本发明专利技术提供了一种用于检测样品中流感病毒的试剂盒，其中，该试剂盒包括缓冲液供应单元和检测试纸条；该检测试纸条在纵向上依次包括底物供应区，样品供应区，检测区；该底物供应区包括底物垫(3)，其上吸附有干燥的酶底物，该底物垫(3)与硝酸纤维素膜(1)接触；该样品供应区包括酶标垫(2)，其上吸附有吸附有鼠抗A型流感病毒核蛋白抗体标记单克隆抗体1，该酶底物能与该标记单克隆抗体1上标记的酶产生显色反应；以及在该检测区固定化有鼠抗A型流感病毒核蛋白抗体固定单克隆抗体2。本发明专利技术还提供了使用该试剂盒检测样品中流感病毒的方法。本发明专利技术的试剂盒及其检测方法具有快速、准确，特异性强、灵敏、稳定性好的优点。
【技术实现步骤摘要】
-种用于检测样品中流感病毒的试剂盒及其检测方法和应 用
本专利技术属于生物
。
技术介绍
A型流感病毒包括禽流感病毒（Avian Influenza Vitus，AIV)、猪流感病毒（Swine Influenza Vitus，SIV)、马流感病毒（Equine Influenza Vitus，EIV)和犬流感病毒（Canine Influenza Vitus，CIV)等，世界动物卫生组织（Office of International Education，0ΙΕ) 将A型流感病毒所引起的疾病列为A类动物疫病，我国将其列为一类动物疫病。 其中，禽流感病毒可引发禽流感，禽流感是一种高度传染性疾病，根据其致病性将 其分为高致病性禽流感和低致病性禽流感，特别地高致病性禽流感给养禽业带来了毁灭性 打击；猪流感病毒会引起猪流感，甚至导致猪死亡，猪流感不仅危害猪体健康，影响育肥猪 的上市时间，还增加了饲养成本，给养猪业造成了不容忽视的损失；马流感病毒会引发马流 感，使马呼吸、脉搏频数增加，食欲降低，精神委顿，眼结膜充血水肿，大量流泪，在发热期间 经常出现肌肉震颤，还增加了驯养成本；犬流感病毒引发犬流感，表现为持续咳嗽，伴有黄 色的鼻分泌物，严重时会出现高烧、呼吸频率加快等类似肺炎的症状，还对公共卫生造成了 巨大的影响。 在A型流感病毒的防治工作中，诊断、监测是至关重要的环节。目前，A型流感病 毒检测方法主要包括核酸检测方法和胶体金快速检测方法。核酸检测方法虽特异性好、灵 敏度高，但其检测需昂贵的PCR仪和专业的技术人员，并且只能在具备核酸检测能力的实 验室开展，而大部分的基层临床条件不具备核酸检测的能力，采集的标本需要送到具备检 测能力的实验室进行检测，缺乏时效性，不利于疫情的控制，也限制了其在大规模筛查方面 的应用。胶体金快速检测试剂以其快速、准确、简便、肉眼判读、实验结果易保存等优点被广 泛应用于A型流感病毒的快速检测和现场诊断上，但其灵敏度较低。因此，快速、准确、灵敏 度高、简便的A型流感检测方法是当前研究的重点。
技术实现思路
为了实现A型流感病毒快速、简便、准确地检测及检测中灵敏度较低的问题，本发 明提供了两种抗A型流感病毒核蛋白单克隆抗体及其制备的酶层析法检测试剂盒，该试剂 盒不仅比常规的胶体金快速检测试纸条具有更高的灵敏度，而且检测快速、操作简便，适用 于A型流感病毒的快速检测。 本专利技术的主要目的在于提供一种用于检测样品中A型流感病毒的试剂盒，其中， 所述试剂盒包括缓冲液供应单元和检测试纸条；所述缓冲液供应单元用于将缓冲液供给所 述检测试纸条；所述检测试纸条包括硝酸纤维素膜（1)，所述检测试纸条在纵向上依次包 括底物供应区，样品供应区，检测区；所述底物供应区包括底物垫（3)，其上吸附有干燥的 酶底物，所述底物垫（3)与硝酸纤维素膜（1)接触，所述酶底物溶于缓冲液中并在硝酸纤维 素膜（1)上向距所述缓冲液供应单元的远端迁移；所述样品供应区包括酶标垫（2)，其上吸 附有鼠抗A型流感病毒核蛋白抗体标记单克隆抗体1，所述酶底物能与所述标记单克隆抗 体1上标记的酶产生显色反应，所述酶标垫（2)与硝酸纤维素膜（1)接触，所述标记单克隆 抗体1溶于缓冲液中并在硝酸纤维素膜（1)上向距所述缓冲液供应单元的远端迁移；以及 所述检测区固定化有鼠抗A型流感病毒核蛋白抗体固定单克隆抗体2。 优选地，所述缓冲液供应单元包括展开液垫（5)、底物缓冲液槽（8)、底物缓冲液 (9)和缓冲液按钮，所述底物缓冲液（9)置于底物缓冲液槽⑶中，所述缓冲液按钮位于底 物缓冲液槽（8)的上方，按下可将所述展开液垫（5)浸入缓冲液（9)中；所述检测区包括检 测线（6)、质控线（7)，其中，所述质控线（7)较检测线（6)更远离所述样品供应区，在所述 检测线（6)固定化有鼠抗A型流感病毒核蛋白抗体固定单克隆抗体2,在所述质控线（7)固 定化有羊抗鼠多抗，且吸附在酶标垫（2)上的标记单克隆抗体1对于固定在检测线（6)的 固定单克隆抗体2而言是过量的；所述硝酸纤维素膜（1)全段粘附在所述支撑物（10)上， 支撑物（10)连接所述缓冲液供应单元，底物供应区，样品供应区，检测区以及吸水垫（4)， 所述吸水垫（4)在距所述缓冲液供应单元的最远端；以及检测样品（11)加入的位置为所述 酶标垫⑵的位置。 作为本专利技术的一种实施方式，所述酶层析法检测试纸条包括固相的硝酸纤维素膜 1、含有标记试剂的酶标垫2、底物垫3、吸水垫4、展开液垫5、检测线6、质控线7、底物缓冲 液槽8、底物缓冲液9、支撑物10,其中2属于样品供应区，3属于底物供应区，5、8属于缓冲 液供应单元，6、7属于检测区。检测样品11加入的位置为酶标垫2的位置。酶层析法检测 试纸条固定在塑料外壳中，其上从左到右依次固定展开液垫5、底物垫3、酶标垫2、吸水垫 4。硝酸纤维素膜1粘附在支撑物10的全段；吸水垫4卡在硝酸纤维素膜1的顶端，且与硝 酸纤维素膜1有重叠；酶标垫2位于硝酸纤维素膜1的中段，上面干燥有酶标记的鼠抗A型 流感病毒核蛋白抗体1 ;底物垫3卡在硝酸纤维素膜1的底端，其上有干燥的酶底物。展开 液垫5的上端覆盖了底物垫3,且其下端位于底物缓冲液槽8的底端。底物缓冲液槽8的 上面覆盖了一层铝箔纸，以防止底物缓冲液9渗漏，其上有缓冲液按钮，按下缓冲液按钮可 刺破铝箔纸，并将展开液垫5的下端浸入到底物缓冲液9中。检测线6位于硝酸纤维素膜 1的中上端，其上固定化有鼠抗A型流感病毒核蛋白抗体2。质控线7位于硝酸纤维素膜1 的中上端、检测线6的上游，其上固定化有羊抗鼠多抗。 优选地，所述标记单克隆抗体1其重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID No. 2、轻链 可变区的氨基酸序列为SEQ ID No. 3 ;以及所述固定单克隆抗体2其重链可变区的氨基酸序 列为SEQ ID No. 4、轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID No. 5。 本专利技术所用术语单克隆抗体是指获自基本上同源的抗体群的抗体，即组成该群 体的抗体个体都相同，除了可能存在少量可能的自发突变。因此，修饰语单克隆是指该 抗体的性质不是离散抗体的混合物。优选地，所述单克隆抗体包括单价的或是单链抗体、双 链抗体、嵌合抗体、人源化抗体以及上述抗体的衍生物、功能等同物和同源物，也包括抗体 片段和含有抗原结合结构域的任何多肽。 本专利技术所述抗体应该解释为涵盖具有所需特异性的结合结构域的任意特异性 结合因子。因而，这个术语涵盖了与之同源的抗体片段、衍生物、人源化抗体以及抗体的功 能等同物和同源物，也包括含有抗原结合结构域的任何多肽，无论是天然的还是合成产生 的。抗体的实例是免疫球蛋白亚型（如IgG，IgE，IgM，IgD和IgA)及其亚型亚类；也可以 是包含抗原结合结构域的片段如Fab、scFv、Fv、dAb、Fd ;和双链抗（diabodies)。融合至另 一多肽的、包含抗原结合结构域的嵌合体分子或者等同物也包括在其中。嵌合抗体的克隆 与表达在 EP. A. 0120694 和 EP. A. 0125023 中描述。 本专利技术所述抗体可以通过许多方式修饰，可用DNA重组本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种用于检测样品中流感病毒的试剂盒，其中，所述试剂盒包括缓冲液供应单元和检测试纸条；所述缓冲液供应单元用于将缓冲液供给所述检测试纸条；所述检测试纸条包括硝酸纤维素膜(1)，所述检测试纸条在纵向上依次包括底物供应区，样品供应区，检测区；所述底物供应区包括底物垫(3)，其上吸附有干燥的酶底物，所述底物垫(3)与硝酸纤维素膜(1)接触，所述酶底物溶于缓冲液中并在硝酸纤维素膜(1)上向距所述缓冲液供应单元的远端迁移；所述样品供应区包括酶标垫(2)，其上吸附有鼠抗A型流感病毒核蛋白抗体标记单克隆抗体1，所述酶底物能与所述标记单克隆抗体1上标记的酶产生显色反应，所述酶标垫(2)与硝酸纤维素膜(1)接触，所述标记单克隆抗体1溶于缓冲液中，并在硝酸纤维素膜(1)上向距所述缓冲液供应单元的远端迁移；以及所述检测区固定化有鼠抗A型流感病毒核蛋白抗体固定单克隆抗体2。
【技术特征摘要】
1. 一种用于检测样品中流感病毒的试剂盒，其中，所述试剂盒包括缓冲液供应单元和 检测试纸条； 所述缓冲液供应单元用于将缓冲液供给所述检测试纸条； 所述检测试纸条包括硝酸纤维素膜（1)，所述检测试纸条在纵向上依次包括底物供应 区，样品供应区，检测区； 所述底物供应区包括底物垫（3)，其上吸附有干燥的酶底物，所述底物垫（3)与硝酸纤 维素膜（1)接触，所述酶底物溶于缓冲液中并在硝酸纤维素膜（1)上向距所述缓冲液供应 单元的远端迁移； 所述样品供应区包括酶标垫（2)，其上吸附有鼠抗A型流感病毒核蛋白抗体标记单克 隆抗体1，所述酶底物能与所述标记单克隆抗体1上标记的酶产生显色反应，所述酶标垫 (2)与硝酸纤维素膜（1)接触，所述标记单克隆抗体1溶于缓冲液中，并在硝酸纤维素膜 (1)上向距所述缓冲液供应单元的远端迁移；以及 所述检测区固定化有鼠抗A型流感病毒核蛋白抗体固定单克隆抗体2。2. 根据权利要求1所述的试剂盒，其中，所述缓冲液供应单元包括展开液垫（5)、底物 缓冲液槽（8)、底物缓冲液（9)和缓冲液按钮，所述底物缓冲液（9)置于底物缓冲液槽（8) 中，所述缓冲液按钮位于底物缓冲液槽（8)的上方，按下可将所述展开液垫（5)浸入缓冲液 (9)中； 所述检测区包括检测线（6)、质控线（7)，其中，所述质控线（7)较检测线（6)更远离所 述样品供应区，在所述检测线￠)固定化有鼠抗A型流感病毒核蛋白抗体固定单克隆抗体 2,在所述质控线（7)固定化有羊抗鼠多抗，且吸附在酶标垫（2)上的标记单克隆抗体1对 于固定在检测线（6)的固定单克隆抗体2而言是过量的； 所述硝酸纤维素膜（1)全段粘附在所述支撑物（10)上，支撑物（10)连接所述缓冲液 供应单元，底物供应区，样品供应区，检测区以及吸水垫（4)，所述吸水垫（4)在距所述缓冲 液供应单元的最远端；以及 检测样品（11)加入的位置为所述酶标垫（2)的位置。3. 根据权利要求1所述的...
【专利技术属性】
技术研发人员：张许科，孙进忠，李凡，田克恭，
申请(专利权)人：洛阳普莱柯万泰生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：河南;41
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