本发明专利技术公开了基于枝状聚合物的微阵列抗体芯片的制备方法及其产品，其制备方法是先将载玻片在乙醇中清洗，然后在含3-环氧丙基氧丙基三甲氧基硅烷的乙醇溶液中浸没，退火后将载玻片浸入含三乙基胺和α-溴异丁酰溴的干燥二氯甲烷或四氢呋喃溶液中，再用二氯甲烷或四氢呋喃冲洗；接着向含寡聚(乙二醇)甲基丙烯酸酯和甲基丙烯酸缩水甘油酯的甲醇溶液中鼓入氮气，在超声下加入2，2'-联吡啶和溴化亚铜，浸入载玻片，密封溶液并置入惰性、避光气氛箱保存，得活化的载体材料，最后用微阵列芯片点样仪将检测抗体印刷在活化的载体材料上，静置，用PBS清洗即得，制得的微阵列抗体芯片灵敏度高、特异性好，能够用于疾病的早期筛选。
【技术实现步骤摘要】
基于枝状聚合物的微阵列抗体芯片的制备方法及其产品
本专利技术属于免疫化学检测装置的制备方法，具体涉及基于枝状聚合物的微阵列抗体芯片的制备方法，和由该方法制得的产品。
技术介绍
微阵列抗体芯片是将不同的抗体探针分子有序、高密度、可寻址地固定在载体上，通过抗体对目标生物分子的特异性捕获作用，再配合以特定的信号读取方法如荧光、电化学等，实现高通量检测生物分子的一种先进技术，在疾病的早期筛选、诊断和治疗效果评价及药物开发、基础生命科学研究有着重要意义，近年来得到了学术界和工业界广泛的研究兴趣。目前，微阵列抗体芯片存在的一个主要问题是其灵敏度不高，检测限达不到实际应用要求；很多时候特异性较差，容易造成假阳性或假阴性结果。因此，微阵列抗体芯片的灵敏度和特异性亟待提高。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的之一在于提供基于枝状聚合物的微阵列抗体芯片的制备方法，其制备方法简单，本专利技术的目的之二在于提供由上述方法制得的产品。为实现上述专利技术目的，本专利技术提供如下技术方案:1、基于枝状聚合物的微阵列抗体芯片的制备方法，包括如下步骤:(I)活化载体材料:将载玻片浸没在乙醇中超声清洗，然后在3-环氧丙基氧丙基三甲氧基硅烷体积分数为1-10%的乙醇溶液中浸没1-4小时，再退火，再将载玻片浸入三乙基胺和α -溴异丁酰溴体积分数为分别0.1-1.0%和0.1-1.2%的干燥二氯甲烷或四氢呋喃溶液中至少2小时，最后取出用二氯甲烷或四氢呋喃冲洗，得清洗后的载玻片；接着向寡聚(乙二醇)甲基丙烯酸酯和甲基丙烯酸缩水甘油酯体积分数分别为10-90%和0.4-1%的甲醇溶液中鼓入氮气15-30分钟，再在超声条件下加入2，2’-联吡啶和溴化亚铜至终浓度分别为l_5mg/mL和0.45-2.5mg/mL，浸入清洗后的载玻片，密封溶液并置入惰性、避光气氛箱保存6-24小时，得活化的载体材料；所述甲醇溶液中甲醇:水体积比为1:4-4:I ;(2)采用微阵列芯片点样仪将检测抗体印刷在步骤(I)所得活化的载体材料上，点样后在18-25°C下静置，再用PBS溶液清洗即得基于枝状聚合物的微阵列抗体芯片。或活化载体材料的方法用如下步骤替换，将载玻片浸没在乙醇中超声清洗，然后在3-环氧丙基氧丙基三甲氧基硅烷体积分数为1-10%的乙醇溶液中浸没1-4小时，再退火，再将载玻片浸入三乙基胺和α -溴异丁酰溴体积分数为分别0.1-1.0%和0.1-1.2%的干燥二氯甲烷或四氢呋喃溶液中至少2小时，最后取出用二氯甲烷或四氢呋喃冲洗，得清洗后的载玻片；接着向寡聚(乙二醇)甲基丙烯酸酯和甲基丙烯酸缩水甘油酯体积分数分别为10-90%和0.4-1%的甲醇溶液中加入2，2’ -联吡啶和溴化亚铜至终浓度分别为4.6mg/mL和3.4mg/mL，浸入清洗后的载玻片，然后加入抗坏血酸溶液至终浓度为2.4mg/mL，密封溶液并置入惰性、避光气氛箱保存6-24小时，得活化的载体材料；所述甲醇溶液中甲醇:水体积比为1:4-4:1。优选的，所述退火为在110°C、真空退火1-4小时。优选的，所述甲醇溶液中甲醇:水体积比为1:1。优选的，所述步骤(I)中，所述3-环氧丙基氧丙基三甲氧基硅烷的体积分数为5%,浸泡时间为2小时。优选的，所述步骤(I)中，三乙基胺和α-溴异丁酰溴体的体积分数为0.35%和0.6%，浸泡时间为2小时。优选的，所述步骤(I)中，寡聚(乙二醇)甲基丙烯酸酯和甲基丙烯酸缩水甘油酯的体积分数分别为20%和0.6%。优选的，所述步骤(I)中，2，2’ -联吡啶和溴化亚铜的终浓度分别为3mg/mL和1.4mg/mT,n2、由所述的制备方法制得的基于枝状聚合物的微阵列抗体芯片。本专利技术的有益效果在于:本专利技术公开了基于枝状聚合物的微阵列抗体芯片的制备方法及其产品，其制备方法简单，能够大规模的重复制得，并且制得的基于枝状聚合物的微阵列抗体芯片在溶液中能有效抑制生物分子、细胞等在载体表面的非特异性吸附，保证了高选择性检测；同时能实现高密度、高活性、高均一度的抗体蛋白固定，获得了特异性好，灵敏度高的微阵列抗体芯片，将在基础研究、肿瘤早期筛查、临床诊断等方面得到广泛使用，发挥重要作用。【附图说明】为了使本专利技术的目的、技术方案和有益效果更加清楚，本专利技术提供如下附图:图1为微阵列抗体芯片的载体活化方法示意图。图2为基于枝状聚合物的微阵列抗体芯片的荧光强度结果(a =GPTS活化的载玻片；b:微阵列抗体芯片的活化载体)。图3为活化后的载体在CY3标记ant1-Mouse IgG的PBS溶液中浸泡前和浸泡后荧光扫描图片(a:浸泡前；b浸泡后)。图4为微阵列抗体芯片检测不同浓度肿瘤标志物CEA的荧光扫描结果(a、b、c、d、e、f、g 分别表示 CEA 的浓度为 100，10，1.0，0.1，0.01，0.001 和 Ong/mL)。【具体实施方式】下面将结合附图，对本专利技术的优选实施例进行详细的描述。实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。实施例1基于枝状聚合物的微阵列抗体芯片的制备方法，包括如下步骤:(I)载体材料活化方法:将载玻片浸没在乙醇中超声清洗30分钟，取出后浸没在3-环氧丙基氧丙基三甲氧基硅烷质量分数为5%的乙醇溶液中2小时，然后在温度为110°C条件下真空退火2小时，再将载玻片浸入三乙基胺和α -溴异丁酰溴质量分数为分别0.35%和0.6%的干燥二氯甲烷中浸泡2小时，最后取出用二氯甲烷冲洗3次，得清洗后的载玻片；然后配制寡聚(乙二醇)甲基丙烯酸酯和甲基丙烯酸缩水甘油酯质量分数分别为20%和0.6%甲醇溶液中(其中甲醇溶液中甲醇:水体积比为1:1)，并向溶液中鼓入氮气20分钟,再在超声条件下加入2, 2’ 一联批唳和溴化亚铜至终浓度分别为3mg/mL和1.4mg/mL，然后浸入清洗后的载玻片，密封溶液并置入惰性、避光气氛箱保存16小时，得活化的载体材料；其活化原理图如图1所示。(2)将CY3标记ant1-Mouse IgG溶于0.0lM PBS中至终浓度为0.2mg/mL,然后采用微阵列芯片点样仪将检测抗体溶液印刷在步骤(I)所得活化的载体材料上，点样后在室温(18-25°C )下静置8小时，再用浓度为0.0lM的PBS溶液清洗即得基于枝状聚合物的微阵列抗体芯片。然后观察制得基于枝状聚合物的微阵列抗体芯片的荧光强度，同时按照相同的方法将浓度为0.2mg/mLCY3标记ant1-Mouse IgG印刷在GPTS活化的载玻片上，然后观察微阵列抗体芯片的荧光强度，结果如图2所示。结果显示，使用本实施例的方法获得的微阵列抗体芯片的抗体探针固定量是GPTS活化载体的7倍，并且打印的微阵列芯片强度均匀，形状规整，点与点标准偏差小，有利于定量免疫分析。实施例2基于枝状聚合物的微阵列抗体芯片的制备方法，包括如下步骤:(I)载体材料活化方法:将载玻片浸没在乙醇中超声清洗50分钟，取出后浸没在3-环氧丙基氧丙基三甲氧基硅烷质量分数为1%的乙醇溶液中I小时，然后在温度为110°C条件下真空退火I小时，再将载玻片浸入三乙基胺和α-溴异丁酰溴质量分数为分别0.1%和0.1%的干燥二氯甲烷中浸泡2小时，最后取出用二氯甲烷冲洗3次，得清洗后的载玻片；然后配制寡聚(乙二醇)本文档来自技高网...
【技术保护点】
基于枝状聚合物的微阵列抗体芯片的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)活化载体材料：将载玻片浸没在乙醇中超声清洗，然后在3‑环氧丙基氧丙基三甲氧基硅烷体积分数为1‑10％的乙醇溶液中浸没1‑4小时，再退火，再将载玻片浸入三乙基胺和α‑溴异丁酰溴体积分数为分别0.1‑1.0％和0.1‑1.2％的干燥二氯甲烷或四氢呋喃溶液中至少2小时，最后取出用二氯甲烷或四氢呋喃冲洗，得清洗后的载玻片；接着向寡聚(乙二醇)甲基丙烯酸酯和甲基丙烯酸缩水甘油酯体积分数分别为10‑90％和0.4‑1％的甲醇溶液中鼓入氮气15‑30分钟，再在超声条件下加入2，2’‑联吡啶和溴化亚铜至终浓度分别为1‑5mg/mL和0.45‑2.5mg/mL，浸入清洗后的载玻片，密封溶液并置入惰性、避光气氛箱保存6‑24小时，得活化的载体材料；所述甲醇溶液中甲醇：水体积比为1：4‑4：1；(2)采用微阵列芯片点样仪将检测抗体印刷在步骤(1)所得活化的载体材料上，点样后在18‑25℃下静置，再用PBS溶液清洗即得基于枝状聚合物的微阵列抗体芯片。
【技术特征摘要】
1.基于枝状聚合物的微阵列抗体芯片的制备方法，其特征在于，包括如下步骤: (1)活化载体材料:将载玻片浸没在乙醇中超声清洗，然后在3-环氧丙基氧丙基三甲氧基硅烷体积分数为1-10%的乙醇溶液中浸没1-4小时，再退火，再将载玻片浸入三乙基胺和α -溴异丁酰溴体积分数为分别0.1-1.0 %和0.1-1.2%的干燥二氯甲烷或四氢呋喃溶液中至少2小时，最后取出用二氯甲烷或四氢呋喃冲洗，得清洗后的载玻片；接着向寡聚(乙二醇)甲基丙烯酸酯和甲基丙烯酸缩水甘油酯体积分数分别为10-90%和0.4-1 %的甲醇溶液中鼓入氮气15-30分钟，再在超声条件下加入2，2’ -联吡啶和溴化亚铜至终浓度分别为l_5mg/mL和0.45-2.5mg/mL，浸入清洗后的载玻片，密封溶液并置入惰性、避光气氛箱保存6-24小时，得活化的载体材料；所述甲醇溶液中甲醇:水体积比为1:4-4:1 ； (2)采用微阵列芯片点样仪将检测抗体印刷在步骤(I)所得活化的载体材料上，点样后在18-25°C下静置，再用PBS溶液清洗即得基于枝状聚合物的微阵列抗体芯片。2.根据权利要求1所述基于枝状聚合物的微阵列抗体芯片的制备方法，其特征在于:活化载体材料的方法用如下步骤替换，将载玻片浸没在乙醇中超声清洗，然后在3-环氧丙基氧丙基三甲氧基硅烷体积分数为1-10%的乙醇溶液中浸没1-4小时，退火，再将载玻片浸入三乙基胺和α -溴异丁酰溴体积分数为分别0.1-1.0%和0.1-1.2%的干燥二氯甲烷或四氢呋喃溶液中至少2小时，最后取出用二氯甲烷或四氢呋喃冲洗，得清洗后的载玻片；接着向寡聚(乙二醇...
【专利技术属性】
技术研发人员：李长明，胡卫华，刘英帅，
申请(专利权)人：西南大学，
类型：发明
国别省市：重庆;85
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。