葛花多糖、提取纯化方法及其作为烟草保润剂的应用技术

本发明专利技术涉及一种葛花多糖及其提取纯化方法，具体为：将粉碎过的干燥葛花用乙醚索氏提取后，残渣挥干再用沸水进行提取，沸水提取液浓缩、离心，取上清液醇沉静置，再次离心收集沉淀物，洗涤后用蒸馏水溶解，再加入1－2‰的木瓜蛋白酶于50±5℃水浴中放置2－4h，采用Sevage法脱除蛋白，活性炭脱色后减压浓缩，冷却后进行流水透析，透析结束后再次醇沉静置，沉淀于60－70℃干燥得粗多糖。试验证明：本发明专利技术葛花多糖对卷烟具有很好的物理和感官保润作用，并且可以降低卷烟的刺激性和杂气，提高卷烟烟气的圆润感和舒适性，可作为一种性能优良的烟草保润剂在卷烟中应用。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术涉及一种葛花多糖及其提取纯化方法，具体为：将粉碎过的干燥葛花用乙醚索氏提取后，残渣挥干再用沸水进行提取，沸水提取液浓缩、离心，取上清液醇沉静置，再次离心收集沉淀物，洗涤后用蒸馏水溶解，再加入1－2‰的木瓜蛋白酶于50±5℃水浴中放置2－4h，采用Sevage法脱除蛋白，活性炭脱色后减压浓缩，冷却后进行流水透析，透析结束后再次醇沉静置，沉淀于60－70℃干燥得粗多糖。试验证明：本专利技术葛花多糖对卷烟具有很好的物理和感官保润作用，并且可以降低卷烟的刺激性和杂气，提高卷烟烟气的圆润感和舒适性，可作为一种性能优良的烟草保润剂在卷烟中应用。【专利说明】葛花多糖、提取纯化方法及其作为烟草保润剂的应用
本专利技术属于保润剂
，具体涉及一种葛花多糖、提取纯化方法及其作为烟草保润剂的应用。
技术介绍
当前，我国卷烟工业中主要采用甘油、丙二醇、山梨醇等多羟基物质作为保润剂，使用此类保润剂的主要目的在于维持加工过程中烟丝的含水率，提高烟丝的耐加工性，但上述保润剂对成品卷烟含水率的维持和吸食舒适度的改善效果并不理想。多糖是由大量单糖聚合而成，其大量的羟基与水分子形成氢键，可以使其具有较强的持水能力。目前，国内外尚未有将葛花多糖作为烟草保润剂在卷烟中应用的相关报道。
技术实现思路
本专利技术目的在于提供一种葛花多糖、提取纯化方法及其作为烟草保润剂的应用。为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案: 一种葛花多糖的提取纯化方法，包括下述步骤:将粉碎过的干燥葛花用乙醚索氏提取(一般按料液比Ig:5 - 8ml添加乙醚)后，残渣挥干再用沸水进行提取，沸水提取液浓缩、离心，取上清液醇沉静置 ，再次离心收集沉淀物，沉淀物洗涤后用蒸馏水溶解，再加入沉淀物重量I 一 2%。的木瓜蛋白酶于50±5°C水浴中放置2 — 4h，采用Sevage法脱除蛋白，活性炭脱色后减压浓缩，冷却后进行流水透析用以除去小分子杂质，透析结束后再次醇沉静置，沉淀于60 - 70°C干燥得淡黄色粗多糖。进一步优选，将粗多糖层析分离纯化两次，获得精制多糖；两次分离纯化所用洗脱液分别为 0.5 mo I/L NaCl 溶液和 0.05 mo I/L NH4HCO3 溶液。利用上述提取纯化方法制备所得的葛花多糖。利用上述提取纯化方法制备所得葛花多糖作为烟草保润剂的应用。葛花，为豆科植物葛Puerarialobata (Willd.) Ohwi的干燥花。解酒醒脾。呈圆形或略成扁肾形，长5~15mm，宽2~6mm，适宜饮酒过度，头痛，头昏，烦渴，胸膈饱胀，呕吐酸水等伤及胃气之症，是一种名贵的中药材。本专利技术通过提取纯化获得了高纯度的精制葛花多糖，并将其进行物理保润性能测试和内在感官质量评价，发现其对卷烟具有很好的物理和感官保润作用，并且可以降低卷烟的刺激性和杂气，提高卷烟烟气的圆润感和舒适性，可以作为一种性能优良的烟草保润剂在卷烟中应用，并确定了其在卷烟中的适宜用量。和现有技术相比，本专利技术的有益效果:1)在葛花多糖的提取过程中，利用醇沉、蛋白酶水解、Sevage除蛋白和透析除小分子相结合的方法，有效地降低了葛花多糖中的杂质，为进一步的分离纯化奠定基础。2)采用凝胶色谱柱层析分离纯化两次，获得高纯度的精制葛花多糖。整个提取纯化过程操作简便，使用的原料和试剂价廉易得。3)经试验证明，本专利技术葛花多糖对烟草制品的保润效果明显，因此具有显著的工业应用价值和广阔的推广应用前景。【具体实施方式】以下通过实施例对本专利技术做进一步的说明，但本专利技术的保护范围不限于此。试验所用的主要试剂和仪器: 乙醚、乙醇、丙酮(中国宿州化学试剂有限公司，分析纯)，DEAE-Celluose和SephadexG200凝胶(美国sigma公司)，实验用水为蒸馏水。BS200SWE1型电子天平(感量:0.0OOlg，北京赛多丽丝天平有限公司)；R_215型旋转蒸发仪(瑞士 BUCHI公司)；V-700真空泵(瑞士 BUCHI公司);DLSB-20/60°C低温冷却循环泵(上海美强仪器设备有限公司);KDM型调温电热套(山东华鲁电热仪器有限公司);85-2型恒温磁力搅拌器(上海司乐仪器厂)、ZK-82B型电热真空干燥箱(上海申光仪器仪表有限公司)，CHRIST冻干机(瑞士BUCHI公司)，TSKGEL G2000 PW高效凝胶色谱柱(美国Sigma公司)，Agilent LCllOO型高效液相仪及示差折光检测仪(美国Agilent公司)。实施例1 一种葛花多糖的提取纯化方法，包括下述步骤:将粉碎过的300g干燥葛花用1800ml乙醚索氏提取2h用以除去油脂，残渣挥干。挥干后的残渣再用750ml沸水提取3次，合并3次所得的沸水提取液，浓缩、离心，取上清液，加上清液3倍体积量的无水乙醇进行醇沉，静置过夜(12h)，再次离心收集沉淀物。沉淀物依次用乙醇、丙酮洗涤3次后用蒸馏水溶解，再加入沉淀物重量1%。的木瓜蛋白酶于50°C水浴中放置2h，采用Sevage法脱除蛋白。加入Sg活性炭置于70°C水浴中加热3h，过滤除去活性炭，减压浓缩，自然冷却后装入透析袋中流水透析48h用以除去小 分子杂质，透析结束后，再次加入透析后多糖溶液体积3倍量的无水乙醇进行醇沉，静置过夜(12h)，沉淀于70°C干燥得6.Sg粗多糖，收率为2.3%。取1.5g粗多糖用蒸懼水溶解后，用DEAE-CelIuose凝胶色谱柱层析分离(5.0 X 50cm)，以0.5mol/L NaCl溶液为流动相(即洗脱液)，流速为2.5ml/min，采用硫酸苯酚法对层析液显色，收集主要色谱峰，冻干。然后将冻干所得固体用0.05mol/L NH4HCO3溶液溶解，用S印hadex G200凝胶色谱柱再次层析分离(5.0 X 50cm)，以0.05mol/L NH4HCO3溶液为流动相(即洗脱液)，流速为2.0ml/min，采用硫酸苯酚法对层析液显色，收集主要色谱峰，冻干，即得370mg精制葛花多糖固体，收率24.6%，经检测LTl糖含量为95%。实施例2 一种葛花多糖的提取纯化方法，包括下述步骤:将粉碎过的300g干燥葛花用2000ml乙醚索氏提取4h用以除去油脂，残渣挥干。挥干后的残渣再用750ml沸水提取3次，合并3次所得的沸水提取液，浓缩、离心，取上清液，加上清液3倍体积量的无水乙醇进行醇沉，静置12h，再次离心收集沉淀物。沉淀物依次用乙醇、丙酮洗涤3次后用蒸馏水溶解，再加入沉淀物重量2%。的木瓜蛋白酶于50°C水浴中放置4h，采用Sevage法脱除蛋白。加入8g活性炭置于70°C水浴中加热4h，过滤除去活性炭，减压浓缩，自然冷却后装入透析袋中流水透析48h用以除去小分子杂质，透析结束后，再次加入透析后多糖溶液体积3倍量的无水乙醇进行醇沉，静置过夜，沉淀于70°C干燥得6.4g粗多糖，收率为2.1%。取1.5g粗多糖用蒸懼水溶解后，用DEAE-CelIuose凝胶色谱柱层析分离(5.0 X 50cm)，以0.5mol/L NaCl溶液为流动相(即洗脱液)，流速为2.5ml/min，采用硫酸苯酚法对层析液显色，收集主要色谱峰，冻干。然后将冻干所得固体用0.05mol/L NH4HCO3溶液溶解，用S印hadex G200凝胶色谱柱本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种葛花多糖的提取纯化方法，其特征在于，包括下述步骤：将粉碎过的干燥葛花用乙醚索氏提取后，残渣挥干再用沸水进行提取，沸水提取液浓缩、离心，取上清液醇沉静置，再次离心收集沉淀物，沉淀物洗涤后用蒸馏水溶解，再加入1－2‰的木瓜蛋白酶于50±5℃水浴中放置2－4h，采用Sevage法脱除蛋白，活性炭脱色后减压浓缩，冷却后进行流水透析，透析结束后再次醇沉静置，沉淀于60－70℃干燥得粗多糖。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：陈芝飞，孙志涛，芦昶彤，赵永振，郝辉，刘强，周浩，
申请(专利权)人：河南中烟工业有限责任公司，
类型：发明
国别省市：河南;41