配制含有至少两种能够吸附到羟基氧化铝上的抗原的疫苗的方法技术

本发明专利技术的主题是制备疫苗组合物的方法，所述疫苗组合物包含羟基氧化铝（AlOOH）和至少一种乙型肝炎表面抗原与B型流感嗜血杆菌抗原。根据本发明专利技术，该乙型肝炎表面抗原保持吸附在AlOOH上，而Hib抗原保持未吸附。为此。将该乙型肝炎表面抗原吸附到AlOOH上以获得AlOOH/HBsAg复合物，随后使所述AlOOH/HBsAg复合物与Hib抗原在浓度为至少100mg/l的阳离子氨基酸和浓度为35至45mMol/l的磷酸根离子的存在下混合。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】本专利技术涉及包含由乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)组成的乙型肝炎效价(hepatitis B valence consisting of the hepatitis B virus surface antigen)和由其荚膜多糖——称为多聚核糖磷酸盐(PRP)组成的B型流感嗜血杆菌效价(HBsAg) XHaemophilusinfluenzae type b valence, consisting of its capsular polysaccharide, calledpolyribosylribitol phosphate (PRP))的疫苗组合的领域,所述荚膜多糖为了有效用于两岁以下儿童而缀合到载体蛋白例如破伤风蛋白上。此类组合(其意在施用于幼儿)通常包含能够在单一操作中针对几种疾病接种的其它抗原，以及铝基佐剂。因此，专利申请WO 99/13906公开了一种疫苗组合物，如第13页中所述，包含针对白喉、破伤风、脊髓灰质炎、百日咳、乙型肝炎和B型流感嗜血杆菌感染的抗原。这些抗原的一部分必须吸附到铝盐上以便是免疫原性的。这尤其是具有乙型肝炎表面抗原或HBsAg的情况。但是，如申请WO 99/13906的第12页上所示，由缀合到破伤风蛋白上的荚膜多糖组成的该Hib效价当其吸附到招盐上时倾向于经时(au cours du temps)丧失其免疫原性。为了避免这一缺点，现有技术中提出的解决方案是，如已经在在线申请PCT/FR96/00791中建议的那样，添加阴离子，特别是磷酸根、碳酸根或柠檬酸根离子。但是，本专利技术的作者已经注意到，虽然添加阴离子特别是添加磷酸根或碳酸根实际上能够防止PRP-T吸附到羟基氧化铝(A100H)上，并因此经时保持其免疫原性，这种添加仍具有解吸附乙型肝炎表面抗原的缺点(当后者本身已经吸附到羟基氧化铝上时)。因此需要寻找一种制备包含羟基氧化铝的疫苗组合的方法，其中该乙型肝炎表面抗原保持吸附在A100H上，而Hib抗原保持未吸附。为此，本专利技术的主题是用于制备液体疫苗组合的方法，所述液体疫苗组合包含至少:-一种乙型肝炎表面抗原(HBsAg) (hepatitis B surface antigen (HBsAg)), -一种由缀合到载体蛋白上的荚膜多糖组成的B型流感嗜血杆菌(Hib)抗原(Maemophilus influenzae type b (Hib) antigen consisting of capsular polysaccharideconjugated to a carrier protein), -羟基氧化铝(A100H)， 其中该乙型肝炎表面抗原保持吸附在A100H上，而该Hib抗原保持未吸附， 其中: -该乙型肝炎表面抗原吸附到A100H上以获得AlOOH/HBsAg复合物， -所述AlOOH/HBsAg复合物在浓度为至少100 mg/1的阳离子氨基酸和浓度为35至45mMol/1磷酸根离子的存在下与该Hib抗原混合。借助本专利技术的方法，有可能在保持乙型肝炎表面抗原在羟基氧化铝上的吸附和保持Hib抗原的未吸附之间实现所需平衡。根据本专利技术的一个特定实施方案，通过在搅拌下混合AlOOH的悬浮液与HBsAg的悬浮液至少4小时，优选至少12小时，优选20至24小时将该HBsAg抗原吸附到铝上。根据本专利技术的一个特定实施方案，在与Hib抗原混合前将阳离子氨基酸添加到所述AlOOH/HBsAg复合物中。根据本专利技术的一个替代实施方案，在与AlOOH/HBsAg复合物混合前将阳离子氨基酸添加到所述Hib抗原中。根据本专利技术的一个实施方案，在与Hib抗原混合前将磷酸根离子添加到所述AlOOH/HBsAg复合物中。根据本专利技术的一个实施方案，在与Hib抗原混合前将包含AlOOH/HBsAg复合物的制剂的pH值调节至7.1 ± 0.1。本专利技术的主题还是根据所要求保护的方法获得的疫苗组合，并包含至少: -该乙型肝炎表面抗原(hepatitis B surface antigen), -白喉毒素 D 形式的白喉抗原(diphtheria antigen in the form of diphtheria toxinD)，-破伤风毒素 T 形式的破伤风抗原(tetanus antigen in the form of tetanus toxinT)， -纯化毒素(PTxd)和丝状血凝素(FHA)形式的百日咳抗原(whooping cough antigensin the form of Purified Toxin (PTxd) and of Filamentous Hemagglutinin (FHA)), -缀合到破伤风蛋白上的多聚核糖磷酸盐(PRP-T)形式的B型流感嗜血杆菌抗原{Haemophilus influenzae type b antigen, in the form of polyribosylribitol phosphateconjugated to the tetanus protein (PRP-T))， -灭活的I型、2型和3型病毒形式的脊髓灰质炎抗原(pol1 antigens in the form ofinactivated type I, 2 and 3 viruses)。此类疫苗组合物具有为液体形式的优点，由此避免了获取冻干物的操作；其已经被证实足够稳定以保持免疫原性直到使用时，即使在其制造日期后36个月。根据本专利技术，该疫苗组合物包含乙型肝炎表面抗原(HBsAg)。该抗原特别是乙型肝炎表面抗原，如存在于Recombivax HB ?疫苗，或任何其它乙型肝炎疫苗中的抗原。其特别可以是通过已经根据Crucell开发的技术修饰的多形汉逊酵母(Zimse/wJa polymorphayeast)发酵获得的重组抗原，如存在于Ifepavax-Gene ?疫苗中的重组抗原。对本专利技术的目的而言，存在于0.5毫升剂量中的HBsAg的量有利地为5至15 Pg，特别是10 Pg。根据本专利技术，该疫苗组合物包含B型流感嗜血杆菌(Hib)祝^XHaemophiIusinfluenzae type b (Hib) antigen)。这种抗原由缀合到(conjugu6 ?)载体蛋白上的细菌的荚膜多糖或多聚核糖磷酸盐(PRP)组成。该载体蛋白可以是疫苗领域的这一方面中使用的任何蛋白质。其可以是例如白喉毒素D (diphtheria toxin D)、破伤风毒素T (tetanustoxin T)、流感嗜血杆菌脂蛋白 D {Haemophilus influenzae lipoprotein D)、CRM197 或脑膜炎奈瑟氏球菌外膜蛋白(OMP) (CRM197 or the N.meningitidis outer membrane protein(OMP))。优选使用破伤风蛋白以获得PRP-T缀合物。对本专利技术的目的而言，该PRP-T缀合物可以以每0.5 ml剂量I至30 Pg的PRP ;有利地为每剂量5至25 Pg的PRP ;优选每剂量10至15 μδ的PRP ;完全优选每剂量10至12 μδ的PRP和更特别为12 μδ的PRP的比例存在，缀合到本文档来自技高网...

【技术保护点】
制备液体疫苗组合的方法，所述液体疫苗组合包含至少：‑ 羟基氧化铝 (AlOOH),‑ 一种乙型肝炎表面抗原（HBsAg），‑ 一种由缀合到载体蛋白上的荚膜多糖组成的B型流感嗜血杆菌（Hib）抗原，其中该乙型肝炎表面抗原保持吸附在AlOOH上，而该Hib抗原保持未吸附，其中：‑ 该乙型肝炎表面抗原吸附到AlOOH上以获得AlOOH/HBsAg复合物，‑ 所述AlOOH/HBsAg复合物在浓度为至少100 mg/l的阳离子氨基酸和浓度为35至45 mMol/l磷酸根离子的存在下与该Hib抗原混合。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2012.01.17 FR 12504641.制备液体疫苗组合的方法，所述液体疫苗组合包含至少: -羟基氧化铝(AlOOH)， -一种乙型肝炎表面抗原(HBsAg)， -一种由缀合到载体蛋白上的荚膜多糖组成的B型流感嗜血杆菌(Hib)抗原， 其中该乙型肝炎表面抗原保持吸附在A100H上，而该Hib抗原保持未吸附， 其中: -该乙型肝炎表面抗原吸附到A100H上以获得AlOOH/HBsAg复合物， -所述AlOOH/HBsAg复合物在浓度为至少100 mg/1的阳离子氨基酸和浓度为35至45mMol/1磷酸根离子的存在下与该Hib抗原混合。2.如权利要求1中所要求保护的方法，其中通过在搅拌下混合A100H的悬浮液与HBsAg的悬浮液至少4小时，优选至少12小时，优选20至24小时将该HBsAg抗原吸附到铝上。3.如前述权利要求之一所要求保护的方法，其特征在于在与Hib抗原混合前将阳离子氨基酸添加到所述AlOOH/HBsAg复合物中。4.如权利要求1和2 之一所要求保护的方法，其特征在于在与AlOOH/HBsAg复合物混合前将阳离子氨基酸添加到所述Hib抗原中。5.如前述权利要求之一所要求保护的方法，其特征在于在与Hib抗原混合前将磷酸根离子添加到所述AlOOH/HBsAg复合物中。6.如前述权利要求之一所要求保护的方法，其特征在于与Hib抗原混合前将包含AlOOH/HBsAg复合物的制剂的pH值调节至7.1 ± 0.1。7.如权利要求1中所要求保护的方法，其特征在于所述方法还包括: -制备包含至少一种选自白喉、破伤风、脊髓灰质炎和百日咳抗原的抗原，以及羟基氧化铝的组合物，和 -在进行与Hib抗原的混合之前，将所述AlOOH/HBsAg复合物与所述组合物混合。8.如权利要求7中所要求保护的方法，其特征在于其包括通过将各抗原连续添加到羟基氧化铝悬浮液中并在各抗原加入之间搅拌来制备所述组合物。9.如权利要求1中所要求保护的方法，其特征在于: -将HBsAg吸附到占最终组合物中存在的A100H总量的三分之一的部分量A100H上20至24小时以形成AlOOH/HBsAg复合物， -平行地，将下列物质连续吸附到附加量的A100H上:白喉毒素D、破伤风毒素T、本身预吸附到A100H上的百日咳博代氏杆菌纯化毒素PTxd、和本身预吸附到A100H上的百日咳博代氏杆菌丝状血凝素FHA，随...

【专利技术属性】
技术研发人员：L贝尔托，I沙科纳克，A弗朗孔，JF奥，S伦奇格拉夫，
申请(专利权)人：赛诺菲巴斯德有限公司，
类型：发明
国别省市：法国;FR