本发明专利技术公开了一种清真肉类食品的分子鉴定方法，该清真肉类食品的分子鉴定方法包括：取将待检测样品25mg，使用通用型柱式基因组提取试剂盒提取基因组DNA，操作步骤中Proteinase K消化时，采取过夜处理，消化时间10个小时以上；使用设计的引物16SA-SB-ZNYF和16SA-SB-ZNYR，对提取的DNA进行PCR扩增，PCR反应程序94度4min，94度30s，53度30s，72度1.5min，72度10分钟；然后将扩增产物，交生物测序公司使用3730测序仪测序；将测序产物与给出的序列联合，使用Clustalx软件进行比对，并构建NJ树，鉴定是否有猪肉狗肉和驴肉的非清真成分存在。本发明专利技术针对猪肉新设计了专用扩增引物，可以高效率扩增猪肉DNA，即使食品中含有微量猪肉、狗肉或驴肉DNA也可以被识别，可以准确区分出猪肉、狗肉或驴肉成分。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于食品检测
，尤其涉及。
技术介绍
现有检测技术的步骤较多，操作程序较为繁琐，对食品中含有微量猪肉检测的力度没有保证。
技术实现思路
本专利技术实施例的目的在于提供，旨在解决现有检测技术的步骤较多，操作程序较为繁琐，对食品中含有微量猪肉检测的力度没有保证的问题。本专利技术实施例是这样实现的，，该清真肉类食品的分子鉴定方法包括以下步骤:第一步，取将待检测样品25mg，使用通用型柱式基因组提取试剂盒提取基因组DNA，操作步骤中Proteinase K消化时，采取过夜处理，消化时间10个小时以上；第二步，使用设计的引物16 SA-SB-ZNYF和16SA-SB-ZNYR，对提取的DNA进行PCR扩增，PCR反应程序94度4min，94度30s，53度30s，72度1.5min，72度10分钟；第三步，然后将扩增产物，交生物测序公司使用3730测序仪测序；第四步，将测序产物与给出的序列联合，使用Clustalx软件进行比对，并构建NJ树，鉴定是否有猪肉狗肉和驴肉的非清真成分存在。进一步，在第二步中，16SA-SB-ZNYF引物的5’ -3’基因序列为:CGGCCGCGGTATTCTGACCGTGC。进一步，在第二步中，16SA-SB-ZNYR引物的5’ _3’基因序列为:GATCACGTAGGACTTTAATCGTTG。进一步，在第三步中，如果出现测序结果峰型较乱的情况，使用额外三对引物(16SA-猪 &16SA-SB-ZNYR，16SA-狗 &16SA-SB-ZNYR，16SA-驴 &16SA-SB-ZNYR，分别扩增交生物测序公司使用3730测序仪测序；如果依然测序结果混乱，改用将PCR产物连接至克隆载体，转化后提取质粒，挑选克隆不少于6个进行测序。进一步，在第三步中，16SA-猪引物的5’ -3’基因序列为:TTAACTATTCCAAAAGTTAAAC ；16SA-狗引物的5，-3，基因序列为:TTAACTAACCCAAACTTATGGAT ；16SA-驴引物的5，-3，基因序列为:TTAACTGATTCACAAAAAACAACATAC。本专利技术提供的清真肉类食品的分子鉴定方法，通过取将待检测样品25mg，提取基因组DNA ;使用设计的引物16SA-SB-ZNYF和16SA-SB-ZNYR，对提取的DNA进行PCR扩增；然后将扩增产物，交生物测序公司使用3730测序仪测序；使用Clustalx软件进行比对，并构建NJ树，鉴定是否有猪肉狗肉和驴肉的非清真成分存在。本专利技术针对猪肉新设计了专用扩增引物，可以高效率扩增猪肉DNA，即使食品中含有微量猪肉、狗肉或驴肉DNA也可以被识别；扩增产物直接测序或者克隆测序，得到的测序结果对猪、狗、驴、牛、羊等的分辨率高，可以准确区分出猪肉、狗肉或驴肉成分；准确检测肉类制品中是否含有猪肉、狗肉或驴肉。【附图说明】图1是本专利技术实施例提供的清真肉类食品的分子鉴定方法流程图。【具体实施方式】为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。下面结合附图及具体实施例对本专利技术的应用原理作进一步描述。如图1所示，本专利技术实施例的清真肉类食品的分子鉴定方法包括以下步骤:SlOl:取将待检测样品25mg，使用通用型柱式基因组提取试剂盒提取基因组DNA，操作步骤中Proteinase K消化时，采取过夜处理，消化时间10个小时以上；S102:使用设计的引物，16SA-SB-ZNYF和16SA-SB-ZNYR，对提取的DNA进行PCR扩增，PCR 反应程序 94 度 4min，94 度 30s，53 度 30s，72 度 1.5min，72 度 10 分钟；S103:将扩增产物，交生物测序公司使用3730测序仪测序；S104:将测序产物与给出的序列联合，使用Clustalx软件进行比对，并构建NJ树，鉴定是否有猪肉狗肉和驴肉的非清真成分存在。本专利技术的具体步骤为:1、取将待检测样品25mg，使用通用型柱式基因组提取试剂盒(型号CW2298)提取基因组DNA，操作步骤中稍作优化=Proteinase K消化时，采取过夜处理，消化时间10个小时以上；2、使用设计的引物(16SA-SB-ZNYF和16SA-SB-ZNYR)，如表1所示；对提取的DNA进行PCR扩增(使用TaKaRa公司生产的Ex Taq进行PCR扩增，PCR反应程序94度4min (94度 30s, 53 度 30s, 72 度 1.5min)，72 度 10 分钟)；表1 _名称I引物序列(5’ -3’ )16SA-SB-ZNYF CGGCCGCGGTATTCTGACCGTGC_ 16SA-SB-ZNYR GATCACGTAGGACTTTAATCGTTG 16SA-猪T?Xactattccaamgttaaac 16SA-狗TTXactaacccaaacttatggat 16SA-驴 Ittaactgattcacmaaaacaacatac '3、分以下三种情况:a将然后将2的扩增产物，交生物测序公司使用3730测序仪测序；b如果出现测序结果峰型较乱的情况，使用额外三对引物(16SA-猪&16SA-SB-ZNYR, 16SA-狗 &16SA-SB-ZNYR，16SA-驴 &16SA-SB-ZNYR)，分别扩增交生物测序公司使用3730测序仪测序；c如果b步依然测序结果混乱，改用将PCR产物连接至克隆载体，转化后提取质粒，挑选克隆不少于6个进行测序；4、将测序产物与给出的序列联合，使用Clustalx软件进行比对，并构建NJ树，鉴定是否有猪肉狗肉和驴肉的非清真成分存在。以上所述仅为本专利技术的较佳实施例而已，并不用以限制本专利技术，凡在本专利技术的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本专利技术的保护范围之内。<110> 申请人:名称:北方民族大学<120>专利技术名称:，<160>序列表中序列的个数:24个序列〈211〉序列的长度:羊的每个序列分别为484bp牛每个序列分别为484bp猪的每个序列分别为489bp驴的每个序列分别为490bp狗的每个序列分别为491bp〈212〉序列的类型:DNA〈213〉序列来源的生物名称:猪、狗、牛、羊、驴〈400〉是核苷酸序列。核苷酸序列:> 羊 I (484)本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种清真肉类食品的分子鉴定方法，其特征在于，该清真肉类食品的分子鉴定方法包括以下步骤：第一步，取将待检测样品25mg，使用通用型柱式基因组提取试剂盒提取基因组DNA，操作步骤中Proteinase K消化时，采取过夜处理，消化时间10个小时以上；第二步，使用设计的引物16SA‑SB‑ZNYF和16SA‑SB‑ZNYR，对提取的DNA进行PCR扩增，PCR反应程序94度4min，94度30s，53度30s，72度1.5min，72度10分钟；第三步，然后将扩增产物，交生物测序公司使用3730测序仪测序；第四步，将测序产物与给出的序列联合，使用Clustalx软件进行比对，并构建NJ树，鉴定是否有猪肉狗肉和驴肉的非清真成分存在。
【技术特征摘要】
1.一种清真肉类食品的分子鉴定方法，其特征在于，该清真肉类食品的分子鉴定方法包括以下步骤: 第一步，取将待检测样品25mg，使用通用型柱式基因组提取试剂盒提取基因组DNA，操作步骤中Proteinase K消化时，采取过夜处理，消化时间10个小时以上； 第二步，使用设计的引物16SA-SB-ZNYF和16SA-SB-ZNYR，对提取的DNA进行PCR扩增，PCR 反应程序 94 度 4min, 94 度 30s, 53 度 30s, 72 度 1.5min, 72 度 10 分钟； 第三步，然后将扩增产物，交生物测序公司使用3730测序仪测序； 第四步，将测序产物与给出的序列联合，使用Clustalx软件进行比对，并构建NJ树，鉴定是否有猪肉狗肉和驴肉的非清真成分存在。2.如权利要求1所述的清真肉类食品的分子鉴定方法，其特征在于，在第二步中，16SA-SB-ZNYF引物的5’ -3’基因序列为:CGGCCGCGGTATTCTGACCGTGC。3.如权利要求1所述的清真肉类食品的分子鉴定方法...
【专利技术属性】
技术研发人员：曹晓虹，陈海魁，于淑坤，龚波林，
申请(专利权)人：北方民族大学，
类型：发明
国别省市：宁夏;64
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