本发明专利技术属于生物技术和医学领域，具体涉及一种PRL-1基因在制备治疗和/或诊断肝癌产品中的应用。本发明专利技术证明PRL-1在HCC组织中频繁高表达(81％)，PRL-1表达升高与HCC病人的侵袭表型及更差预后明显相关(P<0.05)。外源过表达PRL-1明显增加肝癌细胞的迁移和侵袭。并且PI3K/AKT/GSK3β信号通路通过抑制E-cadherin的表达介导PRL-1的致癌功能。此外，脉管癌栓中PRL-1的蛋白水平明显高于原发病灶。因此PRL-1基因可作为诊断肝癌的特异标志基因，使肝癌诊断更加准确、快速。本发明专利技术PRL-1基因为防治肝癌提供了新的治疗靶点。
【技术实现步骤摘要】
PRL-1基因在制备诊断和/或治疗肝癌产品中的应用
[〇〇〇1] 本专利技术属于生物技术和医学领域，具体涉及一种PRL-1基因在制备诊断和/或治 疗肝癌产品中的应用。
技术介绍
肝细胞肝癌（hepatocellular carcinoma,HCC)是世界第五大肿瘤，在癌症相关死 因顺位中占第三位。超过75%的肝细胞癌病人在术后5年内复发和/或转移，成为这部分 病人死亡的主要原因。可逆性的蛋白酪氨酸磷酸化对于调节各种信号通路（包括参与肿瘤 细胞粘附、侵袭和转移的信号通路）非常关键，它的平衡由蛋白酪氨酸激酶（PTKs)和蛋白 酪氨酸磷酸酶（PTPs)两大家族调控。与PTKs大家族相比，PTPs超家族还未得到广泛研究。 PTPs的肝再生磷酸酶（PRLs)亚家族是一类独特的法尼基化磷酸酶，因其成员PRL-3在结直 肠癌转移灶中高表达而受到广泛关注。 在PRLs亚家族成员中，PRL-3研究得最为透彻，且其表达升高与多种肿瘤（包括 结直肠癌、乳腺癌、胃癌）的进展和转移相关。PRL-3有望成为潜在的肿瘤预后标志物和治 疗靶点。与PRL-3对比，PRLs的另外两个成员，PRL-1 (又名PTP4al)和PRL-2研究得较少。 尽管PRL-1磷酸酶最先在再生肝组织中被发现，然而其在肿瘤细胞尤其是肝癌细胞中的功 能及其机制仍十分不清楚。
技术实现思路
本专利技术的首要目的在于克服现有技术的缺点和不足，提供一种PRL-1基因在制备 诊断肝癌产品中的应用。 本专利技术的另一目的在于提供上述基因在制备治疗肝癌产品中的应用。 本专利技术的目的通过下述技术方案实现： -种PRL-1基因在制备诊断肝癌产品中的应用，所述的诊断肝癌产品包括：通过 RT-PCR、实时定量PCR、免疫检测、原位杂交或基因芯片诊断肝癌的产品； 所述的通过RT-PCR诊断肝癌的产品包括至少一对特异扩增PRL-1基因的引物； [〇〇〇9] 所述的特异扩增PRL-1基因的引物优选为引物PRL-1-⑶S-F和引物 PRL-1-CDS-R : 引物 PRL-1-CDS-F : 5 ' -GGAAGATCTGCCAACATGTACCCATACGATGTTCCAGATTACGCTATGGCTCGAATGAACCG C-3,； 引物 PRL-1-CDS-R : 5' -CGGCTCGAGTTATTGAATGCAACAGTTGTTTCTATGAC-3' ； 所述的通过实时定量PCR诊断肝癌的产品包括至少一对特异扩增PRL-1基因的引 物； 所述的特异扩增PRL-1基因的引物优选为引物PRL-1-F和引物PRL-1-R : 引物 PRL-l-F : 5，-ACCAATGCGACCTTAAACAAA-3，； 引物 PRL-l-R :5,-AATCTGGTTGGATGGTGGTG-3,； 所述的通过免疫检测诊断肝癌的产品包括：与PRL-1蛋白特异性结合的抗体，包 括多克隆抗体和单克隆抗体； 所述的通过原位杂交诊断肝癌的产品包括：与PRL-1基因的核酸序列杂交的探 针； 所述的通过基因芯片诊断肝癌的产品包括：与PRL-1基因的核酸序列杂交的探 针； 在本专利技术中，可以使用一系列本领域已知的方法来制备针对PRL-1蛋白特异的抗 体。例如，将提纯的人PRL-1基因产物或它的抗原片段注射入动物体内以产生多克隆抗 体。同样，表达人PRL-1蛋白或它的抗原片段的细胞也可以用来对动物致免疫而产生抗体。 根据本专利技术制备的抗体也可以是单克隆抗体，这些单克隆抗体可用杂交瘤技术制备（例 如，Kohler et al. , Nature256 :495,1975 ;Kohler et al. , Eur. J. Immunol. 6 :511,1976 ; Kohler et al.，Eur. J. Immunol. 6 :292,1976)。本专利技术的抗体包括可以阻抑PRL-1功能的 抗体，也可以是不影响人PRL-1功能的抗体。每一类抗体都可以通过对人PRL-1基因产物的 片段或功能域致免疫而产生，而人PRL-1基因产物及其片段可以用重组方法产生或用多肽 合成仪进行合成。与非修饰形式的PRL-1基因产物结合的抗体，可以利用在原核细胞例如 E. coli中产生的基因产物来免疫动物而得到。与翻译后修饰形式如糖基化或磷酸化PRL-1 蛋白或多肽结合的抗体，可以利用在真核细胞如酵母或昆虫细胞中产生的基因产物来免疫 动物而得到。 在本专利技术中，所述探针可以是DNA、RNA、DNA-RNA嵌合体、PNA或其它衍生物。所述 探针的长度没有限制，只要完成特异性杂交、与目的核苷酸序列特异性结合，任何长度都可 以。所述探针的长度可短至25、20、15、13或10个碱基长度。同样，所述探针的长度可长至 60、80、100、150、300个碱基对或更长，甚至整个基因。由于不同的探针长度对杂交效率、信 号特异性有不同的影响，所述探针的长度通常至少是14个碱基对，最长一般不超过30个碱 基对，与目的核苷酸序列互补的长度以15?25个碱基对最佳。所述探针自身互补序列最 好少于4个碱基对，以免影响杂交效率。 -种PRL-1基因在制备治疗肝癌产品中的应用，所述的治疗肝癌产品包括：通过 RNA干扰抑制PRL-1基因表达的双链核糖核酸、基于PRL-1抗原蛋白的肿瘤疫苗和用于抑制 PRL-1蛋白活性的化学分子。 所述的通过RNA干扰抑制PRL-1基因表达的双链核糖核酸优选为靶向PRL-1基因 的 siRNA ; 所述的靶向 PRL-1 基因的 siRNA 为 siRNA#l 或 siRNA#2 ; 所述的siRNA#l的序列为： siRNA#l-sense :5' -GUUUAAGGUCGCAUUGGUUGGTT-3' ； siRNA#l-antisense :5, -CCAACCAAUGCGACCUUAAACTT-5,； 所述的siRNA#2的序列为： siRNA#2-sense :5, -CCAACCAAUGCGACCUUAAACAAAU-3,； siRNA#2-antisense :5, -AUUUGUUUAAGGUCGCAUUGGUUGG-5，。 在本专利技术中，所述RNA干扰（RNA interference, RNAi)是指在进化过程中高度保 守的、由双链RNA(double-stranded RNA，dsRNA)诱发的、同源mRNA高效特异性降解的现 象。使用RNAi技术可以特异性剔除或关闭特定基因的表达，该技术已被广泛用于探索基因 功能和传染性疾病及恶性肿瘤的基因治疗领域。以细胞为基础的RNAi筛选在功能基因学 研究方面具有许多优势，主要表现在大多数细胞类型都能使用RNAi方法，并且相对较容易 下调或沉默任何目的基因的表达。 本专利技术相对于现有技术具有如下的优点及效果： (1)本专利技术实验证明PRL-1在HCC组织中频繁高表达（81% )，PRL-1表达升高与 HCC病人的侵袭表型及更差预后明显相关（P〈0.05)。外源过表达PRL-1明显增加肝癌细胞 的迁移和侵袭。并且PI3K/AKT/GSK3 β信号通路通过抑制E-cadherin的表达介导PRL-1 的致癌功能。此外，脉管癌栓中PRL-1的蛋白水平明显高于原发病灶。因本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种PRL‑1基因在制备诊断肝癌产品中的应用，其特征在于所述的诊断肝癌产品包括：通过RT‑PCR、实时定量PCR、免疫检测、原位杂交或基因芯片诊断肝癌的产品。
【技术特征摘要】
1. 一种PRL-1基因在制备诊断肝癌产品中的应用，其特征在于所述的诊断肝癌产品包 括：通过RT-PCR、实时定量PCR、免疫检测、原位杂交或基因芯片诊断肝癌的产品。2. 根据权利要求1所述的PRL-1基因在制备诊断肝癌产品中的应用，其特征在于： 所述的通过RT-PCR诊断肝癌的产品包括至少一对特异扩增PRL-1基因的引物。3. 根据权利要求2所述的PRL-1基因在制备诊断肝癌产品中的应用，其特征在于： 所述的特异扩增PRL-1基因的引物为引物PRL-1-⑶S-F和引物PRL-1-⑶S-R : 引物 PRL-1-CDS-F : 5 ' -GGAAGATCTGCCAACATGTACCCATACGATGTTCCAGATTACGCTATGGCTCGAATGAACCGC-3 ' ； 引物 PRL-1-CDS-R : 5' -CGGCTCGAGTTATTGAATGCAACAGTTGTTTCTATGAC-3'。4. 根据权利要求1所述的PRL-1基因在制备诊断肝癌产品中的应用，其特征在于： 所述的通过实时定量PCR诊断肝癌的产品包括至少一对特异扩增PRL-1基因的引物。5. 根据权利要求4所述的PRL-1基因在制备诊断肝癌产品中的应用，其特征在于： 所述的特异扩增PRL-1基因的引物为引物PRL-1-F和引物PRL-1-R : 引物 PRL-1-F :5' -ACCAATGCGACCTTAAACAAA-3' ； 引物 PRL-1-R :5, -AATCTGGTTGGATGGTGGTG-3,。6. 根据权利要求1所述的PRL-1基因在制备诊断肝癌产品中的应用...
【专利技术属性】
技术研发人员：尹东，金少文，王捷，
申请(专利权)人：中山大学，
类型：发明
国别省市：广东;44
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。