细胞回收方法技术

本发明专利技术的课题在于，不使用新的洗涤用培养液、洗涤液，而能够提高细胞的回收效率。解决手段为一种细胞回收方法，其是使用细胞培养用试剂盒培养的细胞的回收方法，该试剂盒通过由导管至少连接用于培养细胞的培养容器、回收培养后的细胞的细胞回收容器、和回收培养后的培养基的废液容器而成，所述回收方法包括以下工序：上清液排出工序，将培养后的培养上清液从培养容器转移至废液容器；细胞回收工序，将浓缩的细胞悬浮液从培养容器转移至细胞回收容器；上清液返回工序，使排出到废液容器的培养上清液的一部分返回培养容器，使残留于培养容器的细胞分散于细胞悬浮液；以及再回收工序，将分散有残留细胞的细胞悬浮液从培养容器再次转移至细胞回收容器。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及使用培养容器培养的细胞的回收方法，特别涉及用于提高细胞的回收 效率的。
技术介绍
近年来，在医药品的生产、基因治疗、再生医疗、免疫疗法等领域中，要求在人工环 境下高效地大量培养细胞和组织、微生物等。 对于这样的细胞的大量培养而言，一般使用培养容器培养细胞。在该使用培养容 器的细胞培养中，需要在培养后从培养容器中回收细胞。 回收培养细胞（特别是浮游系细胞）时，以往实施的是从培养容器将细胞悬浮液 全量回收，通过离心分离将细胞分离的方法。但是，在该方法中，在大量培养细胞而使细胞 悬浮液大量存在的情况下，需要分成多次离心分离，存在浪费时间和工夫这样的问题点。 另一方面，作为与相关联的技术，可以列举例如专利文献1中记载 的细胞培养方法中采用的回收方法。该回收方法中，首先将使用后的培养基上清液从培养 容器排出后，回收包含培养细胞的细胞悬浮液，由此可以获得浓缩的细胞悬浮液。 现有技术文献 专利文献 专利文献1 :国际公开2007/052716号小册子
技术实现思路
专利技术要解决的课题 但是，该方法中存在残留于培养容器内而不能回收的细胞产生较多、回收效率不 能说充分这样的问题。 即，根据该回收方法，可以回收浓缩的细胞悬浮液，但即使回收细胞悬浮液，也存 在以附着于培养容器内的壁面等的状态残留的细胞。另外，在培养容器由可挠性材料构成 的情况下，若细胞悬浮液变为少量则培养容器内容易堵塞，较多量的细胞悬浮液残留于培 养容器的结果是，还存在细胞在培养容器内残留这样的问题。 为了解决这样的问题，也考虑了在回收细胞悬浮液后，在培养容器中加入新的洗 涤液（生理盐水、磷酸缓冲液）并搅拌，使培养容器内残留的细胞在洗涤液中悬浮，进行再 次回收这样的方法。但是，像这样使用洗涤液回收培养容器内残留的细胞的方法中，需要新 的洗涤液、用于保存该洗涤液的洗涤液保存容器，存在花费多余的成本这样的问题。 本专利技术鉴于上述问题而完成，目的在于提供在回收使用培养容器培养的细胞时， 可以抑制培养容器的堵塞，不使用新的洗涤用的培养液、洗涤液，而提高细胞的回收效率的 。 用于解决课题的手段 为了达成上述目的，本专利技术的是使用细胞培养用试剂盒培养的细胞 的回收方法，该试剂盒通过由导管至少连接用于培养细胞的培养容器、回收培养后的细胞 的细胞回收容器、和回收培养后的培养基的废液容器而成，所述回收方法的特征在于，包括 以下工序：上清液排出工序，将培养后的培养上清液从培养容器转移至废液容器；细胞回 收工序，将浓缩的细胞悬浮液从培养容器转移至细胞回收容器；上清液返回工序，使排出到 废液容器的培养上清液的一部分返回培养容器，使残留于培养容器的细胞悬浮于细胞悬浮 液；以及再回收工序，将悬浮有残留细胞的细胞悬浮液从培养容器再次转移至细胞回收容 器。 另外，本专利技术的是使用细胞培养用试剂盒培养的细胞的回收方法， 该试剂盒通过由导管至少连接用于培养细胞的培养容器、回收培养后的细胞的细胞回收容 器、和回收培养后的培养基的废液容器而成，所述回收方法包括以下工序：上清液排出工 序，将培养后的培养上清液从培养容器转移至废液容器；缩小工序，使培养容器的底面积缩 小，将浓缩的细胞悬浮液汇集到培养容器的细胞回收接口侧；以及缩小回收工序，将汇集的 细胞悬浮液从培养容器转移至细胞回收容器。 专利技术效果 根据本专利技术，在回收使用培养容器培养的细胞时，可以抑制培养容器的堵塞，不使 用新的洗涤用培养液、洗涤液，而提高细胞的回收效率。 【附图说明】 图1是表示在本专利技术的实施方式的中使用的细胞培养用试剂盒的 图。 图2是表示本专利技术的第一实施方式的中的洗涤回收顺序的图。 图3是表示本专利技术的第二实施方式的中的静置顺序的图。 图4是表示本专利技术的第三实施方式的中的缩小回收顺序的图。 图5是表示利用本专利技术的实施方式的的实验结果的图。 【具体实施方式】 以下，参照附图对本专利技术的的优选实施方式进行说明。首先，参照图 1对本实施方式的中可以优选使用的细胞培养用试剂盒进行说明。该细胞培 养用试剂盒中，具备培养容器10、培养基储藏容器20、细胞注入容器30、细胞回收容器40、 取样容器50、及管60。另外，培养基储藏容器20也作为废液容器使用。 本实施方式的是在使用这样的细胞培养用试剂盒进行细胞培养后 从细胞培养用试剂盒中的培养容器10向细胞回收容器40中回收细胞时使用的方法。 另外，在本实施方式的中使用的细胞培养用试剂盒不限于这样的构 成，还可以使用例如除去取样容器50的构成、具备培养基储藏容器之外的废液容器的构 成、具备多个培养基储藏容器20的构成等适宜变更的构成。 培养容器10是用于加入培养对象的细胞和培养液并大量培养细胞的容器。培养 容器10以可挠性材料为材料，形成袋状（袋型）。 该培养容器10具备用于进行培养液、细胞的注入、回收等的接口。接口的数量没 有特别限定，但优选使用1?3接口的培养容器。图1中示有1接口的细胞培养用试剂盒， 可以通过该接口一面与其他容器保持封闭系统，一面进行培养液、细胞悬浮液等的转移。 另外，作为培养对象的细胞，可以优选使用浮游系细胞。作为培养液，可以使用一 般的各种培养基。 培养基储藏容器20是为了将用于培养细胞的培养液（培养基）转移至培养容器 10而用于容纳的容器。培养基储藏容器20在培养结束后可以作为废液容器使用。即，在从 培养容器10向细胞回收容器40回收细胞之前，通过将培养液的上清液转移至作为废液容 器的培养基储藏容器20,可以将其后浓缩的细胞悬浮液从培养容器10输送至细胞回收容 器40。 另外，在本实施方式的细胞培养用试剂盒中，也可以具备2个以上培养基储藏容 器20。由此，除了可以储藏2倍量以上同样的培养液之外，通过分别储藏不同的培养液，还 可以对培养容器10以各种变换方式供给培养液。 细胞注入容器30是装有在培养开始时必要的细胞和培养液的容器。通过将该细 胞注入容器30中的细胞和培养液转移至培养容器10,开始细胞的培养。细胞注入容器30 上具备至少1个接口，通过该接口转移细胞和培养液。 细胞回收容器40是用于在培养结束后从培养容器10回收包含培养液的一部分和 培养的细胞在内的细胞悬浮液的容器。细胞回收容器40上具备至少1个接口，通过该接口， 从培养容器10向细胞回收容器40转移包含培养液的一部分和培养的细胞在内的细胞悬浮 液。 取样容器50是用于在细胞的培养中、培养结束后，转移培养容器10中的细胞悬浮 液的一部分进行取样的容器。在作为转移至该取样容器50的样品的细胞悬浮液中，含有培 养的细胞和培养液。取样容器50上具备连接着与培养容器10连接的导管（管）的至少1 个接口，细胞悬浮液从培养容器10向取样容器50输送。 管60是连接细胞培养用试剂盒中的各容器的导管。 接着，参照图2对进行本实施方式的的细胞培养装置的构成进行说 明。该图中示意性地示出细胞培养装置。该细胞培养装置中配置有上述细胞培养用试剂盒 中的培养容器10,进行细胞的培养。细胞培养装置如图2所示，具备培养容器10、装载台 11、固定构件1本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种细胞回收方法，其是使用细胞培养用试剂盒培养的细胞的回收方法，该试剂盒通过由导管至少连接用于培养细胞的培养容器、回收培养后的细胞的细胞回收容器、和回收培养后的培养基的废液容器而成，所述回收方法的特征在于，包括以下工序：上清液排出工序，将培养后的培养上清液从所述培养容器转移至所述废液容器；细胞回收工序，将浓缩的细胞悬浮液从所述培养容器转移至所述细胞回收容器；上清液返回工序，使排出到所述废液容器的培养上清液的一部分返回所述培养容器，使残留于所述培养容器的细胞悬浮于细胞悬浮液；以及再回收工序，将悬浮有残留细胞的细胞悬浮液从所述培养容器再次转移至所述细胞回收容器。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2012.02.01 JP 2012-020326;2012.02.01 JP 2012-019951. 一种细胞回收方法，其是使用细胞培养用试剂盒培养的细胞的回收方法，该试剂盒 通过由导管至少连接用于培养细胞的培养容器、回收培养后的细胞的细胞回收容器、和回 收培养后的培养基的废液容器而成，所述回收方法的特征在于，包括以下工序： 上清液排出工序，将培养后的培养上清液从所述培养容器转移至所述废液容器； 细胞回收工序，将浓缩的细胞悬浮液从所述培养容器转移至所述细胞回收容器； 上清液返回工序，使排出到所述废液容器的培养上清液的一部分返回所述培养容器， 使残留于所述培养容器的细胞悬浮于细胞悬浮液；以及 再回收工序，将悬浮有残留细胞的细胞悬浮液从所述培养容器再次转移至所述细胞回 收容器。2. 如权利要求1所述的细胞回收方法，其特征在于， 在所述上清液返回工序中，使用规定的悬浮构件，边按压所述培养容器的表面直至所 述培养容器的表面下降到规定的深度的位置，边使所述悬浮构件在所述培养容器上沿水平 方向往返移动，使残留于所述培养容器的细胞分散于细胞悬浮液。3. 如权利要求1或2所述的细胞回收方法，其特征在于， 同时进行所述上清液返回工序中的残留于所述培养容器的细胞在细胞悬浮液中的分 散、和所述再回收工序中的细胞悬浮液从培养容器向所述细胞回收容器的转移。4. 一种细胞回收方法，其是使用细胞培养用试剂盒培养的细胞的回收方法，该试剂盒 通过由导管至少连接用于培养细胞的培养容器、回收培养后的细胞的细胞回收容器、和回 收培养后的培养基的废液容器而成，所述回收方法的特征在于，包括以下工序： 上清液排出工序，将培养后的培养上清液从所述培养容器转移至所述废液容器； 缩小工序，缩小所述培养容器的底面积，将浓缩的细胞悬浮液汇集到所述培养容器的 细胞回收接口侧；以...

【专利技术属性】
技术研发人员：田中乡史，末永亮，国则正弘，太田恭平，
申请(专利权)人：东洋制罐集团控股株式会社，
类型：发明
国别省市：日本;JP