一种检测磺胺类药物的试剂板的制备方法技术

本发明专利技术涉及一种检测蜂蜜中磺胺类药物残留的试剂板的制备方法，可用于检测蜂蜜等农产品中的磺胺类药物。本发明专利技术试剂板由上下两块塑料模板和背衬组成，背衬上依次紧密粘贴着样品垫、胶金结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫。硝酸纤维素膜从样品垫到吸水垫方向上依次喷有检测线和质控线，可将反应结果以肉眼可见的颜色表征出来。该试剂板可进行半定量直观检测，整个操作过程仅需20～30min，且无需任何昂贵实验设备辅助，利于大规模样本筛选，适合工商部门、检验检疫机构、农产品生产以及农产品加工企业对原料及产品中的磺胺类药物进行大规模快速检测。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种检测蜂蜜中磺胺类药物残留的试剂板的制备方法，具体涉及一种检测磺胺类药物的免疫胶体金快速检测试剂板的制备方法。
技术介绍
磺胺类药物适用于治疗溶血性链球菌、脑膜炎球菌、肺炎球菌等感染疾病，用作饲料添加剂，可防治葡萄球菌及溶血性链球菌等的感染。由于其药效持久显著，在蜜蜂饲养中常用磺胺类药物进行疾病防治。然而不合理使用，易使磺胺类药物在蜂蜜等农产品中残留，药物通过食物链进入人体后会导致血尿、结晶尿、肾脏损害等疾病，对人体健康造成危害，同时磺胺类药物在蜂蜜中的残留也给蜂蜜贸易造成障碍。许多国家都规定了磺胺类药物及磺胺类药物在蜂蜜中的最高残留限量(MRL)。我国及欧盟均规定动物性食品中总磺胺以及单个磺胺药物的MRL为10ppb。目前，对于磺胺类药物残留的检测方法主要有理化分析法和免疫分析法。理化分析法，如HPLC及LC-MS，具有特异性好、准确率高的特点，是各大检测机构对检测样本进行确证的首选方法，但存在对设备、环境、操作技能等要求，所需费用高，不利于大规模样本筛选，因而不适合广大基层部门。免疫分析法，如酶联免疫吸附法(ELISA)，具有检测量大，操作相对简单等优点，越来越多地被用于动物性食品中抗生素残留的检测，但是ELISA法整个操作时间仍需要l_2h，且需用到昂贵的特殊仪器设备酶标仪，具有一定局限性。
技术实现思路
食品安全关系国计民生，研制开发一种检测限符合要求，重现性好，检测时间短，适合现场快速检测，技术产品或仪器设备成本较低，运行费用低的快速检测试剂迫在眉睫。针对上述问题，本专利技术提供了一种磺胺类药物金标检测试纸盒及其制备方法，该检测试纸盒检测快速、准确、明显、灵敏度高，为此，本专利技术还提供了该测试纸盒的制备方法。一种磺胺类药物金标检测试纸盒，其包括试纸条，所述试纸条被封装于盒壳体，所述盒壳体上面开有注样孔，观测孔，其特征在于:所述试纸条用聚氯乙烯或聚乙烯作背衬，在试纸条一端的注样区粘贴吸附含有胶体金-抗磺胺类药物单克隆抗体结合物的玻璃纤维膜；在试纸条中间的测试区粘贴硝酸纤维素膜，玻璃纤维膜的一小段重叠在硝酸纤维素膜上，在试纸条另一端吸水区粘贴吸水纸；在硝酸纤维素膜上从注样区到吸水区的方向，依次设置有材质为对氨基苯磺酰胺基苯甲酸-载体蛋白的检测线，和材质为羊抗兔IgG质控线，所述硝酸纤维素膜上覆盖有浓度为1%牛血清白蛋白层；所述注样孔对应于所述试纸条注样区的玻璃纤维膜，所述观测孔对应于试纸条的测试区。一种磺胺类药物金标检测试纸盒的制备方法，包括在试剂板的硝酸纤维素膜上的胶体金结合垫上包被有抗磺胺类药物多克隆抗体-胶体金标记物，从样品垫到吸水垫方向上依次喷有检测线和质控线，分别包被对氨基苯磺酰胺基苯甲酸-载体蛋白偶联物和羊抗兔 IgG。胶金结合垫上包被有抗磺胺类药物多克隆抗体与胶体金结合物，胶体金颗粒的平均大小为30nm。偶联对氨基苯磺酰胺基苯甲酸的载体蛋白选自牛血清蛋白、卵清蛋白、血蓝蛋白中一种。一种磺胺类药物金标检测试纸盒的制备方法，其工艺流程包括以下步骤: 制备对氨基苯磺酰胺基苯甲酸-BSA偶联物、制备抗磺胺类药物多克隆抗体、制备胶体金溶液、制备胶体金标记抗氨基苯磺酰胺基苯甲酸多克隆抗体和组装抗氨基苯磺酰胺基苯甲酸免疫胶体金快速检测试剂板。采用本专利技术中的测试纸盒检测水产类肉食品中磺胺类药物的含量，检测时只需将检测样品滴入注样孔中，稍许，即可在观测区中观察检测线和质控线的变色情况，确定样品中磺胺类药物含量是否超标，与现有测试方法相比，不需要大型检测仪器，检测快速、准确、明显、灵敏度高。【附图说明】图1磺胺类药物金标检测试纸盒检测示意图； 图2磺胺类药物金标检测试纸条结构图。【具体实施方式】见图1、图2，本专利技术包括试纸条2，试纸条2被封装于盒壳体1，盒壳体I上面开有注样孔8，观测孔9，试纸条2用聚氯乙烯或聚乙烯作背衬，在试纸条2 —端的注样区粘贴吸附含有胶体金-抗磺胺类药物单克隆抗体结合物的玻璃纤维膜3 ;在试纸条中间的测试区粘贴硝酸纤维素膜4，璃纤维膜3的一小段重叠在硝酸纤维素膜4上，在试纸条2另一端吸水区粘贴吸水纸7 ;在硝酸纤维素膜4上从注样区到吸水区的方向，依次设置有材质为磺胺类药物-卵清白蛋白的检测线5，盒材质为羊抗鼠IgG质控线6，硝酸纤维素膜4上覆盖有浓度为I %牛血清白蛋白层；注样孔8对应于试纸条2注样区的玻璃纤维膜3，观测孔9对应于试纸条2的测试区。硝酸纤维素膜4厚度为120 μ m,蛋白质负载量为5 μ g /cm2?20yg/cm2,最佳为12.5 μ g/cm2,聚氯乙烯或聚乙烯背衬厚度为100 μ m,试纸条2的尺寸约为(55?65)mmX (3?5)mm,检测线5和质控线6的宽度为0.5mm?Imm,最佳为0.75mm。下面结合附图描述本专利技术中磺胺类药物金标检测试纸盒的制备方法: 胶体金的制备: 取50ml 0.01%的氯金酸溶液，1000r/min磁力搅拌下,加热至11(TC,迅速加入I %朽1檬酸钠水溶液2ml，保持反应温度和搅拌转速不变，沸腾反应5min，溶液颜色刚刚变为清亮橘红色后停止反应，获得的胶体金平均粒径为30nm。抗磺胺类药物多克隆抗体及其溶液的制备: 对氨基苯磺酰胺基苯甲酸-BSA偶联物(SS-BSA)用0.15 mo I/L的NaCl稀释成I mg/mL的浓度。免疫新西兰大白兔6只剂量1.0 mg/kg抗原溶液加等量弗氏完全佐剂乳化完全后背部皮下多点注射每点0.1~0.2mL 3周后使用抗原液加等量的福式不完全佐剂，乳化完全后背部皮下多点注射，以后每周注射免疫一次。从第3此免疫开始，每次免疫后第7天耳静脉采血并分离血清，纯化，低温保存备用。其中完全福氏佐剂是由下列材料配比而成，液体石蜡:羊毛脂:卡介苗=12g: 20ml: 0.105g;不完全福氏佐剂是由下列材料配比而成，液体石腊:羊毛脂=12g: 20 ml。胶体金-抗磺胺类药物多克隆抗体结合物的制备: 在一定体积的胶体金溶液中，缓慢滴加0.lmg/ml抗磺胺类药物多克隆抗体溶液溶于0.01M pH7.4的PBS缓冲液中，超声波混匀2min，静置0.5h后通过4°C冷冻离心进行纯化，首次离心转速10000r/min,时间45min,弃上清,沉淀用10% BSA溶液溶解,进行下次离心；第二次用10%~30%甘油密度梯度离心,转速7000r/min,时间45min,用于除去未标记的蛋白和金颗粒聚集体，收集中间红褐色部分即可。金标垫、检测线、质控线的形成与试纸条的组装: 将胶体金-抗磺胺类药物单克隆抗体结合物稀释至0.5ug/ml~2.0ug/ml,最佳为1.25ug/ml，放入1mmX 300mm玻璃纤维膜，浸泡10分钟~20分钟，最佳为15分钟，37°C烘干，4 C~8 C保存，最佳为6 C，粘贴在背衬一端的注样区；在背衬中间检测区粘贴硝Ife纤维素膜，在硝酸纤维素膜上喷涂浓度为100 μ g/mL~500 μ g/mL,最佳浓度为300 μ g/mL,磺胺类药物-卵清白蛋白作检测线，喷涂浓度为50 μ g/mL~200 μ g/mL，最佳浓度125yg/mL，羊抗兔IgG作质控线，再用1%牛血清白蛋白封闭硝酸纤维素膜；在背衬另一端吸水区粘贴吸水纸；所得本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测磺胺类药物的试剂板的制备方法，其包括试纸条，所述试纸条被封装于盒壳体，所述盒壳体上面开有注样孔，观测孔，其特征在于：所述试纸条用聚氯乙烯或聚乙烯作背衬，在试纸条一端的注样区粘贴吸附含有胶体金‑抗磺胺类药物单克隆抗体结合物的玻璃纤维膜；在试纸条中间的测试区粘贴硝酸纤维素膜，玻璃纤维膜的一小段重叠在硝酸纤维素膜上，在试纸条另一端吸水区粘贴吸水纸；在硝酸纤维素膜上从注样区到吸水区的方向，依次设置有材质为对氨基苯磺酰胺基苯甲酸‑载体蛋白的检测线，和材质为羊抗兔IgG质控线，所述硝酸纤维素膜上覆盖有浓度为1％牛血清白蛋白层；所述注样孔对应于所述试纸条注样区的玻璃纤维膜，所述观测孔对应于试纸条的测试区。

【技术特征摘要】
1.一种检测磺胺类药物的试剂板的制备方法，其包括试纸条，所述试纸条被封装于盒壳体，所述盒壳体上面开有注样孔，观测孔，其特征在于:所述试纸条用聚氯乙烯或聚乙烯作背衬，在试纸条一端的注样区粘贴吸附含有胶体金-抗磺胺类药物单克隆抗体结合物的玻璃纤维膜；在试纸条中间的测试区粘贴硝酸纤维素膜，玻璃纤维膜的一小段重叠在硝酸纤维素膜上，在试纸条另一端吸水区粘贴吸水纸；在硝酸纤维素膜上从注样区到吸水区的方向，依次设置有材质为对氨基苯磺酰胺基苯甲酸-载体蛋白的检测线，和材质为羊抗兔IgG质控线，所述硝酸纤维素膜上覆盖有浓度为1%牛血清白蛋白层；所述注样孔对应于所述试纸条注样区的玻璃纤维膜，所述观测孔对应于试纸条的测试区。2.如权利要求1所述检测磺胺类药物的试剂板的制备方法，其特征在于:试纸盒的制备步骤包括在试剂板的硝酸纤维素膜上的胶...

【专利技术属性】
技术研发人员：李永锋，陈国勇，傅汝毅，陶玲云，蓝文苑，
申请(专利权)人：广西博士海意信息科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广西;45