本申请提供了通过抑制PAX2的表达来预防和/或治疗个体中乳腺癌的方法。在某些实施方案中，抑制PAX2表达的方法是给予个体编码PAX2siRNA的核酸。还提供了通过给予DEFB1或通过提高DEFB1的表达来治疗个体中癌症的方法。
【技术实现步骤摘要】
靶向PAX2用于治疗乳腺癌 本申请要求于2010年2月18日提交的美国专利申请号12/708, 294的优先权，以 及于2009年8月24日提交的美国专利申请号12/546, 292的优先权。 专利技术背景 乳腺癌是女性最常见的癌症原因，并且在美国是女性第二大常见的癌症死亡原 因。虽然多数初期乳腺癌是基于发现乳腺影像异常来诊断的，但是肿块或乳腺组织坚实度 的变化也可能是疾病的警报信号。过去几十年内提高乳腺癌风险意识已致使进行乳腺摄影 筛查的女性数量增加，导致更早期检测癌症并且由此提高存活率。尽管如此，乳腺癌是45 至55岁女性最常见的死亡原因。 已知许多类型的癌症是由遗传畸变即突变引起的。突变的积聚和细胞控制功能受 损致使从正常组织到早期癌前的进行性表型变化，如上皮内瘤变（IEN)到日益严重的IEN 到浅表癌以及最终到浸润性疾病。该过程通常在几年甚至十几年内相对缓慢地发生，虽然 在一些情况下可能相对迅速。癌基因依赖是，癌细胞对维持恶性表型的单一癌基因的连续 活化或过表达的生理依赖。这种依赖发生于标志肿瘤进程的其它变化的环境中。 浸润性癌症的长期进程为临床干预提供了时机。因此，重要的是鉴定指征癌前疾 病的生物标志物，以便可以采取治疗措施预防或延缓浸润性癌症的发展。 专利技术概述 本专利技术一方面涉及预防或治疗个体中乳腺疾病的方法。所述方法包括向个体乳腺 组织给予抑制PAX2表达或PAX2活性的组合物。 在一实施方案中，所述乳腺疾病是乳腺癌或乳腺上皮内瘤变（MIN)。 在另一实施方案中，所述抑制PAX2表达包括向个体的乳腺癌组织或MIN组织给予 编码PAX2siRNA的核酸。 在相关实施方案中，所述siRNA包含选自以下的序列：SEQ ID N0:3-6和11-15。 在另一实施方案中，所述组合物包含抑制PAX2与DEFB1启动子结合的寡核苷酸。 在相关实施方案中，所述寡核苷酸包含正向或反向的SEQ ID N0:1。 在相关实施方案中，所述寡核苷酸包含X1GGAACX2序列，其中XI和X2是与DEFB1 编码序列中SEQ ID NO: 1的邻近核苷酸互补的0至30个核苷酸。 在相关实施方案中，所述寡核苷酸包含选自以下的序列：SEQ IDN0:18-21，25,26， 28 和 29。 在另一实施方案中，所述组合物包含RAS信号通路的阻断剂。 在另一实施方案中，所述组合物包含选自以下的拮抗剂：血管紧张素 II的拮抗 齐U，血管紧张素 Π 受体的拮抗剂，血管紧张素转化酶（ACE)的拮抗剂，丝裂原活化蛋白激酶 (MEK)的拮抗剂，ERK1，2 (细胞外信号调节激酶）的拮抗剂，以及信号转导及转录活化因子 3(STAT3)的拮抗剂。 还公开了治疗个体中乳腺癌或MIN的方法，所述方法包括增强个体乳腺癌组织或 MIN组织中的DEFB1表达。 在一实施方案中，增强DEFB1表达包括向个体的乳腺癌组织或MIN组织给予有效 量的DEFB1。 在另一实施方案中，增强DEFB1表达包括向个体的乳腺癌组织或MIN组织给予有 效量的编码DEFB1的表达载体。 还公开的是用于治疗个体乳腺疾病的方法，所述方法包括（a)测定来自所述个体 的患病乳腺组织中PAX2-比-DEFB1的表达率；(b)测定来自所述个体的所述患病乳腺组织 的ER/PR状态；以及（c)基于（a)和（b)的结果，向所述个体的乳腺组织给予组合物，所述 组合物⑴抑制PAX2表达或PAX2活性，（2)表达DEFB1，或（3)抑制PAX2表达或PAX2活 性并且表达DEFB1。 附图简要说明 附图与说明书一起阐述本专利技术的一个或多个实施方案，用于说明本专利技术的原理。 只要有可能，整个附图所使用的相同附图标记是指实施方案的相同或类似元件。 图1A至1D给出β -防御素 -1 (DEFB1)表达的定量RT-PCR(QRT-PCR)分析。 图2给出DEFB1诱导膜完整性和细胞形态改变的显微镜分析。黑色箭头指示膜波 动，白色箭头指不凋亡小体。 图3给出前列腺癌细胞中DEFB1的细胞毒性分析。用PonA处理前列腺细胞系 DU145、PC3和LNCaP来诱导DEFB1表达1-3天，之后进行MTT测定以确定细胞活力。结果 表示为平均值土标准偏差，n=9。 图4A和4B给出由DEFB1诱导DU145和PC3细胞的细胞死亡。 图5给出DEFB1诱导之后的泛半胱天冬酶（pan-caspase)分析。 图6给出PAX2siRNA处理之后配对盒同源基因2 (PAX2)蛋白表达的沉默。 图7给出对用PAX2siRNA处理之后的前列腺癌细胞生长的分析。 图8给出对siRNA沉默PAX2之后的细胞死亡的分析。结果表示为平均值土标准 偏差，η _9。 图9给出对半胱天冬酶活性的分析。 图10给出对PAX2siRNA处理之后的凋亡因子的分析。 图11给出PAX2与DNA识别序列结合的模型。 图12示出DEFB1报告子构建体。 图13给出抑制PAX2导致DEFB1表达。 图14给出抑制PAX2导致DEFB1启动子活性增强。 图15给出DEFB1表达致使膜完整性受损。 图16给出PAX2抑制导致膜完整性受损。 图17A和17B给出PAX2与DEFB1启动子结合的ChIP分析。图17A中，泳道1包 含100bp的分子量标志物。泳道2是阳性对照，代表交联和免疫沉淀反应之前从DU145扩 增的DEFB1启动子的160bp区。泳道3是阴性对照，代表无 DNA进行的PCR。泳道4和5 是阴性对照，分别代表用IgG从交联的DU145和PC3进行免疫沉淀反应的PCR。交联之后 用抗-PAX2抗体免疫沉淀的25pg DNA (泳道6和8)和50pg DNA (泳道7和9)的PCR扩 增分别显示DU145和PC3中160bp的启动子片段。图17B中，泳道1包含100bp分子量标 志物。泳道2是阳性对照，代表交联和免疫沉淀反应之前从DU145扩增的DEFB1启动子的 160bp区。泳道3是阴性对照，代表无 DNA进行的PCR。泳道4和5是阴性对照，分别代表 用IgG从交联的DU145和PC3进行免疫沉淀反应的PCR。交联之后用抗-PAX2抗体免疫沉 淀的25pgDNA (泳道6和8)和50pg DNA (泳道7和9)的PCR扩增分别显示DU145和PC3 中160bp的启动子片段。 图18给出PrdPD和PrdHD与DNA的预测结构。 图19给出不同配对结构域共有序列的比较。在图顶部示出Prd-配对-结构域 土DNA复合物晶体学分析中所描述的蛋白土DNA接触的示意图。空框指示α-螺旋，阴影框 指示β-折叠，以及粗线指示β-转角。接触的氨基酸由单字母代码给出。仅给出直接接 触的氨基酸土碱基。空圈指示大沟接触，而红箭头指示小沟接触。该示意图是配对结构域 蛋白所有已知共有序列的比对（仅给出正义链）。共有序列之间的垂直线指示保守的碱基 对。位置编号在图底部给出。 图20给出靶向ΡΑΧ2作为化学预防性策略。 图21给出血管紧张素 II (Ang II)对DU145细胞中ΡΑΧ2表达的影响。 图22A给出洛沙坦（Losartan，Los)对DU145细胞中PAX2表达的影响。 图22B给出AT2R阻断剂PD123319对DU145细胞中PAX2表本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种组合物在制备用于治疗个体中乳腺疾病的药物中的用途，其中所述组合物抑制PAX2表达或PAX2活性，并且所述组合物包含选自编码PAX2siRNA的多核苷酸和阻断PAX2与DEFB1启动子结合的多核苷酸的一种或多种成分，其中所述药物用于治疗这样的乳腺上皮内瘤变(MIN)或低级别乳腺癌，其中所述个体的乳腺组织的PAX2‑比‑DEFB1的表达率升高且所述乳腺组织的雌激素受体/孕酮受体状态(ER/PR)是ER+/PR+或ER+/PR‑。
【技术特征摘要】
2009.08.24 US 12/546,292;2010.02.18 US 12/708,2941. 一种组合物在制备用于治疗个体中乳腺疾病的药物中的用途， 其中所述组合物抑制PAX2表达或PAX2活性，并且 所述组合物包含选自编码PAX2siRNA的多核苷酸和阻断PAX2与DEFB1启动子结合的 多核苷酸的一种或多种成分， 其中所述药物用于治疗这样的乳腺上皮内瘤变（MIN)或低级别乳腺癌，其中所述个体 的乳腺组织的PAX2-比-DEFB1的表达率升高且所述乳腺组织的雌激素受体/孕酮受体状 态（ER/PR)是 ER+/PR+或 ER+/PIT。2. 如权利要求1所述的用途，其中所述组合物包含编码siRNA的多核苷酸，所述siRNA 包含选自以下的序列：SEQ ID NO: 3-6和11-15。3. 如权利要求1所述的用途，其中所述阻断PAX2与DEFB1启动子结合的多核苷酸包含 V-CCTTG-W序列及其互补序列，其中V和W由DEFB1启动子对应于SEQ ID N0:64的核苷酸 512-585的PAX2结合位点中的1至35个连续侧翼核苷酸组成。4. 如权利要求3所述的用途，其中所述多核苷酸包含选自以下的序列：SEQ ID N0:16、 18-21，25,26,28 和 29。5. 如权利要求1所述的用途，其中所述组合物还包含抗激素剂。6. 如权利要求5所述的用途，其中所述抗激素剂是他莫昔芬。7. 如权利要求1所述的用途，其中所述组合物还包含抗ERBB-2/抗-Her-2剂。8. 如权利要求7所述的用途，其中所述抗ERBB-2/抗-Her-2剂是曲妥珠单抗。9. 如权利要求1所述的用途，其中所述组合物还包含抗-AIB-1/SRC-3剂。10. 用于治疗个体乳腺疾病的方法的试剂盒，其包含选自编码PAX2siRNA的多核苷酸 和阻断PAX2与DEFB1启动子结合的多核苷酸的一种或多种成分，以及选自抗激素剂、抗 ERBB-2/抗-Her-2剂和抗-AIB-1/SRC-3剂的一种或多种化合物，...
【专利技术属性】
技术研发人员：卡尔顿·D·唐纳德，
申请(专利权)人：菲吉尼克斯公司，
类型：发明
国别省市：美国;US
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