本发明专利技术描述一种使用季氨氧基库克森QAOC试剂对包含酚系OH的样品，如包含酚系OH的类固醇进行质谱分析的方法。所述QAOC试剂可以改进酚系OH样品的电离和分裂特性，其进而可以改进定量和鉴别。所述方法可以包括用所述QAOC试剂衍生化所述酚系OH样品以产生加合物和使用质谱法来分析所述加合物。所述样品的衍生化可以为单步反应，其中所述QAOC试剂包含氨氧基MS标记，或可以为多步反应，其中通过使基于羰基取代的PTAD的试剂与所述样品反应，接着与氨氧基MS标记组合来形成所述加合物。也可以在使样品与所述试剂反应之前对所述样品进行富集。所述方法也可以允许多路复用。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】【专利摘要】本专利技术描述一种使用季氨氧基库克森QAOC试剂对包含酚系OH的样品，如包含酚系OH的类固醇进行质谱分析的方法。所述QAOC试剂可以改进酚系OH样品的电离和分裂特性，其进而可以改进定量和鉴别。所述方法可以包括用所述QAOC试剂衍生化所述酚系OH样品以产生加合物和使用质谱法来分析所述加合物。所述样品的衍生化可以为单步反应，其中所述QAOC试剂包含氨氧基MS标记，或可以为多步反应，其中通过使基于羰基取代的PTAD的试剂与所述样品反应，接着与氨氧基MS标记组合来形成所述加合物。也可以在使样品与所述试剂反应之前对所述样品进行富集。所述方法也可以允许多路复用。【专利说明】使用标记化学和LC-MSMS工作流分析具有酚系OH的雌二醇和分析物相关美国串请本申请要求美国临时申请序列号61/588902的优先权，其全部传授内容以引用的方式并入本文中。
本专利技术传授内容涉及质谱和适用于质谱的标记试剂的领域。
技术介绍
标记化学大体上用于改进质谱信号。使用水性烯型反应以使用试剂4-苯基-3H_1，2，4-三唑-3，5(4H)_ 二酮(通常被称为PTAD或库克森试剂(Cookson Reagent))衍生酪氨酸的共轭可以提供对于合成双特异性抗体尤其适用的共轭物(Hitoshi Ban,吉里亚加夫里柳克(Jilia Gavrilyuk),卡洛斯 F.巴巴斯(Carlos F.Barbas),美国化学协会期刊(J.Am.Chem.Soc.) 2010,132,1523-1525)。PTAD也已用于与化合物的维生素D类共轭以用于质谱分析(岛田一兵(Kazutake Shimada),大江友之(Tomoyuki Oe),水 口辰人(Tatsuhito Mizuguchi),分析家(Analyst)，1991，116，1393-1397)。开发季氨基氧基库克森(Cookson) ( “QA0C”), 一种与PTAD具有相同反应核心的试剂以用于分析如美国公开专利申请2011/0212534(其以全文引用的方式并入本文中)中所述的维生素D3代谢物。发现此试剂与维生素D3的共轭二烯官能团反应以对于维生素D3的质谱(MS)分析提供改进的电离和分裂特性。精确分析和定量激素和其它含有酚系OH的化合物变得越来越重要。举例来说，雌激素和雌激素类化合物经由激素取代疗法在现今的社会中正发挥越来越多的作用。并且，分析和定量雌激素和雌激素类化合物帮助处理雌激素相关的疾病，如乳癌。但是，仍需要对于含有酚系OH的化合物，如类固醇或雌激素进行改进质谱分析的标记。通常难以通过质谱来分析这些化合物，所述化合物可以包括激素，如雌二醇。举例来说，这些化合物中的许多不含可电离基团。因此，可能难以定量生物基质中的这些分子，例如雌二醇，尤其在低浓度下。尽管如五氟苄基溴和丹磺酰氯的试剂常用于使用质谱以进行雌二醇分析的衍生化策略中，但包含利用含有酚系OH的分析物的所述衍生作用的LC/MSMS的当前策略未能达到临床分析所需的检测限(岛田(Shimada)等人，分析家(Analyst), 116,1393-1397(1991);东谤(Higashi)等人，化学与药学公报(Chem.Pharm.Bull.) 54 (11),1479-1485(2006))。需要一种克服这些缺点的定量这些分析物的方法。
技术实现思路
根据各种实施例，本专利技术传授内容提供定量具有一个或一个以上酚系OH部分和其代谢物的化合物(在本文中统称为酚系OH分析物)的方法。根据各种实施例，公开一种用于对酚系OH分析物进行质谱分析的方法，其可包含用QAOC试剂标记分析物以产生加合物和使用质谱(MS)来分析加合物。在一些实施例中，可以使用LC-MSMS来鉴别和定量加合物。在一些实施例中，可以使用LC-MSMS和多重反应监测(MRM)工作流来分析加合物。在一些实施例中，加合物可以在反相管柱上具有相异保留时间和相异质量。在一些实施例中，在高能碰撞下，可以产生报告子基团。在一些实施例中，对于各报告子基团检测的强度或峰面积不仅可以用于鉴别，而且可以用于定量。根据各种实施例，所述方法也可以包含样品富集，例如在用QAOC试剂标记分析物之前。在一些实施例中，可以使用母离子-子离子跃迁监测(PDITM)，例如使用三重四极MS平台来分析加合物。在一些实施例中，可以使用质谱同时分析已经用QAOC试剂标记的具有酚系OH基团的多种不同分析物。举例来说，不同QAOC试剂可以用于标记不同分析物，并且可以使用质谱，例如LC-MSMS来分析标记的分析物。在一些实施例中，QAOC试剂含有一个或一个以上同位素标记的原子。根据各种实施例，酚系OH分析物可以为类固醇和雌激素。举例来说，酚系OH分析物可以为雌激素化合物，如雌酮(El)、雌酮硫酸盐(Els)、17 α -雌二醇(E2a)、17 β -雌二醇(E2b)、雌二醇硫酸盐(E2s)、马烯雌酮(EQ)、17 α-二氢马烯雌酮(EQa)、17 β - 二氢马烯雌酮(EQa)、马萘雌酮(EN)、17 α-二氢马萘雌酮(ENa)、17 β -二氢马萘雌酮(ENb)、A8，9_脱氢雌酮(dEl)、Λ 8，9-脱氢 雌酮硫酸盐(dEls)雌三醇、16-表雌三醇、17-表雌三醇和16，17-表雌三醇。在一些实施例中，基于羰基取代的苯基-3H_1，2，4-三唑-3，5(4H)_ 二酮(羰基-PTAD)的试剂可以在标记酚系OH分析物之前偶合于氨氧基标记剂(此方法在本文中被称作单步标记反应)。在其它实施例中，无氨氧基标记剂的基于羰基取代的PTAD的试剂可以与酚系OH分析物反应以标记分析物。标记的分析物可以随后经质量分析。或者，可以在质量分析之前在标记的分析物的羰基部分用氨氧基标记来标记所述分析物(此方法在本文中被称作两步标记反应)。可以通过下式描述QAOC试剂:【权利要求】1.一种用于样品的质谱分析的方法，其包含以下步骤: 用QAOC试剂处理所述样品以标记所述样品中的至少一种酚系OH分析物以产生酚系QAOC加合物；和 使用质谱仪分析所述酚系QAOC加合物。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述QAOC试剂具有下式: R3 3.根据权利要求2所述的方法，其中R2为甲基或乙基并且R3不存在； 和/或LI和L2独立地为键、肽、寡聚物、PEG或C1-C2tl亚烷基链。4.根据权利要求2所述的方法，其中所述至少一种酚系OH分析物为类固醇并且任选地其中所述类固醇为选自由以下组成的群组的雌激素化合物:雌三醇、16-表雌三醇、17-表雌三醇和16，17-表雌三醇、雌酮(El)、雌酮硫酸盐(Els)、17 α-雌二醇(E2a)、17 0-雌二醇(E2b)、雌二醇硫酸盐(E2s)、马烯雌酮(EQ)、17 α-二氢马烯雌酮(EQa)、17 β - 二氢马烯雌酮(EQb)、马萘雌酮(EN)、17 α-二氢马萘雌酮(ENa)、17 β - 二氢马萘雌酮(ENb)、Λ 8，9-脱氢雌酮(dEl)、Λ 8，9-脱氢雌酮硫酸盐(dEls)。5.根据权利要求2所述的方法，其中所述QAOC试剂是通过使具有以下结构的化合物: 6.根据权利要求5所述的方法，其中R2为甲基或乙基，R3不存在，R4为甲基，m为I与5之间的整数，并且本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种用于样品的质谱分析的方法，其包含以下步骤：用QAOC试剂处理所述样品以标记所述样品中的至少一种酚系OH分析物以产生酚系QAOC加合物；和使用质谱仪分析所述酚系QAOC加合物。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：萨巴卡·戴伊，萨巴辛·普卡雅斯特哈，
申请(专利权)人：DH科技发展私人贸易有限公司，
类型：发明
国别省市：新加坡;SG
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。