【技术实现步骤摘要】
一种食源性致病菌DNA的阶段控温快速提取方法
本专利技术涉及分子生物
，具体涉及食源性致病菌DNA的快速提取方法。
技术介绍
食品安全问题一直是各国政府和人民群众最为关心的问题，由食源性致病菌引起 的食源性疾病是影响食品安全的最主要的因素之一。在HACCP体系的建立和实施过程中， 致病性病原微生物一直是各类食品加工行业控制的重点。 食源性致病菌是引起细菌性食物中毒的病原菌。食源性致病菌多达几十种，主要 有金黄色葡萄球菌，沙门氏菌，志贺氏菌和副溶血性弧菌、大肠杆菌、单核增生李斯特菌、肉 毒杆菌等。食源性致病菌对人体健康的影响主要是指微生物本身及其代谢过程、代谢产物 对食品原料、加工过程和产品的污染，这种污染会对食品消费者的健康造成损害。 传统的食源性致病菌的分离培养检测方法检测周期长，需要4-7d，且操作步骤繁 琐、特异性差。因此建立快速、灵敏、准确的检测技术来检测食源性致病菌显得尤为重要，聚 合酶链式反应（PCR)等分子生物学检测技术因其特异性和灵敏度高而被广泛采用。而PCR 检测技术的第一步就是模板DNA的制备，即样品中DNA的提取，直接影响着PCR反应的结 果。长期以来，样品中DNA的提取和纯化一直是耗时、繁琐的过程，严重减慢了检测速度。因 此，建立一种快速的DNA提取方法对提高PCR检测效率起着至关重要的作用。 本
所熟知的DNA提取方法主要有十六烷基三甲基溴化铵（CTAB)、试剂盒 方法等。CTAB方法提取的DNA纯度，为1. 8左右，应用较广泛，但其操作步骤繁琐，长达8步， 且实验过程中...
【技术保护点】
一种食源性致病菌DNA的阶段控温快速提取方法，该方法包括如下步骤：(a)取1‑5mL食源性致病菌培养液，8000‑12000rmp离心1‑4min，使细菌细胞沉淀，弃上清；(b)往步骤(a)制得的菌体沉淀中加入100‑500uL无菌双蒸水，充分混合，8000‑12000rmp离心1‑4min，弃上清；(c)往步骤(b)制得的细菌沉淀中加入100‑500uL细胞裂解液，悬浮细菌沉淀，并于105℃‑126℃油浴10s‑3min；(d)将步骤(c)所得的混合液立即移至70℃‑95℃中水浴5‑30min；(e)步骤(d)结束后，8000‑12000rmp离心1‑4min取上清，上清液即为模板DNA，对提取所得DNA用于分析检测，剩余DNA于‑20℃保存备用。
【技术特征摘要】
1. 一种食源性致病菌DNA的阶段控温快速提取方法，该方法包括如下步骤： (a) 取l-5mL食源性致病菌培养液，8000-12000rmp离心l-4min，使细菌细胞沉淀，弃上 清； (b) 往步骤（a)制得的菌体沉淀中加入100-500uL无菌双蒸水，充分混合， 8000-12000rmp 离心 l_4min，弃上清； (c) 往步骤（b)制得的细菌沉淀中加入100-500uL细胞裂解液，悬浮细菌沉淀，并于 105°C _126°C油浴 10s-3min ; (d) 将步骤（c)所得的混合液立即移至70°C -95°C中水浴5-30min ; (e) 步骤（d)结束后，8000-12000rmp离心l-4min取上清，上清液即为模板DNA，对提取 所得DNA用于分析检测，剩余DNA于-20°C保...
【专利技术属性】
技术研发人员：熊晓辉，熊丽莎，陆利霞，程月花，游京晶，
申请(专利权)人：南京工业大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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