一种夜蛾颗粒体病毒、含该病毒的制剂的制备方法及应用技术

本发明专利技术涉及一种病毒、含该病毒的制剂的制备方法及应用，尤其涉及夜蛾颗粒体病毒、含该病毒的制剂的制备方法及应用，属于生物技术领域。本发明专利技术将夜蛾颗粒体病毒GXW9-3接种于高龄夜蛾等幼虫食料中让其捕食致幼虫细胞病变，而在24h～32h搜集的罹病尸体经体表75％酒精消毒后粉碎创制高含量的颗粒体颗病毒GXW9-3制剂。可根据不同植物上夜蛾科害虫发生和危害的特点，将该制剂配制成所需浓度，对发生危害面大、暴食性和抗化性强的夜蛾幼虫进行防治，其有益效果是，防控效果好，防控时间长，可有效降低夜蛾后代发生基数。达到控制夜蛾害虫暴发和危害，促进生态平衡，保护植物生长、提高产量，改进品质之功能。

【技术实现步骤摘要】
一种夜蛾颗粒体病毒、含该病毒的制剂的制备方法及应用
本专利技术涉及一种病毒、含该病毒的制剂的制备方法及应用，尤其涉及夜蛾颗粒体病毒、含该病毒的制剂的制备方法及应用，属于生物

技术介绍
半个多世纪以来，用化学农药防治害虫对农业增产增收作出了巨大贡献。但长期依赖和大量使用化学农药所带来的环境及农产品污染、生态失衡以及食品安全等问题也日益显现。减少使用高毒高残留农药，并推广无公害生产或防控技术就成了当务之急，害虫的生物防治也就显得尤为迫切。寄生于农业害虫的病毒巳发现约200余种，其中大多数属于杆状病毒，少数是颗粒体病毒，由于昆虫病毒有高度的专一寄生性，通常一种病毒只侵染一种昆虫，而对他种昆虫和人无害，因此不干扰生态平衡，已有小规模商品化生产的病毒杀虫剂，多数用于防治鳞翅目害虫，例如棉铃虫舞毒蛾斜纹夜蛾天幕毛虫菜粉蝶等，我国在80年代巳广泛试验推广核型多角体病毒杀虫剂。现有生物制剂的缺陷是宿主窄、致病慢、效果差、病原体易受光照影响而药效期短，其次制剂不耐40度以上高温贮存、货架期短会失去防效。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是针对现有技术存在的缺陷，提出一种夜蛾颗粒体病毒，该颗粒体病毒可使三种或三种以上的夜蛾幼虫致病死亡，俗称为夜蛾颗粒体病毒。如银纹夜蛾、烟青虫、小莱蛾、钭纹夜蛾等、含该病毒的制剂的制备方法及应用，安全高效地防治害虫。本专利技术首先提供夜蛾颗粒体病毒GXW9-3，于2013年9月20日保藏在中国武汉大学(中国典型培养物保藏中心)其保藏号为CCTCCNO:V201340。夜蛾颗粒体病毒MamestraoleraceagranulosisvirusGVGXW9-3隶属于杆状病毒科颗粒体病毒属，是一种双链ＤＮＡ包涵体病毒。在JSM-7001F扫描分析电镜下研究发现，包涵体病毒呈折光性的颗粒，呈圆形，大小为320ｘ189ｎｍ，内部含有一个病毒粒子，病毒粒子分子量为85.9KB的DNA和蛋白质外壳组成，病毒的感染力主要由DNA和蛋白衣壳的完整性决定的，病毒粒子外包裹了致密的晶格的颗粒体蛋白，形成病毒包涵体。本专利技术将夜蛾颗粒体病毒GXW9-3接种于高龄夜蛾幼虫食料中让其捕食致幼虫细胞病变，而在24h～32h搜集的罹病尸体经体表75％酒精消毒后粉碎创制高含量的颗粒体颗病毒GXW9-3制剂，具体的制备方法如下：第一步、将野外与室内交替繁育的幼虫喂食夜蛾颗粒体病毒GXW9-3，当野外繁育的幼虫为3～5龄时开始接夜蛾颗粒体病毒GXW9-3；当室内工厂化繁育的3～5龄幼虫斜纹夜蛾禁食3.5～4.5小时，再将夜蛾颗粒体病毒GXW9-3混入饲料中，搅拌均匀，喂食幼虫，保持环境温度28～38℃，光照强度2500-3000Lux，相对湿度70～75％，待幼虫细胞病变；第二步、在幼虫细胞病变的24～32小时内收集具有急剧痉挛反应、后足指尖插入植物顶部组织或叶缘叶肉组织而倒挂死亡幼虫尸体，将幼虫尸体经体表酒精消毒后，待80％以上的尸体体表破裂流出乳白色的浓稠液体后，将幼虫尸体粉碎至粒径在75nm以上；第三步、将粉碎出的幼虫体液制成大于110亿OB/mL的夜蛾颗粒体病毒GXW9-3制剂。所述第一步中，选择野外或室内繁育的幼虫。幼虫包括银纹夜蛾、烟青虫、小莱蛾、菜青虫、斜纹夜蛾、稻螟虫或粘虫的幼虫，交替繁育的步骤是室内工厂化繁育斜纹夜蛾等夜蛾昆虫5代后，以保持毒力效价的稳定，再将斜纹夜蛾等夜蛾昆虫移至室外寄主作物上繁殖1代，所述夜蛾颗粒体病毒GXW9-3的加入量为每百斤饲料接入干燥GXW9-3菌株100g。所述步骤三中粉碎方式为砂磨粉碎。本专利技术进一步提供含有夜蛾颗粒体病毒的制剂的应用，将所述夜蛾颗粒体病毒GXW9-3制剂用清水稀释500-600倍液后加入8mL的农用有机硅制成悬浮液，在晴天的傍晚将悬浮液喷施于植株上即可。优选的喷施条件是28-38℃、光照强度2500-3000Lux，相对湿度65％～85％的环境下喷施，防治效果可达100％，持效期达到60天以上。由于纯化的病原体具有与野外环境相适应的特性，具有耐高温强光和很强致病性，目前已知宿主害虫近十种且具广谱性。本专利技术采用夜蛾幼虫活细胞在特定温度、光照和相对湿度的条件下繁殖夜蛾颗粒体颗病毒GXW9-3，并利用夜蛾颗粒体颗病毒GXW9-3创制一种安全、高效的含有夜蛾颗粒体颗病毒GXW9-3的微生物制剂。可根据不同植物上夜蛾科害虫发生和危害的特点，将该制剂配制成所需浓度，对发生危害面大、暴食性和抗化性强的夜蛾幼虫进行防治，本专利技术的优点是制剂致病快、效果好、杀虫谱广，又因GXW9-3病毒耐高和湿强光显示和较好野性，具有持续防控效果、防控时间长，可有效降低夜蛾后代发生基数。达到控制夜蛾害虫暴发和危害，促进生态平衡，保护植物生长、提高产量，改进品质之功能。附图说明图1为110亿OB/ml夜蛾颗粒体颗GXW9-3制剂500倍液防治辣椒斜纹夜蛾的虫尸体。图2为夜蛾颗粒体颗GXW9-3在JSM-7001F扫描分析电镜特征。具体实施方式实施例本专利技术的夜蛾颗粒体病毒GXW9-3的来源是专利技术人于2004年8月13日(高温强光季节)在镇江南山野茄子上发现采集的罹病倒挂斜纹夜蛾尸体。并于2013年9月20日保藏在中国武汉大学(中国典型培养物保藏中心)其保藏号为CCTCCNO:V201340。本实施例通过以下方法制备含夜蛾颗粒体病毒GXW9-3的制剂：(1)将从野外罹病夜蛾幼虫尸体中分离纯化的，具有高致病力夜蛾颗粒体颗病毒GXW9-3经过-5℃、-15℃、-75℃冷冻干燥后备用。因冷冻前物料含水份的差异，每个温度的冷冻时间分别为80—100分钟、1700-1800分钟、1200-1300分钟。(2)将野外与室内交替繁育。即室内工厂化繁育斜纹夜蛾等夜蛾昆虫5代后，以保持毒力效价的稳定，再将斜纹夜蛾等夜蛾昆虫移至室外寄主作物上繁殖1代，3～5龄的幼虫时开始接夜蛾颗粒体病毒GXW9-3或室内工厂化繁育的3～5龄幼虫斜纹夜蛾禁食3.5～4.5小时，再将夜蛾颗粒体病毒GXW9-3混入饲料中，搅拌均匀，喂食幼虫，保持环境温度28～38℃，光照强度2500-3000Lux，相对湿度70～75％，待幼虫细胞病变；(3)当(2)幼虫细胞病变，且在24h～32h搜集的罹病尸体经体表75％酒精消毒后，待80％以上尸体体表破裂流出乳白色的浓稠液体时，用砂磨机粉碎至粒径在75nm以上，制成每毫升GXW9-3菌株110亿OB以上高含量的颗粒体颗病毒GXW9-3制剂，主要是将砂磨粉碎出的幼虫体液，抽样涂板电镜测定110～128亿OB/mL的夜蛾颗粒体病毒GXW9-3制剂。(4)对颗粒体颗病毒GXW9-3制剂进行相关试验。以上幼虫可以是银纹夜蛾、烟青虫、小莱蛾、菜青虫、钭纹夜蛾、稻螟虫、粘虫的幼虫。1鉴别试验1.1夜蛾颗粒体病毒体(MOGV)的形态特征夜蛾颗粒体颗GXW9-3制剂致中毒昆虫产生剧烈痉挛性反应攀登至辣椒顶部枝条和叶缘部，后腹两对足剌插入叶肉呈倒挂死亡(见图1)。罹病尸虫体液在JSM-7001F扫描分析电镜下研究发现，病毒呈折光性的颗粒，圆形，大小为320ｘ185ｎｍ，内部含有1～2个病毒粒子，病毒粒子分子量为85.9KB的DNA和蛋白质外壳组成，病毒粒子外包裹了致密的晶格的颗粒体蛋白(见图2)。1.2仪器本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种夜蛾颗粒体病毒GXW9‑3，其保藏号为CCTCC NO:V201340。

【技术特征摘要】
1.一种夜蛾颗粒体病毒GXW9-3，其保藏号为CCTCCNO:V201340。2.根据权利要求1所述夜蛾颗粒体病毒的制剂的制备方法，包括以下步骤：第一步、将野外与室内交替繁育的幼虫喂食夜蛾颗粒体病毒GXW9-3，当野外繁育的幼虫为3～5龄时开始接夜蛾颗粒体病毒GXW9-3；当室内工厂化繁育的3～5龄幼虫斜纹夜蛾禁食3.5～4.5小时，再将夜蛾颗粒体病毒GXW9-3混入饲料中，搅拌均匀，喂食幼虫，保持环境温度28～38℃，光照强度2500-3000Lux，相对湿度70～75%，待幼虫细胞病变；第二步、在幼虫细胞病变的24～32小时内搜集具有急剧痉挛反应、后足指尖插入植物顶部组织或叶缘叶肉组织而倒挂死亡幼虫尸体，将幼虫尸体经体表酒精消毒后，待80%以上的尸体体表破裂流出乳白色的浓稠液体后，将幼虫尸体粉碎至粒径在75nm以上；第三步、将粉碎出的幼虫体液制成大于110亿OB/mL的夜蛾颗粒体病毒GXW9-3制剂。3.根据权利要求2所述夜蛾颗粒体病毒的制剂的制备方法，其特征在于：所述第一步中，幼虫包...

【专利技术属性】
技术研发人员：高小文，
申请(专利权)人：高小文，
类型：发明
国别省市：江苏;32