一种生物样本的保存和分析前预处理方法技术

本发明专利技术公开了一种生物样本的保存和分析前预处理方法，该方法是把生物样本加入到样本管的样本室中，所述的样本管管内中部填充有填充段将样本管分隔成上部的样本室和下部的溶出液接收室；冷冻干燥使生物样本吸附在填充段的填充材料表面，再在样品管内充氮气或抽真空进行密封保存；生物样本处理时，直接在样本室中加入含内标的有机溶剂，有机溶剂从样本室流经填充段对生物样本进行溶出后，流入溶出液接收室，对所得的溶出液进样进行分析测试；该方法使生物样保存的稳定性提高，降低样本保存条件要求，并且该方法操作简单，流程短，同时还可以提高样本前处理的富集和纯化效率，提高方法灵敏度、精密度和准确性。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术公开了，该方法是把生物样本加入到样本管的样本室中，所述的样本管管内中部填充有填充段将样本管分隔成上部的样本室和下部的溶出液接收室；冷冻干燥使生物样本吸附在填充段的填充材料表面，再在样品管内充氮气或抽真空进行密封保存；生物样本处理时，直接在样本室中加入含内标的有机溶剂，有机溶剂从样本室流经填充段对生物样本进行溶出后，流入溶出液接收室，对所得的溶出液进样进行分析测试；该方法使生物样保存的稳定性提高，降低样本保存条件要求，并且该方法操作简单，流程短，同时还可以提高样本前处理的富集和纯化效率，提高方法灵敏度、精密度和准确性。【专利说明】
本专利技术涉及；属于药物领域。
技术介绍
药物动力学研究(包含生物等效性和生物利用度研究)无论在临床前研究、临床研究还是在上市后临床应用研究中都十分重要，可以揭示药物在不同种属动物、不同人群中的经时变化规律。药物动力学研究中的生物样本是指在研究过程中采集的血样、尿样、粪样及其他体液和组织样本。这些样本需要在低温冷冻条件下保存，以确保在完成分析测试前及以后一段时间内的稳定性。有些样本甚至在_80°C的条件下仍不够稳定。这种方法不经需要昂贵的设备和大量的能量消耗，还无法保证样本的稳定性。这些冷冻保存的样本，在分析测试前，需要解冻后进行前处理。前处理的目的是除去生物样本中的蛋白质等生物杂质，保留待测物。目前的方法有蛋白沉淀法、液液萃取法、固相萃取法等。这些方法不或多或少存在纯化效率不高，操作复杂繁琐、无法制定标准操作的缺点。寻找一种既可以保证样本稳定性，又节能环保，既有利于提高后期前处理纯化效率，又有可以制定标准操作的样本处理方法具有重要的意义。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种能在温和条件下稳定保存生物样本和简化生物样本检测前预处理流程，提高前处理时生物样本的富集和纯化效率的方法。本专利技术提供了，该方法是把定量的生物样本加入到样本管的样本室中，所述的样本管管内中部填充有一段由玻璃纤维、硅胶、键合硅胶或纤维素填充材料构成的填充段，所述填充段将样本管分隔成上部的样本室和下部的溶出液接收室；进行冷冻干燥使生物样本吸附在填充段的填充材料表面，再在样品管内充氮气或抽真空，进行密封保存；进行生物样本处理时，直接在样本室中加入含内标的有机溶剂，有机溶剂从样本室流经填充段对吸附在填充材料表面的生物样本进行溶出后，流入溶出液接收室，溶出液接收室所得的溶出液采取直接进样或者吹干后定容进样进行分析测试；所述的有机溶剂不溶解填充材料和生物样本中的生物杂质。本专利技术的生物样本的保存和分析前预处理方法还包括以下优选技术方案:优选的有机溶剂为甲醇、乙腈、乙酸乙酯、二氯甲烷、氯仿中的一种或几种。所述的填充材料与生物样本的质量之比为1:0.2?1:3。所述的冷冻干燥是在-50?_20°C下真空干燥。所述的冷冻干燥时间为10?30h。所述的有机溶剂的用量为0.2?3mL。所述的分析测试所用的仪器为高效液相色谱仪、气相色谱仪或高效液相色谱质谱联用仪中的一种。所述的生物样本为含药生物样本，如血样、尿样、生物组织或唾液中的一种。所述的保存可以根据实际情况采用冷冻、冷藏或室温保存。所述的有机溶剂流经填充段时可以采用超声辅助溶出。所述的填充段中填充材料具有大量可供溶液自由通过的微孔，也可以通过离心加快溶液流经填充段的速率。所述的生物样本加入到样本管的样本室中后可以采用超声分散处理，使生物样本更好地分散吸附在填充材料表面。本专利技术的有益技术效果:本专利技术通过专利技术人的反复研究，最终确定一种不但能稳定保存生物样本，而且能通过简单操作、较短流程，提高生物样本分析前预处理时的富集和纯化效率的方法，特别是含药生物样本如血样、尿样、唾液或生物组织等的保存和快速分析前处理方法。本专利技术方法采用特殊的PE样品管(如附图1)填装玻璃纤维、硅胶、凝胶或纤维素等吸附剂，在结合本专利技术的冷冻干燥和密封保存处理，对生物样本进行隔绝空气和吸附水的双重保护；样本分析前处理时，利用生物样本中蛋白质等生物杂质不溶于所选择的有机溶剂的特点，直接加入含内标的有机溶剂，进行溶解提取，溶出液直接进样测定或者挥干定容后进样测定；并且在溶剂溶出过程中将血浆中蛋白等物质固定于载体上从而减少测试样本中杂质干扰，达到纯化的目的。综上所述，本专利技术方法可以使生物样本在干燥、隔绝氧气的条件下保存，大大提供稳定性，降低样本保存条件要求；该方法还可以大大简化样本处理的流程，使样本处理操作标准化，同时还可以提高富集纯化效率，提高方法灵敏度、精密度和准确性。【专利附图】【附图说明】【图1】是本发 明中的样本管；I为样本室，2为填充材料，3为溶出液接收室。【具体实施方式】以下实施例是对本
技术实现思路
的进一步说明，而不是对本专利技术保护范围的限制。本专利技术的研究目的是探索一种生物样本常温保存方法，以及进一步简化生物样本处理方法。血浆样本中存在人体血液中的各种酶，在血浆的水环境中，酶催化药物降解，导致血浆中药物减少，无法达到长期保存的目的；虽然将血浆样本置于低温保存箱中可以减缓此过程，但是没有解决根本问题。通过血浆加入载体(硅胶或玻璃纤维)中冷冻干燥的方法，血浆中水不再存在，酶无法催化药物发生各种反应，可以达到长期保存血浆样本的目的，甚至可以实现常温保存。加入载体可使冻干过程更加迅速，并且在甲醇等溶剂洗脱过程中将血浆中蛋白等物质固定于载体上从而减少测试样本中杂质干扰，达到纯化的目的。实施例1冷冻干燥方法:分别选用麦考酚酸酯、莫达非尼、左乙拉西坦、烟酸作为模型药物，配制含药血浆。吸取200 μ L含药血浆，置于中部填充有15层玻璃纤维材料的过滤管上部的样本室中，超声混匀。于_40°C下真空冷冻干燥28h，密封阴凉处保存待测。样本测试方法:在离心管上部的样本室中加入500 μ L含内标的甲醇，放置2分钟，超声5分钟，离心，从溶出液接收室接收溶出液；再在离心管样本室加入500 μ L含内标的甲醇，同法处理。合并溶出液。吹干，200 μ L流动性定容，进样测定。对照液处理:配制待测物及内标理论浓度相同的对照溶液，直接进样。每个样本处理并测试3份。实施结果如表1:表1.本专利技术方法冷冻干燥后直接溶解处理样本的测试结果【权利要求】1.，其特征在于，把定量的生物样本加入到样本管的样本室中，所述的样本管管内中部填充有一段由玻璃纤维、硅胶、键合硅胶或纤维素填充材料构成的填充段，所述填充段将样本管分隔成上部的样本室和下部的溶出液接收室；进行冷冻干燥使生物样本吸附在填充段的填充材料表面，再在样品管内充氮气或抽真空进行密封保存；进行生物样本处理时，直接在样本室中加入含内标的有机溶剂，有机溶剂从样本室流经填充段对吸附在填充材料表面的生物样本进行溶出后，流入溶出液接收室，溶出液接收室所得的溶出液采取直接进样或者吹干后定容进样进行分析测试；所述的有机溶剂不溶解填充材料和生物样本中的生物杂质。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的有机溶剂为甲醇、乙腈、乙酸乙酯、二氯甲烷、氯仿中的一种或几种。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的填充材料与生物样本的质量之比为 1:0.2 ~3。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的冷冻干燥是在-50~-20°C下真空干燥。5.根据权利要求1所述本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种生物样本的保存和分析前预处理方法，其特征在于，把定量的生物样本加入到样本管的样本室中，所述的样本管管内中部填充有一段由玻璃纤维、硅胶、键合硅胶或纤维素填充材料构成的填充段，所述填充段将样本管分隔成上部的样本室和下部的溶出液接收室；进行冷冻干燥使生物样本吸附在填充段的填充材料表面，再在样品管内充氮气或抽真空进行密封保存；进行生物样本处理时，直接在样本室中加入含内标的有机溶剂，有机溶剂从样本室流经填充段对吸附在填充材料表面的生物样本进行溶出后，流入溶出液接收室，溶出液接收室所得的溶出液采取直接进样或者吹干后定容进样进行分析测试；所述的有机溶剂不溶解填充材料和生物样本中的生物杂质。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：程泽能，余鹏，
申请(专利权)人：中南大学，
类型：发明
国别省市：湖南;43