本发明专利技术公开了一种清酒乳酸菌Lactobacillus sakei，所述菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地点为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏登记入册的编号为CGMCCNo.9016，保藏日期为2014年4月3日。本发明专利技术利用清酒乳酸菌Lactobacillus sakei改善青贮饲料品质，成本低，安全可靠，易于利用。本发明专利技术可在青藏高原地区使用，克服了高原地区牧草表面低温发酵乳酸菌数量较少的问题。本发明专利技术清酒乳酸菌Lactobacillus sakei在低温条件下发酵青贮的性能优于商品化菌株。
【技术实现步骤摘要】
清酒乳酸菌Lactobaci I I us sake i及其应用
本专利技术涉及微生物应用和饲料调制加工领域，特别是涉及一种适宜于青藏高原低温条件下制作青忙饲料的耐低温清酒乳酸菌Lactobacillus sakei及其应用。
技术介绍
青藏高原被喻为“世界屋脊”和“地球第三极”，大约占我国国土总面积的26 %，是我国主要的畜牧业基地之一。与我国其它畜牧业地区相比，青藏高原地势高亢，辐射强烈，并且冷季漫长，暖季短暂，热量不足；干旱寒冷的气候导致草地结构不合理，牧草生长期短，产草量较低，青绿饲料的供应存在着明显的季节和地域不平衡性。为满足冬春季节青藏高原家畜生长的需求，农牧民多采用将牧草打捆，晾晒和风干的传统贮藏方式，但传统贮藏方式易使牧草粗蛋白含量减少，适口性和消化率下降。青贮作为一种简单易行，成本较低的牧草贮藏方式，能更多地保存牧草的营养价值，将为解决高寒草地畜牧业冬春季节饲草料严重不足作出巨大贡献。青贮通过乳酸发酵快速降低青贮料pH值，并且维持厌氧的青贮环境，从而长期保存牧草的青绿 特性。青贮品质的好坏受到贮藏温度、乳酸菌种类和数量以及青贮原料特性的影响，而温度对青贮品质的影响主要通过乳酸菌活性的强弱产生作用。青贮温度过低或过高，都不利于乳酸发酵，温度过低乳酸菌活性通常不强，而过高温度青贮则会降低青贮料的饲用价值，增加干物质损失。在青藏高原地区，牧草收获季节气温已降至10~20°C，且日温差大，温度较低且低温条件下牧草青贮体系中乳酸菌数量较少成为限制青藏高原牧草青贮品质的重要因素。
技术实现思路
有鉴于此,本专利技术的目的在于提出一种清酒乳酸菌Lactobacillus sakei及其应用，以克服高原地区牧草表面低温发酵乳酸菌数量较少的问题，提高在低温条件下发酵青贮的性能。基于上述目的，本专利技术提供的一种清酒乳酸菌Lactobacillus sakei,所述菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地点为北京市朝阳区北辰西路I号院3号中国科学院微生物研究所，保藏登记入册的编号为CGMCCN0.9016，保藏日期为2014年4月3日。可选地，所述菌株的生长温度为4~45°C。较佳地，所述菌株的生长温度为10~15°C。优选地，所述菌株于MRS培养基培养12小时后pH值降至4~4.2。本专利技术还提供一种所述的清酒乳酸菌Lactobacillus sakei在制备青忙饲料中的应用，所述青贮饲料为垂穗披碱草青贮饲料，每I克垂穗披碱草青贮饲料接种清酒乳酸菌Lactobacillus sakei 有效活菌数为 5X 15 ~1.5X 16 个。可选地,每I克垂穗披碱草青忙饲料接种清酒乳酸菌LactobaciIIus sakei有效活菌数为8X 15~1.2X 16个。优选地，所述青贮饲料的贮藏温度为15~25°C，贮藏45~55天后pH值降至4.42 ~4.52。较佳地，所述垂穗披碱草青贮饲料切断至2~3cm。从上面所述可以看出，与现有技术相比，本专利技术具有如下有益优势:(I)本专利技术利用清酒乳酸菌Lactobacillus sakei改善青忙饲料品质，成本低，安全可靠，易于利用。(2)本专利技术可在青藏高原地区使用，克服了高原地区牧草表面低温发酵乳酸菌数量较少的问题。(3)本专利技术清酒乳酸菌Lactobacillus sakei在低温条件下发酵青忙的性能优于商品化菌株。【具体实施方式】为使本专利技术 的目的、技术方案和优点更加清楚明白，以下结合具体实施例，对本专利技术进一步详细说明。实施例1乳酸菌的分离鉴定在超净工作台中将青藏高原垂穗披碱草青贮样品开封取样，在无菌环境下称取1g放入装有90mL无菌生理盐水的250mL三角瓶中，摇床180r/min室温振荡60min，并用无菌水按照KT1至10_5进行稀释，选取适当的浓度，利用平板划线法在37°C厌氧环境中进行乳酸菌的培养。培养48h后根据乳酸菌菌落的颜色、大小、光泽、透明程度等，挑取有透明圈的单菌落，进行革兰氏染色、过氧化氢酶和油镜镜检实验，凡是革兰氏染色阳性、过氧化氢酶阴性的菌株疑似其为乳酸菌并以划线的方式在MRS培养基上继续分离纯化培养2次，纯化后的菌株在光学显微镜下进行形态学检测，并接种到MRS液体培养基37°C厌氧培养12h后加入10%的二甲基亚砜，在-80°C下保存备用。其中，MRS培养基为:蛋白胨10g，酵母提取物5g,葡萄糖20g,无水乙酸钠5g,柠檬酸氨2g,牛肉膏10g, K2HP042g,吐温801mL,MgSO4.7Η200.58g, MnSO4.H2017g，溶解于 IL 水，调 pH 至 6.2-6.4，121°C 高压灭菌 15min,制作固体培养基时，除上述各组分外，再加入15g琼脂。取从青贮饲料中分离得到的108株乳酸菌，纯化后的乳酸菌在MRS培养基中培养8h后，10000rpm/min,离心3_5min,收集菌体。按照试剂盒使用方法提取每个菌体的DNA,然后分别进行PCR扩增，在细菌的通用引物27F和1492R(Monis et al，2005)的扩增下，进行16SrRNA 的扩增。扩增条件:95°C,5min ；95°C,30s ；55°C,30s ；72°C, lmin30s ；72°C,5min ；30次循环。PCR产物送上海美吉生测序公司进行序列分析。将测得的每个乳酸菌菌株16SrRNA 基因序列用 BLAST (http://wwwncb1.nlm.nih.gov/blast/)在 GenBank 中搜索，与待测菌株同源性最高的已知分类地位的菌种初步确定待测菌株的种属。然后从GenBank数据库中下载已知的乳酸菌菌株的16SrRNA序列，以Clustal X(THOMPSON et al, 1994)进行序列比对后，用 MEGA4.0 白勺 UPGMA (unweighted pair-group method with arithmetic means)法构建系统发育树(SUDHIR et al, 2001)，并进行1000次Bootstraps检验。利用16S rRNA基因序列同源性分析的方法进行菌种的鉴定。[0021 ] 实施例2耐低温乳酸菌的筛选及生理生化特性比较采集孕穗期黑麦草，将其与水按照1:2.5的比例混匀后用榨汁机获得绿汁发酵液，于4层纱布过滤，1000rpm/min离心5min后,取上悬液并灭菌。待其冷却后按3%的接种量分别将鉴定后的乳酸菌菌株接种到绿汁发酵液中，置于15°C和25°C培养箱中培养，培养3天后测定发酵液的pH值，筛选出低温条件下降低发酵pH值较好的菌株清酒乳杆菌(Lactobacillus sakei,LS)。所述菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地点为北京市朝阳区北辰西路I号院3号中国科学院微生物研究所，保藏登记入册的编号为CGMCCN0.9016，保藏日期为2014年4月3日。将本专利技术的菌株清酒乳杆菌(LS)与购自中国工业微生物菌种保藏管理中心(CICC)的清酒乳杆菌(CLS)参考菌株(编号CICC21858)相对比，进行革兰氏染色和细胞形态观察，并对其在不同温度(4°C、10°C、45°C、5(TC )和 pH 值(3.0、3.5、4.0、8.本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种清酒乳酸菌Lactobacillus sakei，其特征在于，所述菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地点为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏登记入册的编号为CGMCCNo.9016，保藏日期为2014年4月3日。
【技术特征摘要】
1.一种清酒乳酸菌Lactobacillus sakei,其特征在于,所述菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地点为北京市朝阳区北辰西路I号院3号中国科学院微生物研究所，保藏登记入册的编号为CGMCCN0.9016，保藏日期为2014年4月3日。2.根据权利要求1所述的清酒乳酸菌Lactobacillussakei,其特征在于,所述菌株的生长温度为4~45°C。3.根据权利要求2所述的清酒乳酸菌Lactobacillussakei,其特征在于,所述菌株的生长温度为10~15°C。4.根据权利要求1所述的清酒乳酸菌Lactobacillussakei,其特征在于,所述菌株于MRS培养基培养12小时后pH值降至4~4.2。5.—种根据权利要求1~4中任意一项所述的清酒乳酸菌Lactobacillus sakei在制备青...
【专利技术属性】
技术研发人员：郭旭生，丁武蓉，秦丽萍，柯文灿，保安安，
申请(专利权)人：兰州大学，
类型：发明
国别省市：甘肃;62
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。