乙型肝炎疫苗制造技术

本发明专利技术涉及一种药物组合物，其包含：i)HBsAg、该抗原的片段、该抗原的变体，或者其至少两种的混合物，ii)HBcAg1-X、该抗原的片段、该抗原或者该抗原的片段的变体，或者其至少两种的混合物，其中X是149-183的整数，iii)CpG-ODN，该寡聚核苷酸为全硫代修饰，其序列中具有两个或两个以上拷贝的5’-NTCGTT-3’基序，其长度为21个碱基。本发明专利技术还涉及该组合物用于治疗HBV感染和HBV介导的疾病中的用途，以及治疗HBV感染和HBV介导的疾病的方法。

【技术实现步骤摘要】
乙型肝炎疫苗
本专利技术涉及一种乙型肝炎疫苗。特别地，本专利技术涉及一种乙型肝炎疫苗，其包含乙肝表面抗原、乙肝核心抗原和具有免疫刺激活性的硫代寡聚脱氧核苷酸。
技术介绍
乙型肝炎病毒(HBV)感染是世界范围的严重公共卫生问题之一。HBV感染是导致慢性乙型肝炎、肝硬化和肝细胞癌的重要原因(FattovichG.JHepatol2008；48：335-352)。临床治疗慢性HBV感染的常用药物主要有核苷类似物和干扰素。核苷类似物无法完全清除肝细胞内的cccDNA，且长期使用易导致耐药突变株的出现以及停药后反弹(KwonH，LokAS.NatRevGastroenterolHepatol.2011；8：275-284.)。干扰素不适合用于无症状的HBV携带者，在慢性HBV患者中，使用半年后HBeAg血清学转换发生率仅33％，而且干扰素副作用较大也限制其应用(TangSX，YuGL.Lancet1990；335(8684)：302)。目前广泛应用的乙肝蛋白疫苗通过诱导体液免疫，产生保护性抗体，达到预防的目的。大量的研究发现保护性抗体仅能够消除胞外病毒颗粒，而清除胞内感染的病毒则主要依赖特异性的细胞免疫反应，辅助性T细胞、CD4+T细胞产生的IFN-γ等Th1型细胞因子，尤其是病毒特异性的杀伤性T淋巴细胞(cytotoxicTlymphocyte，CTL)来清除(ChinR，LacaminiS.RevMedViorl.2003：13(4)：255-72)。细胞免疫反应的强弱直接决定着乙肝的预后。因此，理想的治疗性乙肝疫苗需要同时诱导特异性的体液免疫和细胞免疫，突破乙肝的免疫耐受。目前国内大多数乙肝治疗性疫苗的研发思路围绕着HBsAg，通过克服免疫耐受，产生抗HBsAg的抗体达到免疫清除的效果，如闻玉梅的HBsAg-免疫球蛋白复合物(XuDZ，ZhaoK，etal.PLoSONE，2008，3：e2565)，张宜俊的高剂量乙肝表面抗原疫苗(曾滢，张宜俊等，广东医学，2003年24卷07期，740-706页)等均采用此思路，从其最新的临床数据来看，这两个疫苗的治疗效果还不明朗。研究表明，慢性乙肝感染患者的抗HBsAg的抗体亚型以IgG4为主，而乙肝感染治愈的患者的抗HBsAg的抗体亚型为IgG1≥IgG4，说明在乙肝感染的清除过程中Th1型抗体亚型IgG1发挥着重要的作用，评价Th1型抗体亚型是否高于或者等于Th2型抗体亚型可能提示乙肝治疗的效果(S.Rath，etal.Clin.exp.Immunol.(1988)72，164-167)。同时，乙肝感染患者的抗HBcAg抗体亚型为IgG1＞IgG3＞IgG4，而乙肝感染治愈的患者的抗HBcAg亚型发生转变，为IgG3＞IgG1＞IgG4，说明抗HBcAg特别是抗HBcAg的抗体亚型的转变可能与乙肝的治疗息息相关(Chien-FuHuang，etal.Cellular&MolecularImmunology.2006；3(2)：97-106.)。此外，还有研究表明，慢性乙肝病毒携带者和慢性乙肝患者的树突状细胞(pDC)表面受体TLR9表达下调，从而导致机体对乙肝表面抗原的免疫耐受，不能产生乙肝表面抗体或对乙肝表面抗原的细胞免疫(Q.Xieetal.MicrobesandInfection11(2009)515-523)。专利US4547367利用HBcAg颗粒治疗/预防HBV感染和HBV介导的疾病，HBcAg颗粒免疫黑猩猩可保护黑猩猩免于感染HBV。而且HBcAg颗粒联合HBsAg颗粒免疫乙肝携带者母亲生产的新生儿，产生高滴度的抗HBsAg和抗HBcAg抗体，且在18个月的监测中均未见HBV感染。但是该专利并无明确提出抗HBcAg抗体亚型转变的证据，且无治疗HBV感染和HBV介导的疾病的直接证据。专利WO2007/031334，保护了乙肝治疗性疫苗组分，其包含HBsAg、HBcAg和一种皂苷佐剂，而CpG-ODN可作为共用佐剂使用，但是，该乙肝治疗性疫苗在临床中需要联合核苷类似物进行联合治疗才能突破乙肝的免疫耐受，且e抗原转阴仅25％。
技术实现思路
本专利技术涉及一种药物组合物，其包含：i)乙肝表面抗原(HBsAg)，ii)乙肝核心抗原(HBcAg)，iii)CpG寡聚脱氧核苷酸(CpG-ODN)和iv)可药用载体。特别地，本专利技术的药物组合物用作预防性或治疗性疫苗。在某些实施方案中，所述药物组合物由上述组分i)--iv)组成。在本专利技术的一些实施方案中，所述HBsAg具有SEQIDNO：1所示序列。在本专利技术的另一些实施方案中，所述HBcAg具有SEQIDNO：2所示序列。在本专利技术的又一些实施方案中，所述CpG-ODN包含硫代磷酸酯连接。特别地，所述CpG-ODN为硫代寡聚脱氧核苷酸，优选地为全硫代寡聚脱氧核苷酸。在本专利技术的又一些实施方案中，所述CpG-ODN包含两个或更多的5’-NTCGTT-3’基序。在本专利技术的又一些实施方案中，所述CpG-ODN长度为15～35个核苷酸，优选20～25个核苷酸。在本专利技术的又一些实施方案中，所述CpG-ODN具有选自下列的序列：5’-TCGTTCGTTCGTTCGTTCGTT-3’(SEQIDNO：3)、5’-TCGTTCGTTCGTTCGTTCGTTCGTT-3’(SEQIDNO：4)、5’-TCGTCGTCGTCGTCGTCGTCG-3’(SEQIDNO：5)和5’-TCCATGACGTTCCTGACGTT-3’(SEQIDNO：6)，优选地所述CpG-ODN具有序列：5’-TCGTTCGTTCGTTCGTTCGTT-3’。在本专利技术的又一些实施方案中，所述药物组合物中的组分i)，ii)以及iii)之间的相对重量比范围是1∶0.2～5∶1～50，优选为1∶1～5∶2～15。本专利技术还涉及一种乙型肝炎疫苗，其包含：i)乙肝表面抗原(HBsAg)，ii)乙肝核心抗原(HBcAg)，iii)CpG寡聚脱氧核苷酸(CpG-ODN)以及iv)可药用载体。本专利技术还涉及一种药盒，其包含根据本专利技术的药物组合物或乙型肝炎疫苗以及其使用说明。在一个方面，本专利技术涉及根据本专利技术的药物组合物在制备用于在对象中治疗HBV感染和/或HBV介导的疾病之药物中的用途，优选地所述HBV感染和/或HBV介导的疾病选自乙型肝炎、肝硬化和肝癌。在又一个方面，本专利技术涉及根据本专利技术的药物组合物在制备用于在对象中产生针对HBV的免疫应答(优选地，诱导Th1和Th2型免疫应答)之药物中的用途。在另一个方面，本专利技术涉及根据本专利技术的药物组合物在制备用于在对象中使抗HBcAg抗体发生亚型转变之药物中的用途。在又一个方面，本专利技术涉及根据本专利技术的药物组合物在制备用于在对象中突破乙型肝炎病毒免疫耐受之药物中的用途。在又一个方面，本专利技术涉及根据本专利技术的药物组合物在制备用于在对象中实现乙肝表面抗原Th1/Th2免疫应答平衡(例如，大致相当地诱导Th1和Th2型免疫应答)之药物中的用途。在又一个方面，本专利技术涉及一种药物组合物，其包含：i)乙肝表面抗原(HBsAg)，ii)乙肝核心抗原(HBcAg)，和iii)CpG寡聚脱氧核苷酸(CpG-ODN)，其用于在对象中治疗HBV感染和/或HBV介导的本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种药物组合物，其包含：i)乙肝表面抗原(HBsAg)，ii)乙肝核心抗原(HBcAg)，iii)CpG寡聚脱氧核苷酸(CpG‑ODN)，和iv)可药用载体。

【技术特征摘要】
1.一种药物组合物，其由以下组成：i)乙肝表面抗原，ii)乙肝核心抗原，iii)CpG寡聚脱氧核苷酸，和iv)可药用载体；其中所述CpG寡聚脱氧核苷酸为选自下列的序列：5’-TCGTTCGTTCGTTCGTTCGTT-3’(SEQIDNO:3)、5’-TCGTTCGTTCGTTCGTTCGTTCGTT-3’(SEQIDNO:4)、5’-TCGTCGTCGTCGTCGTCGTCG-3’(SEQIDNO:5)和5’-TCCATGACGTTCCTGACGTT-3’(SEQIDNO:6)；并且组分i)，ii)以及iii)之间的相对重量比范围是1:0.2～5:1～50。2.根据权利要求1所述的药物组合物，其用作预防性或治疗性疫苗。3.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述乙肝表面抗原为SEQIDNO:1所示序列。4.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述乙肝核心抗原为SEQIDNO:2所示序列。5.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述CpG寡聚脱氧核苷酸包含硫代磷酸酯连接。6.根据权利要求5所述的药物组合物，...

【专利技术属性】
技术研发人员：杜笑寒，葛君，庄晓倩，宋翠灵，周童，孙莹，王美菊，
申请(专利权)人：江苏先声药业有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32