本发明专利技术涉及液相色谱技术领域，是一种在线亲水相互作用色谱/反相色谱串联接口装置；含有高压惰性气体源和相关减压及阀切换设备。具体的说就是，第一维色谱柱一端通过切换阀和管道与惰性气体（如氮气）减压阀和泵系统相连，另一端通过切换阀和管道与第二维色谱柱和废液相连；通过切换阀门，高压惰性气体置换第一维色谱柱中残留的溶剂，克服了在线串联中溶剂的不兼容问题，保证了样品在第二维色谱柱上的保留，从而实现亲水相互作用色谱和反相色谱之间的串联。该接口使用方便，操作简单，省时，高效，通用性强；由于亲水相互作用色谱/反相色谱的直接串联，可进行样品在线、快速的连续操作，降低样品的损失。
【技术实现步骤摘要】
在线亲水相互作用色谱/反相色谱串联接口装置及其应用
本专利技术涉及液相色谱
，具体的说，是一种在线亲水相互作用色谱/反相色谱串联接口装置，实现了在线的亲水相互作用色谱/反相色谱直接相互串联。
技术介绍
亲水相互作用色谱(HILIC)作为一种分离极性化合物的液相色谱模式，最早由Alpert 于 1990 年提出(Alpert J., J.Chromatogr.A, 1990, 400:177)。其主要特征是:使用类似于正相色谱的极性固定相和水/有机溶剂(通常是乙腈)流动相(其中水是强洗脱溶剂)。已有不少研究表明，当使用水-水溶性有机溶剂做流动相时，亲水性的固定相表面会含有一层富水层，样品在HILIC上的保留包含分配机理(Ulrich T.Angew.Chem.1nt.Edit.，2012, 51，6251-6254)。此外，HILIC还具有与反相色谱(RP)相媲美的柱效和对称的峰形，又能与多种检测器有良好的兼容性。随着蛋白质组学的发展，一方面，HILIC模式对强极性化合物和亲水化合物具有很好的保留和分离选择性，因此越来越多的蛋白质和多肽样品等强极性化合物需要利用HILIC进行选择性分离；另一方面，HILIC的分离机理与RP完全不同，两者的分离选择性具有很好的正交性，而且两者的流动相体系十分类似，十分适合构建HILIC/RP色谱系统，相对于其他联用模式具有更高的正交性，在蛋白组学具有非常大的发展潜力。 然而，在实际应用中，RP中作为强洗脱剂的有机相在HILIC中是流动相的弱洗脱齐U，而在RP中作为弱洗脱剂的水却是HILIC中的强洗脱剂，其含量高低会显著影响组分在柱上的保留。这种流动相的不兼容性导致这两种分离模式无法直接实现在线联用，因此HILIC与RP的直接在线串联一直以来都是一个难题。针对此问题，本专利技术设计了一种惰性气体置换第一维色谱柱中残留溶剂的装置，除去了第一维色谱柱中残留的溶剂，实现了HILIC与RP的直接在线串联。该装置具有简单、实用、省时、高效的特点。实现样品在第二维色谱柱上的保留。
技术实现思路
本专利技术目的为了克服HILIC/RP串联中流动相的不兼容问题，提供了一种新型的在线HILIC/RP串联接口，具有价格低廉，操作简单，省时，实用，样品损失小，高效，通用性强等优点。 本专利技术的目的通过以下技术方案来实现: 一种在线亲水相互作用色谱/反相色谱串联接口装置， 可以是亲水相互作用色谱-反相色谱串联，也可以是反相色谱-亲水相互作用色谱串联； 在线亲水相互作用色谱/反相色谱串联接口装置:第一维色谱柱一端经第一切换阀通过管道分别与高压惰性气体源出口减压阀和高压恒流泵相连，另一端经第二切换阀通过管道分别与第二维色谱柱和第二废液相连； 通过进样，切换第一、第二切换阀和开关高压惰性气体源，高压惰性气体置换第一维色谱柱中残留的溶剂，实现样品在第二维色谱柱上的保留； 第一维色谱柱为亲水相互作用色谱，第二维色谱柱为反相色谱；或第一维色谱柱为反相色谱，第二维色谱柱为亲水相互作用色谱。 高压惰性气体源为不影响亲水相互作用色谱和反相色谱保留机理的所有惰性气体(如:氮气)。 所述的亲水相互作用色谱色谱柱可以是以氨基、多醇基、酰胺、两性离子等作为固定相的亲水相互作用色谱柱之一，反相色谱可以是以C18，C12，CS, C4等作为固定相的反相色谱柱之一。 所述的高压恒流泵是高效液相色谱所配备的高压恒流泵或其他提供动力的泵系统。 所述的切换阀可以是十通阀、八通阀、六通阀等切换阀中的一种。 所述的减压阀一端与高压惰性气体源相连，另一端通过切换阀与第一维色谱柱相连，减压阀调压范围可以从OMPa到20MPa不等。 所述的第一维色谱柱中残留的溶剂是会影响第二维色谱柱保留的溶剂。 所述的进样可以是定量环上的手动进样或自动进样器的自动进样。 所述的在线亲水相互作用色谱/反相色谱串联接口装置在小分子化合物及生物大分子(蛋白质、肽段、糖类、或脂类)分离中的应用。 所述第一切换阀通过管道与第一废液相连。 高压恒流泵与高压惰性气体源和切换阀I 一端相连，切换阀I另一端与废液瓶I和第一维色谱柱相连，第一维色谱柱与切换阀2 (6)—端相连，切换阀2的另一端与废液瓶2和第二维色谱柱相连。 将蛋白酶解产物注入定量环中，高压恒流泵的低极性流动相(如80%乙腈)将酶解产物推入第一维色谱柱(如HILIC)，洗脱一定时间后，打开高压惰性气体源阀门，除去第一维色谱柱中残留的乙腈，然后通过高压恒流泵的高极性流动相(如100%水)将HILIC中保留的物质洗入第二维色谱柱(如RP)，实现了 HILIC与RP的直接串联。 与现有技术相比，本专利技术具有以下优点: (I)本专利技术操作简单，只需要开/关减压阀及调节切换阀即可达到除去HILIC或RP中残留溶剂的目的； (2)本专利技术惰性气体置换装置不会影响HILIC或RP上样品的保留，没有样品损失; (3)本专利技术很好的克服了溶剂间的不兼容问题，实现了 HILIC上洗脱的组分在RP上的强保留或RP上洗脱组分在HILIC上的强保留； (4)本专利技术准确度高和重现性好，不需要引入额外的溶液进行稀释或者分流，也不需要额外添加分流装置或者混合装置，实验结果多次重复效果良好。该装置在线操作，具有快速、方便、高效和连续操作的优点 【附图说明】 图1为本专利技术的原理图； 图2为本专利技术的实施例1的系统结构图； 图3为5μ g IgG酶解产物通过有氮气置换接口的HILIC-RP串联装置后收集的产物，一共鉴定到20条糖肽，且丰度较高，非糖肽数目较少； 图4为5 μ g IgG酶解产物通过直接HILIC-RP串联装置后收集的产物，一共鉴定到8条糖肽，且丰度较低，有非糖肽的干扰； 图1中的数字标号分别为:1:高压恒流泵；2:高压惰性气体源；3:第一切换阀；4:第一维色谱柱；5:第一废液瓶；6:第二切换阀；7:第二维色谱柱；8:第二废液瓶。 【具体实施方式】 以下提供本专利技术一种在线HILIC-RP串联接口装置的【具体实施方式】。 应用例I 在线亲水相互作用色谱/反相色谱串联接口装置 请参阅图1，该接口可以是亲水相互作用色谱-反相色谱串联，也可以是反相色谱-亲水相互作用色谱串联； 在线亲水相互作用色谱/反相色谱串联接口装置:第一维色谱柱4 一端通过第一切换阀3和管道与高压惰性气体(如氮气)源2出口减压阀和高压恒流泵I相连，另一端通过第二切换阀6和管道与第二维色谱柱7和第二废液8相连；通过进样，第一、第二切换阀门(3、6)和开关高压惰性气体源2，高压惰性气体置换第一维色谱柱中残留的溶剂，实现样品在第二维色谱柱上的保留。 Click maltose HILIC:300 μ m 1.d.X 5cm ；C18RP: 150 μ m 1.d.X 3cm ； 流动相A:80%ACN+0.1%FA ;流动相B:超纯水； 样品:1 μ g/ μ L IgG酶解产物。 管路设备:连接管路为内径为150 μ m的毛细管；5μ L定量环；40L普通氮气瓶；减压阀调压范围0-20MPa ;高压恒流泵为D1NEX UltiMate3000液相系统。 应用例2 蛋白本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种在线亲水相互作用色谱/反相色谱串联接口装置，其特征在于：可以是亲水相互作用色谱‑反相色谱串联，也可以是反相色谱‑亲水相互作用色谱串联；在线亲水相互作用色谱/反相色谱串联接口装置：第一维色谱柱（4）一端经第一切换阀（3）通过管道分别与高压惰性气体源（2）出口减压阀和高压恒流泵（1）相连，另一端经第二切换阀（6）通过管道分别与第二维色谱柱（7）和第二废液（8）相连；通过进样，切换第一、第二切换阀（3、6）和开关高压惰性气体源（2），高压惰性气体置换第一维色谱柱中残留的溶剂，实现样品在第二维色谱柱上的保留;第一维色谱柱（4）为亲水相互作用色谱，第二维色谱柱（7）为反相色谱；或第一维色谱柱（4）为反相色谱，第二维色谱柱（7）为亲水相互作用色谱。
【技术特征摘要】
1.一种在线亲水相互作用色谱/反相色谱串联接口装置，其特征在于: 可以是亲水相互作用色谱-反相色谱串联，也可以是反相色谱-亲水相互作用色谱串联； 在线亲水相互作用色谱/反相色谱串联接口装置:第一维色谱柱(4) 一端经第一切换阀(3)通过管道分别与高压惰性气体源(2)出口减压阀和高压恒流泵(I)相连，另一端经第二切换阀(6)通过管道分别与第二维色谱柱(7)和第二废液(8)相连； 通过进样，切换第一、第二切换阀(3、6)和开关高压惰性气体源(2)，高压惰性气体置换第一维色谱柱中残留的溶剂，实现样品在第二维色谱柱上的保留； 第一维色谱柱(4)为亲水相互作用色谱,第二维色谱柱(7)为反相色谱；或第一维色谱柱(4)为反相色谱，第二维色谱柱(7)为亲水相互作用色谱。2.按照权利要求1所述的接口装置，其特征在于:高压惰性气体源为不影响亲水相互作用色谱和反相色谱保留机理的所有惰性气体。3.按照权利要求1所述的接口装置，其特征在于:所述的亲水相互作用色谱色谱柱可以是以氨基、多醇基、酰胺、或两性离子作为固定相...
【专利技术属性】
技术研发人员：张丽华，翁叶靖，曲焱焱，张晓丹，杨开广，张玉奎，
申请(专利权)人：中国科学院大连化学物理研究所，
类型：发明
国别省市：辽宁;21
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