示两条红色" | | "印迹，表示被检样品中不含 0ΤΑ。此结果可用肉眼直接观测，判定形象、直观、准确，简单明了，不易出现假阳性和假阴性 等人为误判。 (6)节省费用。使用该试纸无需另配仪器和其他试剂，可随时随地进行检测，费用 低廉，能节省大量贵重仪器及设备费用。 (7)适用范围广，便于推广应用。本技术实现了基于M13噬菌体的免疫层析技 术在快速检测0ΤΑ中的应用，使0ΤΑ的检测无本底干扰；操作简便，能满足不同层次人员的 需要，包括专业化验、海关检疫、卫生检疫、质量监测、畜产品加工、养殖户以及消费者个人 等。本技术在保障食品安全、保护消费者健康方面具有极其重要的意义，将具有明显的 经济效益和社会效益。 【专利附图】【附图说明】 图1为本技术的免疫层析试纸的结构示意图。 图2为图1中免疫层析试纸的俯视结构示意图。 图中，1为支撑层，2为吸附纤维层，3为金标抗体纤维层，4为纤维素膜层，5为吸水 材料层，6为隐形检测印记，7为隐形对照印记，8-1为测试端保护膜，8-2为手柄端保护膜，9 为样品标记线。 【具体实施方式】 本技术试纸的制备过程包括：0ΤΑ单克隆或多克隆抗体的制备、展示有OTA模 拟表位的M13噬菌体的筛选、金标抗体纤维层的制备、吸附纤维层的制备、纤维素膜层的制 备和试纸的组装等步骤。 1、0ΤΑ单克隆抗体或多克隆抗体的制备 单克隆抗体的制备：包括0ΤΑ人工抗原的制备、免疫动物(小鼠)、细胞融合、单克 隆抗体的师选、单克隆抗体的制备；多克隆抗体的制备：包括0ΤΑ人工抗原的制备、免疫动 物（白兔)、多克隆抗体的筛选和多克隆抗体的制备。 本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种基于M13噬菌体检测赭曲霉毒素A的免疫层析试纸，包括底层的支撑层、中间层的吸附层和固定在吸附层上的保护层，吸附层从测试端依次为吸附纤维层、金标抗体纤维层、纤维素膜层及手柄端的吸水材料层，其特征在于：在纤维素膜层上设有用展示OTA模拟表位的M13噬菌体印制的隐形检测印迹，还设有用羊抗或兔抗小鼠IgG或羊抗兔IgG抗体溶液印制的隐形对照印迹；所述金标抗体纤维层采用吸附金标抗体的玻璃纤维棉制成，金标抗体采用胶体金纳米颗粒标记的OTA的单克隆抗体或多克隆抗体。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：胡骁飞，张改平，邢广旭，王耀，王方雨，赵东，邓瑞广，
申请(专利权)人：河南省农业科学院，
类型：新型
国别省市：河南;41
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