蛋白质精氨酸甲基转移酶7在癌细胞转移中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种蛋白精氨酸甲基转移酶7在癌细胞转移中的应用。本发明专利技术公开了蛋白质精氨酸甲基转移酶7在制备促进细胞上皮间质转化的产品中的应用。本发明专利技术证明在乳腺癌组织中PRMT7异常高表达，并且PRMT7能够诱导乳腺癌细胞发生EMT，促进乳腺癌细胞的侵袭和迁移。而干涉PRMT7可以抑制EMT，降低乳腺癌细胞的侵袭和迁移能力，PRMT7可以作为靶点应用于癌症的治疗中。

【技术实现步骤摘要】
蛋白质精氨酸甲基转移酶7在癌细胞转移中的应用
本专利技术涉及一种蛋白质精氨酸甲基转移酶7在癌细胞转移中的应用，属于生物制药领域。
技术介绍
乳腺癌是被广泛关注和重视的大众性健康疾病，其发病群体主要是女性，当然现今发现少部分男性也是发病群体，乳腺癌由于是女性第二大高发性癌症，并具有较高的致死率而受到社会大众的关注。乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一。蛋白质精氨酸甲基转移酶7(PRMT7)，具有两个AdoMet结合位点的结构域，对于不同的底物具有不同的酶活性，能催化纤维蛋白发生单甲基化。PRMT7能影响药物诱导的敏感性，与CTCFL相作用介导雄性精子的基因印记。经过对1200例乳腺癌样本进行转移相关染色体区位分析发现，16q22、17q21-23、17q25和20q11等染色体区域可能是潜在的转移启动基因，而16q22就是PRMT7所在的区域。目前对于PRMT7功能的研究还非常有限，PRMT7参与鼠胚胎干细胞以及精子细胞多潜能性的维持。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种蛋白质精氨酸甲基转移酶7在癌细胞转移中的应用，本专利技术证明在乳腺癌组织中蛋白质精氨酸甲基转移酶7(PRMT7)异常高表达，并且PRMT7能够诱导乳腺癌细胞发生上皮间质转化(EMT)，促进乳腺癌细胞的侵袭和转移，而干涉PRMT7可以抑制EMT，降低乳腺癌细胞的侵袭和迁移能力。本专利技术提供一种蛋白质精氨酸甲基转移酶7在制备促进细胞上皮间质转化的产品中的应用；或，蛋白质精氨酸甲基转移酶7在制备促进细胞侵袭和/或迁移的产品中的应用。蛋白质精氨酸甲基转移酶7作为靶点在制备抑制细胞上皮间质转化的产品中的应用；或，蛋白质精氨酸甲基转移酶7作为靶点在制备抑制细胞侵袭和/或迁移的产品中的应用也属于本专利技术的保护范围。上述任一所述的应用中，所述细胞为癌细胞，具体为乳腺癌细胞。蛋白质精氨酸甲基转移酶7在制备促进癌细胞的远端转移的产品中的应用也属于本专利技术的保护范围。蛋白质精氨酸甲基转移酶7作为靶点在制备抑制癌细胞的远端转移的产品中的应用也属于本专利技术的保护范围。上述任一所述的应用中，所述癌细胞为乳腺癌细胞。蛋白质精氨酸甲基转移酶7在制备预防和/或治疗乳腺癌的产品中的应用也属于本专利技术的保护范围。蛋白质精氨酸甲基转移酶7的抑制剂在制备抑制细胞上皮间质转化、抑制细胞侵袭和/或迁移、抑制癌细胞的远端转移、抑制癌细胞转移、治疗癌症的产品中的应用也属于本专利技术的保护范围。上述应用中，所述抑制剂为能干扰蛋白质精氨酸甲基转移酶7转录和/或表达的siRNA，具体为SEQIDNo.8和SEQIDNo.9退火片段的转录产物。上述任一所述的应用中，所述细胞为癌细胞，具体为乳腺癌细胞；所述癌为乳腺癌。上述任一所述的应用中，所述蛋白质精氨酸甲基转移酶7的氨基酸序列如SEQIDNo.4所示，其核苷酸序列如SEQIDNo.3中自5’末端起第17位至第2095位所示。本专利技术证明PRMT7可以作为靶点应用于癌症的治疗。附图说明图1为PRMT7在恶性能力不同的细胞系中的表达情况。图2为MCF10A中过表达PRMT7。图3为PRMT7-MCF10A细胞中表皮和间质marker的变化情况。图4为免疫荧光检测PRMT7-MCF10A细胞中表皮和间质marker的变化情况。图5为PRMT7-MCF10A的侵袭和转移能力的体外检测。图6为siPRMT7-MDA-MB-231细胞中表皮和间质marker的变化情况。图7为免疫荧光检测siPRMT-MDA-MB-231细胞系表皮和间质marker的变化。图8为划痕实验检测siPRMT7-MDA-MB-231细胞的迁移能力。图9为siPRMT7抑制MDA-MB-231细胞的侵袭和迁移能力。图10为PRMT7诱导MDCK细胞发生EMT。图11为PRMT7促进乳腺癌的远端转移。具体实施方式下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。PRMT7-p3×Flag-myc-CMV-23在文献“GraydonB.Gonsalvez,LipingTian,JasonK.Ospina,-MichelBoisvert,AngusI.Lamond,andA.GregoryMatera，TwodistinctargininemethyltransferasesarerequiredforbiogenesisofSm-classribonucleoproteins.TheJournalofCellBiologyVol.178No.5August27,2007733–740”中公开过，公众可从东北师范大学获得。MSCV2.2-IRES-GFP在文献“Kofoed,E.M.Vance,R.E.InnateimmunerecognitionofbacterialligandsbyNAIPsdeterminesinflammasomespecificity.Nature2011；477:592-5.”中公开过，公众可从东北师范大学获得。PRMT7-MSCV2.2-IRES-GFP质粒的构建过程如下：一、设计并合成如下引物：上游引物：5’-ATAAGAATGCGGCCGCATGAAGATCTTCTGCAGTCGGG-3’(SEQIDNo.1)(下划线所示序列为NotI酶切识别位点)下游引物：5’-ACGCGTCGACTCAGTCTGGGGTATCTGCATGCCT-3’(SEQIDNo.2)(下划线所示序列为SalI酶切位点)二、以PRMT7-p3×Flag-myc-CMV-23为模板，以上游引物(SEQIDNo.1)和下游引物(SEQIDNo.2)为引物进行PCR扩增，得到PCR扩增产物，如SEQIDNo.3所示。SEQIDNo.3中自5’末端起第17位至第2095位核苷酸所示的序列为PRMT7的编码基因序列，PRMT7蛋白的氨基酸序列如SEQIDNo.4所示。三、用NotI和SalI双酶切SEQIDNo.3所示的DNA分子，得到基因序列；NotI和SalI双酶切MSCV2.2-IRES-GFP，得到载体大片段；将基因片段与载体大片段连接，得到重组质粒，并将其命名为PRMT7-MSCV2.2-IRES-GFP，将PRMT7-MSCV2.2-IRES-GFP送测序，结果正确。PWPXLD购自addgene，产品目录号为12258。PWPXLD-PRMT7的构建过程如下：一、设计并合成如下引物：上游引物：5’-AGCTTTGTTTAAACATGAAGATCTTCTGCAGTCGGG-3’(SEQIDNo.5)(下划线所示序列为PmeI酶切识别位点)下游引物：5’-GACTAGTTCAGTCTGGGGTATCTGCATGCCT-3’(SEQIDNo.6)(下划线所示序列为SpeI酶切识别位点)二、以PRMT7-p3×Flag-myc-CMV-23为模板，以上游引物(SEQIDNo.5)和下游引物(SEQIDNo.6)为引物进行PCR扩增，得到PCR扩增产物，如SEQIDNo.7所示。三、PmeI和SpeI双酶切SEQIDNo.7所示的DNA分子，得到基因序列；用PmeI和SpeI双酶切PWPXLD，得到载体大片段；本文档来自技高网...

【技术保护点】
蛋白质精氨酸甲基转移酶7在制备促进细胞上皮间质转化的产品中的应用；或，蛋白质精氨酸甲基转移酶7在制备促进细胞侵袭和/或迁移的产品中的应用。

【技术特征摘要】
1.蛋白质精氨酸甲基转移酶7在制备促进细胞上皮间质转化的产品中的应用；所述细胞为乳腺癌细胞。2.蛋白质精氨酸甲基转移酶7在制备促进细胞侵袭和/或迁移的产品中的应用；所述细胞为乳腺癌细胞。3.蛋白质精氨酸甲基转移酶7作为靶点在制备抑制细胞上皮间质转化的产品中的应用；所述细胞为乳腺癌细胞。4.蛋白质精氨酸甲基转移酶7作为靶点在制备抑制细胞侵袭和/或迁移的产品中的应用；所述细胞为乳腺癌细胞。5.蛋白质精氨酸甲基转移酶7在制备促进癌细胞的远端转移的产品中的应用；所述癌细胞为乳腺癌细胞。6.蛋白质精氨酸甲基转移酶7作为靶点在制备抑制癌细胞的远...

【专利技术属性】
技术研发人员：陆军，张瑜，姚若斯，姜浩，李晓雪，黄百渠，
申请(专利权)人：东北师范大学，
类型：发明
国别省市：吉林;22