一种常压柱层析从迷迭香提取物中分离纯化鼠尾草酸的方法。将硅胶用等体积的石油醚(60～90℃)分散均匀后匀浆湿法装柱，将迷迭香提取物用乙酸丁酯溶解后上样，以乙酸丁酯和石油醚(60～90℃)的体积比为4∶1～4∶10作为洗脱剂，流速为2～8mL/min，洗脱后的级分分段收集，合并具有相同成分的级分，减压浓缩得层析产物，可获得纯度98％以上的鼠尾草酸产品。本发明专利技术使用常规易得的溶剂，不需使用特殊高压高温设备，成本低、纯化效率高、溶剂残留少且易回收。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】。将硅胶用等体积的石油醚(60～90℃)分散均匀后匀浆湿法装柱，将迷迭香提取物用乙酸丁酯溶解后上样，以乙酸丁酯和石油醚(60～90℃)的体积比为4∶1～4∶10作为洗脱剂，流速为2～8mL/min，洗脱后的级分分段收集，合并具有相同成分的级分，减压浓缩得层析产物，可获得纯度98％以上的鼠尾草酸产品。本专利技术使用常规易得的溶剂，不需使用特殊高压高温设备，成本低、纯化效率高、溶剂残留少且易回收。【专利说明】一种常压柱层析从迷迭香提取物中分离纯化鼠尾草酸的方 法
本专利技术涉及，尤其涉 及一种由迷迭香提取物经常压硅胶柱柱层析从迷迭香提取物中分离纯化鼠尾草酸的制备 方法。
技术介绍
鼠尾草酸的纯化方法主要有缓冲溶液精制法、pH值控制沉淀法、柱层析精制法，使 用最多的是柱层析精制法，中压或常压柱。 缓冲溶液精制法工艺简单，便于操作，但所得鼠尾草酸的纯度不够；pH控制沉淀 法纯化鼠尾草酸，所得产品纯度可以达到一定的要求，但工艺复杂，用时较长，且实验需要 很低的温度来保证鼠尾草酸的冷冻结晶，能耗大；柱层析法使用较为广泛，将各种溶剂粗提 的迷迭香抗氧化剂溶于二氯甲烷经聚酰胺柱分离，然后再经过二次重结晶和活性炭脱色， 可以得到纯度大于95 %的鼠尾草酸无色晶体（孙传经，孙云鹏.超临界C02反向萃取法 提取迷迭香抗氧化剂的方法：中国，1327038. 2001-12-19)，但纯化时间长，且纯化成本 高；采用RP-C18填料分离纯化迷迭香提取物中的鼠尾草酸，可以得到纯度高达98%以上 的鼠尾草酸（杜纪权，徐鸿，陈香雪，等.迷迭香中鼠尾草酸分离纯化及抗氧化能力指数测 定.食品与机械，2011，27 (6) :87-91);使用含量不低于15%的鼠尾草酸原料，制备纯度 98%以上的鼠尾草酸，将鼠尾草酸粗品用乙酸丁酯溶解，得上柱样品，使用硅胶填充柱，上 样后以乙酸丁酯为洗脱剂，柱塞式溶剂泵进液，洗脱后的级分分段收集，减压浓缩至干回收 洗脱剂，得层析产物，层析产物用烃溶剂重结晶，结晶产物减压干燥，可获得纯度98%以上 的鼠尾草酸产品（祖元刚，杨磊，祖柏实，等.一种连续中压柱层析制备高纯度鼠尾草酸的 方法：中国，1〇1851158Α· 2010-10-06.)
技术实现思路
本专利技术提供，具有成 本低、能耗低、纯化效率高、溶剂残留少且容易回收、污染小的特点。 本专利技术提供如下技术方案： -种从迷迭香提取物中分离纯化鼠尾草酸的方法，将迷迭香提取物用乙酸丁酯溶 解，得上柱样品，使用硅胶填充层析柱，将硅胶用等体积的石油醚分散均匀后匀浆湿法装 柱，上样后以乙酸丁酯和石油醚作为洗脱剂，洗脱后的级分分段收集，合并具有相同成分的 级分，30?60°C减压浓缩至干得层析产物，可得到纯度98%以上的鼠尾草酸产品。 有益效果： (1)本专利技术采用常压柱层析分离纯化方法，从迷迭香提取物中分离纯化鼠尾草酸， 仅通过一步常压硅胶柱柱层析即可快速、高效地得到足够纯度的鼠尾草酸。 (2)使用常规易得的有机溶剂，价格低廉、回收方便、残留少、污染小； (3)本专利技术在较低温度和较短时间内实现对迷迭香提取物中的活性成分鼠尾草酸 进行分离纯化，操作方便，能耗低，不需使用特殊高温高压设备，提高了原料和设备利用率。 其中，本专利技术涉及的HPLC分析方法，液相色谱仪为岛津LC-20AT，采用C18反相色 谱柱（150mmX 4. 6mmX 5 μ m)，进样量20 μ L，采用PDA检测器进行多波长扫描。流动相采用 两种混合展开溶剂，即溶剂A(乙腈-水-乙酸，体积比15 : 84 : 0.85)和溶剂B(甲醇）， 采用梯度洗脱方法（即：30min内由90% A和10% B递增到100% B，保持5min，4min内返 回90% A和10% B，再保持3min)，控制流速为1. 5mL/min，柱温为40°C，检测波长为284nm。 样品中鼠尾草酸的含量和质量，主要利用标准样品所测标准曲线进行定量计算。 【专利附图】【附图说明】 图1为鼠尾草酸纯化产品的HPLC图（284nm)。 【具体实施方式】 一种从迷迭香提取物中分离纯化鼠尾草酸的常压柱层析纯化方法，本方法使用迷 迭香叶经乙醇超声辅助提取所得的迷迭香提取物，将一定量的迷迭香提取物用1?2mL乙 酸丁酯溶解，得上柱样品，使用相当于迷迭香提取物80?500倍（w/w)的硅胶填充层析柱， 将硅胶用等体积的石油醚（60?90°C )分散均匀后匀浆湿法装柱，上样后以乙酸丁酯和石 油醚（60?90°C )的体积比为4:1?10作为洗脱剂，流速为2?8mL/min，洗脱后的级分分 段收集，合并具有相同成分的级分，30?60°C减压浓缩至干得层析产物，可获得纯度98% 以上的鼠尾草酸产品。 一种从迷迭香提取物中分离纯化鼠尾草酸的常压柱层析分离纯化方法，具体方法 如下： 将迷迭香提取物用1?2mL乙酸丁酯溶解，得上柱样品，使用相当于迷迭香提取物 80?500倍（w/w)的娃胶填充层析柱，将娃胶用石油醚（60?90°C )分散均勻后勻楽湿法 装柱，上样后以乙酸丁酯和石油醚（60?90°C )的体积比为4:1?10作为洗脱剂，流速为 2?8mL/min，洗脱后的级分分段收集，合并具有相同成分的级分，30?60°C减压浓缩至干 得鼠尾草酸纯化产品。 实施例1 迷迭香提取物粉末的制备方法（李大伟.迷迭香叶活性成分超声辅助提取与分离 的研究.北京：中国林业科学研究院硕士研究生学位论文，2012年）：100g迷迭香叶 子（粉碎），按固液比1:16&/1^)加入75%的乙醇160〇1^，加入3 (%酸稳定剂（相对于乙 醇），超声频率28kHz，超声功率200W，超声提取时间40min，超声温度35°C。提取液经过滤 得滤液，滤液减压蒸馏得到迷迭香提取物浸膏，在40°C真空干燥箱干燥后研钵内研磨，即可 得迷迭香提取物粉末16. 93g (鼠尾草酸含量为20% wt)。 实施例2 迷迭香提取物粉末（按实施例1的方法制备，鼠尾草酸含量为20% wt，下 同。）〇.5g，用1?2mL乙酸丁酯溶解，得上柱样品。称取200-300目的硅胶40g，用等体积 石油醚（60?90°C )分散后匀浆湿法装柱。在层析柱中装入半柱石油醚（60?90°C )，缓 慢加入硅胶。用石油醚（60?90°C )淋洗使填料充分沉降，敲击层析柱侧壁使填料紧密、均 勻。洗脱剂为乙酸丁酯：石油醚（60?9(TC)为4:10(v/v)，流速6mL/min，接样量为5mL/ 管，进行柱层析分离，经薄层色谱鉴定收集鼠尾草酸含量较高的几个级分合并、减压浓缩至 干，得0. 0642g鼠尾草酸纯化产品。 实施例3 迷迭香提取物粉末0. 5g，用1?2mL乙酸丁酯溶解，得上柱样品。称取200-300目 的硅胶40g，用等体积石油醚（60?90°C)分散后匀浆湿法装柱。在层析柱中装入半柱石 油醚（60?90°C )，缓慢加入硅胶。用石油醚（60?90°C )淋洗使填料充分沉降，敲击层 析柱侧壁使填料紧密、均匀。洗脱剂为乙酸丁酯：石油醚（60?90°C)为4:11 (v/v)，流本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种从迷迭香提取物中分离纯化鼠尾草酸的方法，其特征在于，将迷迭香提取物用乙酸丁酯溶解，得上柱样品，使用硅胶填充层析柱，将硅胶用等体积的石油醚分散均匀后匀浆湿法装柱，上样后以乙酸丁酯和石油醚作为洗脱剂，洗脱后的级分分段收集，合并具有相同成分的级分，30～60℃减压浓缩至干得层析产物，得到纯度98％以上的鼠尾草酸产品。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：毕良武，夏田娟，赵振东，程贤，
申请(专利权)人：中国林业科学研究院林产化学工业研究所，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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