人脐带间充质干细胞复合细胞因子在制备修复皮肤损伤的生物制剂中的应用制造技术

本发明专利技术提供了人脐带间充质干细胞复合细胞因子在制备修复皮肤损伤的生物制剂中的应用，所述的皮肤损伤包括激光灼伤，也可以是热灼伤、冷冻伤或普通外伤皮肤物理化学性损伤。本发明专利技术首次将脐带干细胞复合生长因子用于人皮肤激光损伤治疗当中，在一定保存条件下，人脐带间充质干细胞复合细胞因子可以保存最大活性，并发挥最大的损伤修复治疗作用。

【技术实现步骤摘要】
人脐带间充质干细胞复合细胞因子在制备修复皮肤损伤的生物制剂中的应用
本专利技术涉及一种人脐带间充质干细胞复合细胞因子在制备修复皮肤损伤的生物制剂中的应用，属于医药
。
技术介绍
人脐带间充质干细胞是一种来自与人体脐带组织的间充质细胞，具有高度增殖、自我更新和多向分化能力。间充质干细胞来源广泛，可来源于骨髓、脂肪、脐血、胎盘、羊水、脐带等等组织。体外培养应用不同的诱导培养基可分化为软骨、骨、骨骼肌、肌腱、脂肪、神经、皮肤等等细胞。另外，间充质干细胞具有贴壁生长的特点，方便了条件培养基的收集。与其他来源的间充质干细胞相比，脐带间充质干细胞更方便提取，并且更易获得。在再生医学的应用中，脐带间充质干细胞具有更强的抑制内皮细胞及组织凋亡，调节免疫的作用，而这些作用与其所分泌的复合细胞因子有非常密切的作用。在脐带间充质干细胞培养过程中会分泌肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor, HGF),粒细胞巨卩遼细胞集落刺激因子，白介素6、7、8、11，肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor, TNF),血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF),脑源性营养因子(brain derivedneurotrophic factor),神经生长因子(nerve growth factor, NGF),以及其他还没有被分离的分子物质。所以这种复合细胞因子具有这促进皮肤组织生长，调节损伤后免疫的功能可以用于激光灼伤等理化因素造成的皮肤损伤。随着美容整形市 场的扩大，越来越多的人群选择应用激光祛斑、光子嫩肤等方法进行面部美容。皮肤激光美容术是通过光热作用进行皮肤治疗，通过产生高能量，准确聚焦，在人皮肤组织局部产生高能量，通过去除和破坏组织达到美容的目的。但是因为治疗选择不当、操作不当等原因造成术后并发症的人群在逐年增多。因操作不当会造成过多的组织损伤，严重的炎症反应，以及毛细血管怒张等等相反的效果。主要的副作用包括水肿、水疱、色素沉着、色素减退、毛细血管扩张、皮肤敏感性增高等等。
技术实现思路
本专利技术的目的是克服现有技术的不足之处，提供人脐带间充质干细胞复合细胞因子在制备修复皮肤损伤的生物制剂中的应用，所述的皮肤损伤包括激光灼伤，也可以是热灼伤、冷冻伤或普通外伤皮肤物理化学性损伤，所述的复合细胞因子为人脐带间充质干细胞所分泌的细胞因子，所述的人脐带间充质干细胞复合细胞因子通过以下步骤制备而得: 1)从人脐带组织中提取脐带间充质干细胞； 2)将脐带间充质干细胞在体外进行扩增培养； 3)脐带间充质干细胞换用无血清的条件培养基进行培养，并且将培养基进行收集； 4)将条件培养基进行离心纯化，截留分子量3.5kDa的物质； 5)将离心后培养基(含>3.5kDa分子)进行透析浓缩，得到浓缩液；6)将浓缩液进行冻干处理，得到人脐带间充质干细胞复合细胞因子冻干粉。更加优选地， 所述的人脐带间充质干细胞复合细胞因子通过以下步骤制备而得: I)脐带间充质干细胞的提取:通过抽脂手术以及其他手术中获取的人体脐带组织为原料，通过胶原酶消化后离心提取脐带间充质干细胞，将脐带间充质干细胞接种于培养皿中在饱和湿度5% 二氧化碳浓度，37 ° C恒温下培养。2)人脐带间充质干细胞的扩增培养:人脐带间充质干细胞为长梭形贴壁培养细胞，待细胞生长至80-90%融合时进行传代培养。3)人脐带间充质干细胞条件培养基的收集:培养细胞至第三代，融合率达到80-90%进行细胞因子的收集，应用无血清培养基进行细胞正常培养后，将经过培养的无血清培养基进行收集。4)人脐带间充质干细胞条件培养基的离心过滤，浓缩及冻干:将所收集的间充质干细胞条件培养基进行过滤离心，所用离心滤膜为截留分子量为3.5kDa的分子滤膜。将离心后的条件培养基通过超滤的方式进行进一步的浓缩，通过Slide-A-Lyzer等透析膜浓缩2-20倍。将最终的浓缩液放置于容器中进行最终冻干，制备成冻干粉。注意全程无菌化处理。 一种含有人脐带间充质干细胞复合细胞因子的修复材料，所述的修复材料包括人脐带间充质干细胞复合细胞因子和透明质酸，每1ml修复材料中含有0.1ng-1OOmg人脐带间充质干细胞复合细胞因子。制备方法包括以下步骤:将人脐带间充质干细胞复合细胞因子浓缩液或冻干粉按照一定比例加入透明质酸中，配置成每1ml修复材料中含有0.1ng-1OOmg复合细胞因子的修复材料。所述的修复材料为胶状修复材料、面膜修复材料或膏状修复材料。本专利技术具有如下技术效果: I)激光灼伤主要病理变化包括局部皮肤粘膜细胞的变性坏死以及免疫功能异常等等。按照严重程度可按照烧(灼)伤的标准三度四分法进行判定，如I度烧伤仅伤及表皮，局部红肿；二度伤及真皮，局部出现水泡；三度伤及皮肤全层，深达皮肤、肌肉、骨骼等等。但是激光灼伤也具有自身的特点，如皮肤点状损伤，后期愈合后毛细血管怒张等等。复合细胞因子具有多种细胞因子有效成分，能够对损伤组织进行修复，促进损伤组织的生长愈合，调节免疫反应等等。2)透明质酸材料为一种酸性粘多糖，溶解后比例为0.1_10%，理想浓度为1%，是人体的一种成分，富含水分，具有特殊的保水作用，对激光创面以及其他理化损伤创面保持湿润环境。3)脐带间充质干细胞的复合细胞因子为肝细胞生长因子(hepatocyte growthfactor, HGF)，粒细胞巨噬细胞集落刺激因子，白介素6、7、8、11，肿瘤坏死因子(tumornecrosis factor, TNF),血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF),脑源性营养因子(brain derived neurotrophic factor),神经生长因子(nervegrowth factor, NGF),以及其他还没有被分离的分子物质等多种有效成分的混合物,具有明显的治疗作用。本专利技术首次将脐带干细胞复合生长因子用于人皮肤激光损伤治疗当中，在一定保存条件下，复合细胞因子可以保存最大活性，并发挥最大的损伤修复治疗作用。【附图说明】图l(al)为脐带间充质干细胞的形态图； 图l(a2)为脐带间充质干细胞培养至第三代形态图； 图l(a3)为第三代脐带间充质干细胞的流式细胞分析结果； 图2为使用上述皮肤修复材料的人皮肤二氧化碳激光点阵扫描后修复图。其中=FxCR8mJ照射后应用复合细胞因子(Tl)，FxCR 8mJ照射后应用对照空白培养基(Cl)，FxCR 16mJ照射后应用复合细胞因子(T2)，FxCR 16mJ照射后应用对照空白培养基(C2)。图3a为二氧化碳激光后不同组之间(T:实验组；C:对照组)应用红斑指数(Erythema index)测量恢复情况对照曲线。图3b为二氧化碳激光后不同组之间(T:实验组；C:对照组)应用黑色素指数(Melanin index)测量恢复情况对照曲线。【具体实施方式】实施例1制备含有人脐带间充质干细胞复合细胞因子 含有人脐带间充质干细胞复合细胞因子的制备方法，包括如下步骤: I)脐带间充质干细胞的提取 通过抽脂手术以及其他手术中获取的人体脐本文档来自技高网...

【技术保护点】
人脐带间充质干细胞复合细胞因子在制备修复皮肤损伤的生物制剂中的应用，所述的皮肤损伤包括激光灼伤，也可以是热灼伤、冷冻伤或普通外伤皮肤物理化学性损伤，其特征在于，所述的复合细胞因子为人脐带间充质干细胞所分泌的细胞因子，所述的人脐带间充质干细胞复合细胞因子通过以下步骤制备而得：1）从人脐带组织中提取脐带间充质干细胞；2）将脐带间充质干细胞在体外进行扩增培养；3）脐带间充质干细胞换用无血清的条件培养基进行培养，并且将培养基进行收集；4）将条件培养基进行离心纯化，截留分子量3.5kDa的物质；5）将离心后培养基（含>3.5kDa分子）进行透析浓缩，得到浓缩液；6）将浓缩液进行冻干处理，得到人脐带间充质干细胞复合细胞因子冻干粉。

【技术特征摘要】
1.人脐带间充质干细胞复合细胞因子在制备修复皮肤损伤的生物制剂中的应用，所述的皮肤损伤包括激光灼伤，也可以是热灼伤、冷冻伤或普通外伤皮肤物理化学性损伤，其特征在于，所述的复合细胞因子为人脐带间充质干细胞所分泌的细胞因子，所述的人脐带间充质干细胞复合细胞因子通过以下步骤制备而得: 1)从人脐带组织中提取脐带间充质干细胞； 2)将脐带间充质干细胞在体外进行扩增培养； 3)脐带间充质干细胞换用无血清的条件培养基进行培养，并且将培养基进行收集； 4)将条件培养基进行离心纯化，截留分子量3.5kDa的物质； 5)将离心后培养基(含>3.5kDa分子)进行透析浓缩，得到浓缩液； 6)将浓缩液进行冻干处理，得到人脐带间充质干细胞复合细胞因子冻干粉。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的人脐带间充质干细胞复合细胞因子通过以下步骤制备 而得: 1)脐带间充质干细胞的提取:通过抽脂手术以及其他手术中获取的人体脐带组织为原料，通过胶原酶消化后离心提取脐带间充质干细胞，将脐带间充质干细胞接种于培养皿中在饱和湿度5% 二氧化碳浓度，37 ° C恒...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐妍，郭世磊，周炳荣，
申请(专利权)人：徐妍，
类型：发明
国别省市：江苏;32