一种从灵芝中提取灵芝酸A的方法技术

本发明专利技术提供了一种从灵芝中提取灵芝酸A的方法，即将灵芝粉用质量百分比浓度为80%的乙醇水溶液浸提，所得浸提液减压浓缩得到的灵芝酸浸膏，加入水混合均匀，得到的混合液加入为混合液质量5%的NaHCO3搅拌均匀后过滤，所得滤液调pH值为2后用5倍体积的氯仿萃取，所得的氯仿层减压浓缩，得到的浓缩液用硅胶柱进行纯化，收集到的灵芝酸A粗品在LH-20常压凝胶柱上，用质量百分比浓度为51%的甲醇水溶液对其进行洗脱至灵芝酸A粗品全部洗脱下来，然后减压浓缩至干，得到的纯度为85%以上的灵芝酸A用甲醇重结晶即得纯度可达97.5％以上的灵芝酸A，其相对于灵芝药材中灵芝酸A的总得率为35%。

【技术实现步骤摘要】
一种从灵芝中提取灵芝酸A的方法
本专利技术属于天然产物的提取分离方法，特别涉及一种从灵芝中提取灵芝酸A的方法。
技术介绍
灵芝为灵芝科灵芝属药用真菌，始载于汉代《神农本草经》列为上品，灵芝属共有80多种灵芝，中国药典（2000年版）规定赤芝和紫芝为药用正品，灵芝含有多种化学成分。灵芝的主要活性成分有多糖及肽多糖类、生物碱类和核苷酸类、氨基酸和蛋白质类、三帖类、微量元素。灵芝中三萜类化合物具有保肝作用、抗肿瘤作用、抗HIVl及HIV2蛋白酶活性、抑制组胺释放、抑制血管紧张素转化酶（ACE)、抑制胆固醇合成、镇痛作用、对血小板聚集的影响、对蛋白金合欢酯转移酶的抑制作用、抗氧化作用。灵芝酸是灵芝三萜类化合物的重要活性成分，灵芝酸包括灵芝酸A，B，Cl，D等，其中灵芝酸A属于 四环三萜类，是灵芝苦味的主要来源，由于灵芝酸A分离难度大，在灵芝中含量较低等原因。目前灵芝酸A的提取方法常用氯仿作为提取溶剂经硅胶反复纯化得到灵芝酸A，存在环境污染大、得率低、纯度低等技术问题。
技术实现思路
本专利技术的目的为了解决上述的灵芝酸A的提取过程中由于以氯仿作为提取溶剂而存在的环境污染大、得率低等技术问题而提供一种从灵芝中提取灵芝酸A的方法，该提取方法环保，最终所得的灵芝酸A的得率和纯度都较高。本专利技术的技术方案 一种从灵芝中提取灵芝酸A的方法，具体包括以下步骤： (1)、将干燥的灵芝进行粉碎，所得的灵芝粉用质量百分比浓度为80%的乙醇水溶液浸提3次，合并3次所得的浸提液，每次浸提过程中控制温度为60°C，每次时间为5h ； 上述浸提所用的灵芝粉和质量百分比浓度为80%的乙醇水溶液的量，按灵芝粉：质量百分比浓度为80%的乙醇水溶液为IKg ：5-10L的比例计算； (2)、将步骤（I)所得的浸提液控制温度为60°C、压力为-O.IMPa的条件下减压浓缩得到灵芝酸浸膏； (3)、将步骤（2)所得的灵芝酸浸膏加入为其质量5倍的水，混合均匀得到混合液，然后加入为混合液质量的5%的NaHCO3,搅拌均匀后过滤，所得滤液用质量百分比浓度为10%的盐酸水溶液调PH值为2 ; 然后用5倍体积的氯仿萃取上述所得的pH为2的滤液3次，合并3次萃取的氯仿层，然后控制温度40°C，压力-O. IMPa下浓缩至干，得到浓缩液； (4)、正相硅胶纯化将上述所得的浓缩液用硅胶柱进行纯化，用氯仿作为装柱溶剂，所用硅胶优选为山东乳山市太阳干燥剂有限公司生产的200-300目的硅胶，以氯仿作为装柱溶剂，以氯仿：丙酮的体积比从10:1~3:1梯度冲洗，收集灵芝酸A粗品； (5)、凝胶纯化 在LH-20常压凝胶柱上，用质量百分比浓度为51%的甲醇水溶液对灵芝酸A粗品进行洗脱至全部洗脱下来，然后在温度40°C，压力-O. IMPa下浓缩至干，即得纯度为85%以上的灵芝酸A ； (6)、重结晶 将上述所得的纯度为85%以上的灵芝酸A先用氯仿溶解，然后加入甲醇于4°C条件下放置至有白色晶体析出，过滤，即得纯度为97. 5%以上的灵芝酸A ; 上述甲醇的加入量，按体积比即氯仿：甲醇为4:6的比例。本专利技术的有益效果 本专利技术的一种从灵芝中提取灵芝酸A的方法，由于采用了 80%乙醇水进行提取，对比现用氯仿提取，具有提取成本低、污染小、毒性低、环保等优点。进一步，本专利技术的一种从灵芝中提取灵芝酸A的方法，由于采用凝胶纯化，甲醇重结晶，得到了纯度可达97. 5%以上，相对于灵芝药材中灵芝酸A的总得率为35%，即本专利技术的从灵芝中提取灵芝酸A的方法最终所得的灵芝酸 A纯度高，得率高。进一步，本专利技术的一种从灵芝中提取灵芝酸A的方法具有工艺简单，操作方便，适于工业化提取等特点。【附图说明】图I、实施例1的步骤（I)所得的浸提液的色谱图； 图2、实施例1的步骤（4)所得的灵芝酸A粗品的色谱图； 图3、实施例1的步骤（5)所得的纯度为85%以上的灵芝酸A的色谱图 图4、实施例1的步骤（6)最终所得的灵芝酸A的色谱图。具体实施例下面通过具体实施例并结合附图对本专利技术作进一步说明，但实施例只是为了说明本专利技术，而不是对本专利技术的限制。实施例1 一种从灵芝中提取灵芝酸A的方法，具体包括以下步骤： (1)、取IKg干燥的灵芝进行粉碎，所得的灵芝粉用5L质量百分比浓度为80%的乙醇水溶液浸提3次，合并3次所得的浸提液，每次浸提过程中控制温度为60°C，时间为5h ； 取上述合并3次所得的浸提液，用Agilientl260DAD进行检测，色谱柱：UltimateLP-C18 (5 μ m, 4. 6mm x 250mm )流速:1.0mT,/mi n ,色谱柱温:25°C ，检测波长:256nm,进样量：20μ L，流动相乙腈：0. 5%甲酸梯度洗脱，得到色谱图如图I所示，图中的GA表示灵芝酸A在灵芝药材中的吸收峰，从图I中可看出灵芝药材中化合物丰富，分离难度较大； 上述浸提所用的灵芝粉和质量百分比浓度为80%的乙醇水溶液的量，按灵芝粉：质量百分比浓度为80%的乙醇水溶液为IKg ：5L的比例计算； (2)、将步骤（I)所得的浸提液控制温度为60°C、压力为-O.IMPa的条件下减压浓缩得到灵芝酸浸膏； (3)、将步骤（2)所得的灵芝酸浸膏加入为其质量5倍的水，混合均匀得到混合液，然后加入为混合液质量5%的NaHCO3,搅拌均与后过滤，所得滤液用质量百分比浓度为10%的盐酸水溶液调PH值为2 ; 然后用5倍体积的氯仿对上述所得的pH为2的滤液进行萃取3次，合并3次萃取的氯仿层，温度40°C，压力-O. IMPa下浓缩至干，得到30. 2g浓缩液； (4)、正相硅胶纯化 将上述所得的浓缩液用硅胶柱进行纯化，用氯仿作为装柱溶剂，所用的硅胶为山东乳山市太阳干燥剂有限公司生产的200-300目的硅胶，开始用三氯甲烷：丙酮=10:1冲洗8L，然后换三氯甲烷：丙酮=8:1冲洗7L，再用三氯甲烷：丙酮=6:1冲洗7L，最后用三氯甲烷：丙酮=3:1冲洗1L，每次冲洗分别收集HPLC检测含灵芝酸A部分产物即为灵芝酸A粗品，合并每次冲洗后所得的灵芝酸A粗品，共计3. 95g ； 取上述所得的灵芝酸A粗品，用Agilientl260DAD进行检测，色谱柱：UltimateLP-C18 (5 μ m, 4. 6mm x 250mm )流速:1.0mT,/mi n ,色谱柱温:25°C ，检测波长:256nm,进样量：20μ L，流动相乙腈：0. 5%甲酸梯度洗脱，得到色谱图如图2所示，图中的GA表示过硅胶后灵芝酸A的吸收峰，从图2中可看出过完硅胶后灵芝酸A纯度大幅提高； (5)、凝胶纯化 在LH-20常压凝胶柱上 ，用质量百分比浓度为51%的甲醇水溶液对灵芝酸A粗品进行洗脱至灵芝酸A全部洗完，然后在温度40°C，压力-O. IMPa下浓缩至干，即得O. 15g纯度为85%以上的灵芝酸A ; 取上述所得的纯度为85%以上的灵芝酸A，用Agilientl260DAD进行检测，色谱柱：Ultimate LP-C18 (5 μ m, 4. 6mm x 250mm )流速：1.0mT,/mi n ,色谱柱温：25 °C ,检测波长：256nm，进样量：20 μ L，流动相乙本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种从灵芝中提取灵芝酸A的方法，其特征在于具体包括以下步骤：（1）、将干燥的灵芝进行粉碎，所得的灵芝粉用质量百分比浓度为80%的乙醇水溶液浸提3次，合并3次所得的浸提液，每次浸提过程中控制温度为60℃，每次时间为5h； 上述浸提所用的灵芝粉和质量百分比浓度为80%的乙醇水溶液的量，按灵芝粉：质量百分比浓度为80%的乙醇水溶液为1Kg：5‑10L的比例计算；（2）、将步骤（1）所得的浸提液控制温度为60℃、压力为‑0.1MPa的条件下减压浓缩得到灵芝酸浸膏；（3）、将步骤（2）所得的灵芝酸浸膏加入为其质量5倍的水，混合均匀得到混 合液，然后加入为混合液质量5%的NaHCO3,搅拌均匀后过滤，所得滤液用质量百分比浓度为10%的盐酸水溶液调pH值为2；然后用5倍体积的氯仿萃取上述所得的pH为2的滤液3次，合并3次萃取的氯仿层,然后控制温度40℃，压力‑0.1MPa下浓缩至干，得到浓缩液；（4）、正相硅胶纯化将上述所得的浓缩液用硅胶柱进行纯化，用氯仿作为装柱溶剂，以氯仿：丙酮的体积比从10:1～3:1梯度冲洗，收集灵芝酸A粗品；（5）、凝胶纯化在LH‑20常压凝胶柱上，用质量百分比浓度为51%的甲醇水溶液对灵芝酸A粗品进行洗脱至全部洗脱下来，然后在温度40℃，压力‑0.1MPa下浓缩至干，即得纯度为85%以上的灵芝酸A； （6）、重结晶将上述所得的纯度为85%以上的灵芝酸A先用氯仿溶解，然后加入甲醇于4℃条件下放置至有白色晶体析出，过滤，即得灵芝酸A； 上述甲醇的加入量，按体积比即氯仿：甲醇为4:6的比例。...

【技术特征摘要】
1.一种从灵芝中提取灵芝酸A的方法，其特征在于具体包括以下步骤: (1)、将干燥的灵芝进行粉碎，所得的灵芝粉用质量百分比浓度为80%的乙醇水溶液浸提3次，合并3次所得的浸提液，每次浸提过程中控制温度为60°C，每次时间为5h ； 上述浸提所用的灵芝粉和质量百分比浓度为80%的乙醇水溶液的量，按灵芝粉:质量百分比浓度为80%的乙醇水溶液为IKg:5-10L的比例计算； (2)、将步骤(1)所得的浸提液控制温度为60°C、压力为-0.1MPa的条件下减压浓缩得到灵芝酸浸膏； (3)、将步骤(2)所得的灵芝酸浸膏加入为其质量5倍的水，混合均匀得到混合液，然后加入为混合液质量5%的NaHCO3,搅拌均匀后过滤，所得滤液用质量百分比浓度为10%的盐酸水溶液调PH值为2 ; 然后用5倍体积的氯仿萃取上述所得的pH为2的滤液3次，合并3次萃取的氯仿层，然后控制温度40°C，压力-0.1MPa下浓缩至干，得到浓缩液； (4)、正相硅胶纯化 将上述所得的浓 缩液用硅胶柱进行纯化，用氯仿作为装柱...

【专利技术属性】
技术研发人员：李成飞，张婉萍，冯宝军，
申请(专利权)人：上海应用技术学院，
类型：发明
国别省市：上海;31