鉴定或辅助鉴定水貂组织和/或器官的PCR引物对及其应用制造技术

本发明专利技术公开了鉴定或辅助鉴定水貂组织和/或器官的PCR引物对及其应用。本发明专利技术提供的鉴定或辅助鉴定动物组织和/或器官的PCR引物对组合物，为组合物1、组合物2、组合物3或组合物4；组合物1由clf、vvf和mv组成；组合物2由vvf、np和mv组成；组合物3由clf和mv组成；组合物4由vvf和mv组成。本发明专利技术还提供了鉴定或辅助鉴定水貂组织和/或器官的引物对mv。本发明专利技术中的四对引物中的每个单链DNA均选用了62℃的退火温度，实现了在同一温度一次PCR完成所有鉴定，且特异性强，检测过程耗时短。

【技术实现步骤摘要】
鉴定或辅助鉴定水貂组织和/或器官的PCR引物对及其应用
本专利技术涉及鉴定或辅助鉴定水貂组织和/或器官的PCR引物对及其应用。
技术介绍
目前在国内生肉和肉制品的生产和销售领域，一些不法商贩为了牟取暴利，利用掺杂掺假等手段欺骗消费者的事件时有发生，比如用狐狸、貉子和水貂的肉冒充狗肉、牛肉和羊肉等。因此一套快速、准确鉴别肉种类，并且能够适应混合肉制品鉴定的方法，无疑会为执法人员提供了强大的技术支撑。传统的肉制品鉴定的方法主要是基于蛋白质水平的分析，包括电泳法、免疫法、ELISA等技术。操作过程中首先需制备相应物种的抗体，然后抗原和抗体间进行免疫反应，最后通过电泳或者显色等方法进行鉴别。这类鉴别技术受蛋白质(主要起作用的部分为抗原决定簇)结构的影响很大，实际应用中经常出现的问题包括:1.热加工过程会改变蛋白质(抗原决定簇)的结构，因而无法检测热加工的肉类；2.对混合肉类的检测可能出现交叉反应，因为不同物种蛋白质的结构可能具有某种程度的相似性，检验的灵敏程度取决于制备的抗体的特异性强弱。基于以上原因，以核酸为基础的检测方法成为近几年食品检测领域的发展方向，包括DNA分子杂交法和PCR方法等。DNA分子杂交法操作复杂，且成本较高，目前以逐渐被PCR方法所取代。PCR方法灵敏度高、特异性强，可对混合肉类进行鉴别和区分，即使掺杂少量异种肉，也能用PCR方法加以鉴别；PCR方法可用于热加工的肉制品鉴别当中，高温过程仅仅打断了核酸的片断，并不会完全降解核酸，因而热加工的肉制品当中仍然存在可扩增的模板，这在饲料工业肉骨粉来源的鉴别过程中得到了很好的证实；PCR反应迅速，结果易于观测，使得这种检测方法目前广泛应用在饲料、保健品的动物源性成分的鉴别当中。PCR技术中，引物设计是PCR成功的关键因素，好的引物将是检测实验更加快捷，结果更加清晰。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是提供一种鉴定或辅助鉴定动物组织和/或器官的PCR引物对组合物。本专利技术所提供的鉴定或辅助鉴定动物组织和/或器官的PCR引物对组合物，为组合物1、组合物2、组合物3或组合物4 ；所述组合物I由独立包装的三个引物对组成，即由名称为clf的鉴定或辅助鉴定家犬组织和/或器官的PCR引物对、名称为vvf的鉴定或辅助鉴定狐狸组织和/或器官的PCR引物对和名称为mv的鉴定或辅助鉴定水貂组织和/或器官的PCR引物对组成；所述clf由序列表中序列I和序列2所示的两条单链DNA组成；所述vvf由序列表中序列3和序列4所示的两条单链DNA组成；所述mv由序列表中序列7和序列8所示的两条单链DNA组成；所述动物为家犬、水貂和狐狸这三种动物中的三种、两种或一种；所述组合物2由独立包装的三个引物对组成，即由名称为vvf的鉴定或辅助鉴定狐狸组织和/或器官的PCR引物对、名称为np的鉴定或辅助鉴定貉子组织和/或器官的PCR引物对和名称为mv的鉴定或辅助鉴定水貂组织和/或器官的PCR引物对组成；所述vvf由序列表中序列3和序列4所示的两条单链DNA组成；所述np由序列表中序列5和序列6所示的两条单链DNA组成；所述mv由序列表中序列7和序列8所示的两条单链DNA组成；所述动物为貉子、水貂和狐狸这三种动物中的三种、两种或一种；所述组合物3由独立包装的两个引物对组成，即由名称为Clf的鉴定或辅助鉴定家犬组织和/或器官的PCR引物对和名称为mv的鉴定或辅助鉴定水貂组织和/或器官的PCR引物对组成；所述clf由序列表中序列I和序列2所示的两条单链DNA组成；所述mv由序列表中序列7和序列8所不的两条单链DNA组成；所述动物为家犬和/或水紹；所述组合物4由独立包装的两个引物对组成，即由名称为VVf的鉴定或辅助鉴定狐狸组织和/或器官的PCR引物对和名称为mv的鉴定或辅助鉴定水貂组织和/或器官的PCR引物对组成；所述vvf由序列表中序列3和序列4所示的两条单链DNA组成；所述mv由序列表中序列7和序列8所示的两条单链DNA组成；所述动物为狐狸和/或水貂。上述鉴定或辅助鉴定动物组织和/或器官的PCR引物对组合物中，所述clf、所述vvf、所述np和所述mv可均独立包装。 其中，PCR引物对clf可从家犬的基因组中PCR扩增获得序列表中序列9所示的DNA片段，序列表中序列9共有688个核苷酸，其中前25位和后25位分别为序列表中序列I和序列2所示上下游引物。PCR引物对vvf可从狐狸的基因组中PCR扩增获得序列表中序列10所示的DNA片段，序列表中序列10共有375个核苷酸，其中前23位和后23位分别为序列表中序列3和序列4所示上下游引物。PCR引物对np可从貉子的基因组中PCR扩增获得序列表中序列11所示的DNA片段，序列表中序列11共有456个核苷酸，其中前23位和后20位分别为序列表中序列5和序列6所示上下游引物。PCR引物对mv可从水貂的基因组中PCR扩增获得序列表中序列12所示的DNA片段，序列表中序列12共有523个核苷酸，其中前22位和后23位分别为序列表中序列7和序列8所示上下游引物。上述PCR引物对组合物中，PCR引物对clf、PCR引物对vvf、PCR引物对np、PCR弓丨物对mv这四种引物对可以单独使用分别进行单独的PCR，也可以组合使用进行多重PCR。这四种引物对组合使用的方式有多种，可以是其中任两种引物对组合在一起使用，也可以是其中任三种引物对组合在一起使用，也可以是四种引物对组合在一起使用。这四种引物对单独使用时，本申请的鉴定或辅助鉴定动物组织和/或器官的PCR引物对组合物中这四种引物对的配比没有要求，可以根据待鉴定动物的数量定。这四种引物对组合使用时，组合在一起使用的各引物对的摩尔数相同。如这四种引物对组合在一起使用时，所述四种引物对的摩尔比为1:1:1:1。本申请中，每种引物对中的两条单链DNA的摩尔比均为1:1。本专利技术的另一个目的是提供鉴定或辅助鉴定水貂组织和/或器官的PCR引物对。本专利技术所提供的鉴定或辅助鉴定水貂组织和/或器官的PCR引物对，名称为mv，由序列表中序列7和序列8所示的两条单链DNA组成。本专利技术的再一个目的是提供一种鉴定或辅助鉴定动物组织和/或器官的试剂或试剂盒。本专利技术的再一个目的是提供一种鉴定或辅助鉴定水貂组织和/或器官的试剂或试剂盒。本专利技术所提供的鉴定或辅助鉴定水貂组织和/或器官的试剂或试剂盒，含有上述鉴定或辅助鉴定水貂组织和/或器官的PCR引物对mv。本专利技术的又一个目的是提供鉴定或辅助鉴定动物组织和/或器官的PCR引物对组合物或其试剂或试剂盒的制备方法。本专利技术所提供的鉴定或辅助鉴定动物组织和/或器官的PCR引物对组合物或其试剂或试剂盒的制备方法，包括将上述鉴定或辅助鉴定动物组织和/或器官的PCR引物对组合物中各引物对的所述两条单链DNA分别单独包装的步骤。本专利技术的又一个目的是提供鉴定或辅助鉴定水貂组织和/或器官的PCR引物对或其试剂或试剂盒的制备方法。本专利技术所提供的鉴定或辅助鉴定水貂组织和/或器官的PCR引物对或其试剂或试剂盒的制备方法，包括将上述鉴定或辅助鉴定水貂组织和/或器官的PCR引物对中的所述两条单链DNA分别单独包装的步骤。本专利技术的又一个目的是提供上述鉴定或辅助鉴定动物组织和/或器官的PCR引物对组合物或其试剂或试剂盒在鉴本文档来自技高网...

【技术保护点】
鉴定或辅助鉴定动物组织和/或器官的PCR引物对组合物，为组合物1、组合物2、组合物3或组合物4；所述组合物1由独立包装的三个引物对组成，即由名称为clf的鉴定或辅助鉴定家犬组织和/或器官的PCR引物对、名称为vvf的鉴定或辅助鉴定狐狸组织和/或器官的PCR引物对和名称为mv的鉴定或辅助鉴定水貂组织和/或器官的PCR引物对组成；所述clf由序列表中序列1和序列2所示的两条单链DNA组成；所述vvf由序列表中序列3和序列4所示的两条单链DNA组成；所述mv由序列表中序列7和序列8所示的两条单链DNA组成；所述动物为家犬、水貂和狐狸这三种动物中的三种、两种或一种；所述组合物2由独立包装的三个引物对组成，即由名称为vvf的鉴定或辅助鉴定狐狸组织和/或器官的PCR引物对、名称为np的鉴定或辅助鉴定貉子组织和/或器官的PCR引物对和名称为mv的鉴定或辅助鉴定水貂组织和/或器官的PCR引物对组成；所述vvf由序列表中序列3和序列4所示的两条单链DNA组成；所述np由序列表中序列5和序列6所示的两条单链DNA组成；所述mv由序列表中序列7和序列8所示的两条单链DNA组成；所述动物为貉子、水貂和狐狸这三种动物中的三种、两种或一种；所述组合物3由独立包装的两个引物对组成，即由名称为clf的鉴定或辅助鉴定家犬组织和/或器官的PCR引物对和名称为mv的鉴定或辅助鉴定水貂组织和/或器官的PCR引物对组成；所述clf由序列表中序列1和序列2所示的两条单链DNA组成；所述mv由序列表中序列7和序列8所示的两条单链DNA组成；所述动物为家犬和/或水貂；所述组合物4由独立包装的两个引物对组成，即由名称为vvf的鉴定或辅助鉴定狐狸组织和/或器官的PCR引物对和名称为mv的鉴定或辅助鉴定水貂组织和/或器官的PCR引物对组成；所述vvf由序列表中序列3和序列4所示的两条单链DNA组成；所述mv由序列表中序列7和序列8所示的两条单链DNA组成；所述动物为狐狸和/或水貂。...

【技术特征摘要】
1.鉴定或辅助鉴定动物组织和/或器官的PCR引物对组合物，为组合物1、组合物2、组合物3或组合物4 ； 所述组合物I由独立包装的三个引物对组成，即由名称为clf的鉴定或辅助鉴定家犬组织和/或器官的PCR引物对、名称为vvf的鉴定或辅助鉴定狐狸组织和/或器官的PCR引物对和名称为mv的鉴定或辅助鉴定水貂组织和/或器官的PCR引物对组成；所述clf由序列表中序列I和序列2所示的两条单链DNA组成；所述vvf由序列表中序列3和序列4所示的两条单链DNA组成；所述mv由序列表中序列7和序列8所示的两条单链DNA组成；所述动物为家犬、水貂和狐狸这三种动物中的三种、两种或一种； 所述组合物2由独立包装的三个引物对组成，即由名称为vvf的鉴定或辅助鉴定狐狸组织和/或器官的PCR引物对、名称为np的鉴定或辅助鉴定貉子组织和/或器官的PCR引物对和名称为mv的鉴定或辅助鉴定水貂组织和/或器官的PCR引物对组成；所述vvf由序列表中序列3和序列4所示的两条单链DNA组成；所述np由序列表中序列5和序列6所示的两条单链DNA组成；所述mv由序列表中序列7和序列8所示的两条单链DNA组成；所述动物为貉子、水貂和狐狸这三种动物中的三种、两种或一种； 所述组合物3由独立包装的两个引物对组成，即由名称为clf的鉴定或辅助鉴定家犬组织和/或器官的PCR引物对和名称为mv的鉴定或辅助鉴定水貂组织和/或器官的PCR引物对组成；所述clf由序列表中序列I和序列2所示的两条单链DNA组成；所述mv由序列表中序列7和序列8所示的两条单链DNA组成；所述动物为家犬和/或水貂； 所述组合物4由独立包装的两个引物对组成，即由名称为vvf的鉴定或辅助鉴定狐狸组织和/或器官的PCR引物对和名称为mv的鉴定或辅助鉴定水貂组织和/或器官的PCR引物对组成；所述vvf由 序列表中序列3和序列4所示的两条单链DNA组成；所述mv由序列表中序列7和序列8所示的两条单链DNA组成；所述动物为狐狸和/或水貂。2.鉴定或辅助鉴定水貂组织和/或器官的PCR引物对，其特征在于:所述PCR引物对的名称为mv,由序列表中序列7和序列8所不的两条单链DNA组成。3.鉴定或辅助鉴定动物组织和/或器官的试剂或试剂盒，其特征在于:所述试剂或试剂盒含有权利要求1所述的PCR引物对组合物；所述动物为家犬、狐狸、貉子和水貂这四种动物中的四种、三种、两种或一种。4.鉴定或辅助鉴定水貂组织和/或器官的试剂或试剂盒，其特征在于:所述试剂或试剂盒含有权利要求2所述的PCR引物对。5.权利要求1所述的PCR引物对组合物或权利要求3所述的试剂或试剂盒的制备方法，包括将权利要求1所述的PCR引物对组合物中各引物对的所述两条单链DNA分别单独包装的步骤。6.权利要求2所述的PCR引物对或权利要求4所述的试剂或试剂盒的制备方法，包括将权利要求2所述的PCR引物对中的所述两条单链DNA分别单独包装的步骤。7.权利要求1所述的PCR引物对组合物或权利要求3所述的试剂或试剂盒在鉴定或辅助鉴定动物组织和/或器官中的应用，所述动物为家犬、狐狸、貉子和水貂这四种动物中的四种、三种、两种或一种。8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于:所述应用包括下述(I)和(2)的步骤: (I)在同一个PCR反应体系中，以待测动物组织和/或器官的基因组DNA为模板，选用60-64°C的退火温度，用权利要求1所述的鉴定或辅助鉴定动物组织和/或器官的PCR引物对组合物进行PCR扩增得到PCR产物；(2)K)或 M): K)检测步骤(1)中得到的PCR产物的序列，如果PCR产物含有序列表中序列9的DNA片段，所述待测动物组织和/或器官...

【专利技术属性】
技术研发人员：于雷，姜艳彬，王海，李颖，蔡英华，刘洪斌，刘勇军，田亚平，王莹，
申请(专利权)人：于雷，
类型：发明
国别省市：北京;11