清除淀粉样多肽的细胞及其应用制造技术

本发明专利技术涉及清除淀粉样多肽的细胞及其应用，首次揭示了NG2细胞可以被Aβ激活并吞噬Aβ。NG2细胞可作为一个药学靶点来研究和筛选激活或促进NG2吞噬Aβ的药物，本发明专利技术为脑中Aβ过量导致的神经退行性疾病的治疗提供了有效途径。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于细胞生物学和药学领域；更具体地，本专利技术涉及清除淀粉样多肽的细胞及其应用。
技术介绍
阿尔茨海默病(Alzheimer disease，AD)是老年痴呆症的最常见的形式。在神经病理学上有三大特征：沉积在细胞外的淀粉样蛋白斑；细胞内的神经纤维缠结和特定脑区的神经元死亡。β淀粉样多肽(Aβ)是淀粉样蛋白斑的主要成分，其是由淀粉样前体蛋白(APP)经由不同的内切蛋白酶催化剪切而形成的自然代谢产物。有三种蛋白酶参与了APP的剪切过程，按其剪切位点的发现顺序，分别称为α-分泌酶，β-分泌酶和γ-分泌酶。APP的剪切过程可分为淀粉样途径和非淀粉样途径。淀粉样途径主要是β-分泌酶先把APP剪切成两个片段：游离形式的N-端蛋白片段(sAPPβ)和留在膜上的含β淀粉样多肽的C-端(C99)。γ-分泌酶复合体进一步剪切C-端，产生Aβ和APP胞内结构域片段(APP intracellular domain，AICD)。大部分的全长Aβ由40个氨基酸组成(Aβ40)，仅有约10%由42个氨基酸组成(Aβ42)。Aβ42由于多了两个疏水的氨基酸残基而更易于聚集，同时也是淀粉样蛋白斑的主要成分。Aβ自身可自发地聚集从而形成多种共存形式。可由2-6个多肽形成寡聚体，并进一步融合形成中间聚集体；也可以形成纤维，并排列为β-折叠片，进一步形成不可溶纤维，最终导致淀粉样蛋白斑的形成。可溶性寡聚体和淀粉样中间聚集体是Aβ毒性最高的两种形式。随着对AD研究的深入，越来越多的研究者认为，很多AD患者可能由于大脑清除Aβ的功能出现障碍，致使生命过程中正常生成的Aβ无法被及时清除，从而导致了AD。遗传有载脂蛋白E4(apolipoprotein E4，ApoE4)一个或两个等位基因的个体更容易患上AD，通过对其病因的研究，发现携带ApoE4等位基因的个体Aβ的生成量并没有增加，在细胞水平共表达APP和ApoE也没有改变细胞Aβ的生成量。人的神经病理性损伤分析和动物模型研究表明，ApoE使大脑中的Aβ总体水平稳定升高，可能增加了Aβ的纤维形成能力和/或是降低了Aβ的清除。尽管其具体机制还尚未研究清楚，ApoE介导的大脑中Aβ水平的增高至少提示了细胞在Aβ的清除方面存在功能障碍。真核细胞中有两条主要的胞内蛋白降解途径：泛素-蛋白酶体途径(ubiquitin/proteasome pathway，UPP)和自噬-溶酶体途径(autophagy/lysosome pathway，ALP)。据报道，很多神经退行性疾病的病理都与泛素-蛋白酶体途径和自噬-溶酶体途径的功能障碍有关。有研究表明，Aβ既能被蛋白酶体降解，又能抑制其活性。如果蛋白酶体活性受到抑制，将被降解的已泛素化蛋白就会积累起来，这将引起神经元退行和死亡。而AD最主要的特征就是沉积在细胞外的淀粉样蛋白斑和细胞内的神经纤维缠结，这有可能是由于泛素蛋白酶体的功能异常，导致Aβ不能被及时清除，从而形成淀粉样蛋白斑，并对周围神经细胞产生毒性作用，引起一系列的病理损伤。当泛素蛋白酶体介导的蛋白质降解过程受到损伤或呈减弱趋势，这将促使自噬-溶酶体降解途径担负起更多的蛋白降解功能。综上，本领域有必要研究有效清除细胞内Aβ的有效产品和途径，以期应用于AD疾病的治疗。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供清除淀粉样多肽的细胞及其应用。在本专利技术的第一方面，提供一种筛选潜在的防治神经退行性疾病的药物的方法，所述方法包括：(1)用β淀粉样多肽(Aβ)处理NG2细胞(包括NG2细胞系)，并确定细胞吞噬β淀粉样多肽的程度(包括吞噬效率)；(2)在候选物质存在下，如(1)所述处理NG2细胞，再次确定细胞吞噬β淀粉样多肽的程度；和(3)比较(1)和(2)中细胞吞噬β淀粉样多肽的差异；其中，如果(2)中细胞吞噬β淀粉样多肽的程度在统计学上高于(优选显著高于，如高20%，较佳地高40%；更佳地高60%或更高)(1)中细胞吞噬β淀粉样多肽的程度，则所述候选物质是潜在的防治神经退行性疾病的药物。在一个优选例中，所述的方法的(1)和(2)中，还包括：确定NG2细胞中β淀粉样多肽被转运到溶酶体中的量；并且，(3)中，还包括：比较(1)和(2)中β淀粉样多肽被转运到溶酶体中的量；其中，如果(2)中β淀粉样多肽被转运到溶酶体中的量在统计学上高于(优选显著高于，如高20%，较佳地高40%；更佳地高60%或更高)(1)中β淀粉样多肽被转运到溶酶体中的量，则所述候选物质是潜在的防治神经退行性疾病的药物。在另一优选例中，所述方法的(1)和(2)中，还包括：确定细胞中β淀粉样多肽被降解的效率；并且，(3)中，还包括：比较(1)和(2)中β淀粉样多肽被降解(或被清除)的效率；其中，如果(2)中β淀粉样多肽被降解的效率在统计学上高于(优选显著高于，如高20%，较佳地高40%；更佳地高60%或更高)(1)中β淀粉样多肽被降解的效率，则所述候选物质是潜在的防治神经退行性疾病的药物。在另一优选例中，所述方法的(1)和(2)中，还包括：确定细胞中自噬体数量；并且，(3)中，还包括：比较(1)和(2)中的自噬体数量；其中，如果(2)中自噬体数量在统计学上高于(优选显著高于，如高20%，较佳地高40%；更佳地高60%或更高)(1)中自噬体数量，则所述候选物质是潜在的防治神经退行性疾病的药物。在另一优选例中，所述方法的(1)和(2)中，还包括：确定细胞中lamp1、lamp2、LC3-II、P62或beclin1基因或它们编码的蛋白的表达情况；并且，(3)中，还包括：比较(1)和(2)中的lamp1、lamp2、LC3-II、P62或beclin1基因或它们编码的蛋白的表达情况；其中，如果(2)中lamp1、lamp2、LC3-II、P62或beclin1基因或它们编码的蛋白的表达在统计学上高于(优选显著高于，如高20%，较佳地高40%；更佳地高60%或更高)(1)中相应基因或蛋白的表达，则所述候选物质是潜在的防治神经退行性疾病的药物。在另一优选例中，所述的β淀粉样多肽、溶酶体或自噬体标记有可检测信号，如荧光信号。在另一优选例中，通过鉴定β淀粉样多肽上可检测信号的定位来确定β淀粉样多肽的定位，进而确定β淀粉样多肽的吞噬程度或降解情况。在另一优选例中，所述方法的(1)或(2)中，所述的NG2细胞以50nM～50μM(较佳地为100nM～20μM；更佳地为200nM～10μM)β淀粉样多肽处本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种筛选潜在的防治神经退行性疾病的药物的方法，其特征在于，所述方法包括：(1)用β淀粉样多肽处理NG2细胞，并确定细胞吞噬β淀粉样多肽的程度；(2)在候选物质存在下，如(1)所述处理NG2细胞，再次确定细胞吞噬β淀粉样多肽的程度；和(3)比较(1)和(2)中细胞吞噬β淀粉样多肽的差异；其中，如果(2)中细胞吞噬β淀粉样多肽的程度在统计学上高于(1)中细胞吞噬β淀粉样多肽的程度，则所述候选物质是潜在的防治神经退行性疾病的药物。

【技术特征摘要】
1.一种筛选潜在的防治神经退行性疾病的药物的方法，其特征在于，所述
方法包括：
(1)用β淀粉样多肽处理NG2细胞，并确定细胞吞噬β淀粉样多肽的程度；
(2)在候选物质存在下，如(1)所述处理NG2细胞，再次确定细胞吞噬β淀
粉样多肽的程度；和
(3)比较(1)和(2)中细胞吞噬β淀粉样多肽的差异；
其中，如果(2)中细胞吞噬β淀粉样多肽的程度在统计学上高于(1)中细胞吞
噬β淀粉样多肽的程度，则所述候选物质是潜在的防治神经退行性疾病的药
物。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，(1)和(2)中，还包括：确定NG2
细胞中β淀粉样多肽被转运到溶酶体中的量；并且，
(3)中，还包括：比较(1)和(2)中β淀粉样多肽被转运到溶酶体中的量；
其中，如果(2)中β淀粉样多肽被转运到溶酶体中的量在统计学上高于(1)
中β淀粉样多肽被转运到溶酶体中的量，则所述候选物质是潜在的防治神经退
行性疾病的药物。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，(1)和(2)中，还包括：确定细
胞中β淀粉样多肽被降解的效率；并且，
(3)中，还包括：比较(1)和(2)中β淀粉样多肽被降解的效率；
其中，如果(2)中β淀粉样多肽被降解的效率在统计学上高于(1)中β淀粉样
多肽被降解的效率，则所述候选物质是潜在的防治神经退行性疾病的药物。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，(1)和(2)中，还包括：确定细
胞中自噬体数量；并且，
(3)中，还包括：比较(1)和(2)中的自噬...

【专利技术属性】
技术研发人员：柯尊记，骆嘉，李文霞，唐义芬，范志勤，
申请(专利权)人：中国科学院上海生命科学研究院，
类型：发明
国别省市：上海;31