念珠菌分型检测试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种念珠菌分型检测试剂盒，包括：（1）一个基因芯片，其上带有：(i)念珠菌的13个不同型别的核苷酸序列探针，其中探针为SEQIDNos：1-13或与SEQIDNos:1-13互补的序列；(ii)标记有生物素点的DNA序列，序列为SEQIDNo.14；(iii)带有编码β-球蛋白部分的DNA序列,序列为SEQIDNo.15；（2）各种引物，序列为SEQIDNos.16-21。本发明专利技术所述念珠菌分型检测试剂盒提供了检测念珠菌分型联合检测平台，可实现同步联合检测、提高检测特异性、降低成本、缩短检测时间，对开展念珠菌临床早期诊断和人群筛查具有重大的意义。

【技术实现步骤摘要】
念珠菌分型检测试剂盒
本专利技术涉及一种试剂盒，具体涉及一种用于诊断多种常见致病念珠菌的检测试剂盒。
技术介绍
念珠菌(Candida Albicans,拉丁文:Nostoc丄是真菌中最常见的条件致病菌,又称假丝酵母。它常寄生于人的皮肤、口腔、阴道和肠粘膜等处，当机体免疫机能低下或正常寄居部位的微生态环境失调，容易引起念珠菌病。念珠菌可引起皮肤粘膜浅层或全身系统性感染，感染不同部位可引起不同的疾患，除皮肤念珠菌病外，还有念珠菌性口腔炎、阴道炎、膀胱炎、肾盂肾炎、脑膜炎、菌血症和胆道感染等。近年来，由于免疫受损人群不断增多(包括恶性肿瘤、血液病、艾滋病、糖尿病、自身免疫病、严重烧伤和创伤、吸毒和人口老龄化等)和广谱抗生素、糖皮质激素和免疫抑制剂的广泛使用甚至是滥用，器官移植、放疗化疗和导管技术的发展普及等因素的影响，深部念珠菌感染的发病率急剧上升。临床上常见的致病念珠菌包括白色念珠菌、光滑念珠菌、近平滑念珠菌、热带念珠菌、克柔念珠菌和都柏林念珠菌等，不同的念珠菌具有不同的药物敏感性和耐药性。深部真菌感染的病原菌以念珠菌和曲霉最为常见。据美国的一项大规模院内流行病学调查显示，念珠菌属引起的真菌感染已经成为美国院内血行感染(bloodstreaminfections,BSIs)的第四大病因，并占院内真菌性感染的四分之三，死亡率占据所有院内机会感染的第一位。念珠菌血症在普通住院病人中的发病率为0.1-3.7%。，而在I⑶患者中的发生率为1.12-94%0。随着抗真菌药物的临床应用，特别是三唑类抗真菌药物的广泛应用，系统性和侵袭性念珠菌病的致病菌菌谱发生了较大的变化。由非白念珠菌引起的感染比率逐年上升，如克柔念珠菌(约占2-4%)、光滑念珠菌(约占8-18%)、热带念珠菌(约占11-25%)、近平滑念珠菌(约占7-15%)、以及近年来出现的葡萄牙念珠菌、挪威念珠菌和都柏林念珠菌等。但白念珠菌仍是发生侵袭性念珠菌感染最常见的致病菌(约占50-59%)，也是在胃肠道和生殖道中以及皮肤表面最常分离出的念珠菌。值得警惕和重视的是，光滑念珠菌和克柔念珠菌引起的感染近年来显著上升，且这两种念珠菌对哗类药物不敏感甚至天然耐药性，因此有必要将念珠菌进行有效区分。深部念珠菌病常继发于严重的基础病，很容易造成侵袭性感染，死亡率居高不下。有资料显示，早期、正确的诊断可以显著提高深部真菌感染者的生存率。而妨碍临床医生作出早期准确诊断的因素主要有:一是深部真菌感染的临床表现缺乏特异性；二是真菌培养和鉴定的周期长，念珠菌需要2.3天，丝状真菌需要I一2周，甚至更长的时间，而且阳性率不高；三是在大多数的医院缺乏专业的真菌检验技术人员，无力开展真菌培养和鉴定工作。真菌感染的实验室诊断仍沿用传统的镜检加培养方法，有时辅以组织病理学检查。而这几种方法的敏感性和特异性都有限，如念珠菌血症的血培养阳性率只有50%左右。目前，念珠菌的鉴定主要依靠芽管试验、CHR0MAgar、AP1.20、糖源和氮源利用实验，比较烦琐，因必须在初代培养获得菌落的基础上，故所需时间较长，一般要2.3天，甚至更长的时间，而且易受主观因素的影响。因此采用新的技术和方法提高真菌鉴定的敏感性、特异性和稳定性成为深部念珠菌病诊断的迫切要求。以PCR方法为基础的分子生物学技术具有操作简单、可重复性、较高的敏感性和特异性，越来越受到重视。这对于深部真菌感染的早期和准确诊断是一个很好的帮助，特别是对于患有严重基础疾病患者，无疑更是雪中送炭，至关重要。目前以PCR方法为基础的分子生物学技术检测念珠菌只是检测其中一种或是几种，涵盖的亚型少，往往容易造成检测的疏漏。因此研制和开发一种特异性强、敏感性高同时又快速、经济，能同时检验多种常见致病念珠菌检测方法显得尤为重要，对念珠菌的诊断和治疗起着重要的作用。
技术实现思路
本专利技术目的主要是为了弥补现有念珠菌检测在分型方面的不足，提供一种可以同时检测多种常见致病念珠菌检测试剂盒。本专利技术的一种念珠菌分型检测试剂盒，包括: (I) 一个基因芯片，其上带有: (i)念珠菌的13个不同型别的核苷酸序列探针(共13条探针)，其中探针为SEQID Nos:1-13或与SEQ IDNos: 1_13互补的序列，具体序列如下: 名称序列号序列 CA PN SEQ ID N0.1 ATTGCTTGCGGCGGTAACGTCC CG PN SEQ ID N0.2 TAGGTTTTACCAACTCGGTGTT CT PN SEQ ID N0.3 AACGCTTATTTTGCTAGTGGCC CK PN SEQ ID N0.4 GGCCGAGCGAACTAGACTTTT CD PN SEQ ID N0.5 AAGGCGGTCTCTGGCGTCGCCC Cg PN SEQ ID N0.6 AACAATACCAGAAATATCC CL PN SEQ ID N0.7 TATTTCGGAGCAACGCCT CF PN SEQ ID N0.8 CCTAGAATACCGAGAAATATA CN PN SEQ ID N0.9 GTACTTCGCTCAGTCCCG CP PN SEQ ID N0.10 ACAAACTCCAAAACTTCTTCCA CP I PN SEQ ID N0.11 TGGCAGGCCCCATATAGAA CP ΠΡΝ SEQ ID N0.12 ATTAGTTAATCAAGTTGACAATTAA CP IIIPN SEQ ID N0.13 TGACTATTAGTTAATCAGTTGACTT (ii)标记有生物素点的DNA序列(Bio)，用于监控杂交是否成功，序列为SEQIDN0.14: Bio CGTCCAAGGGGAAACTGATCT SEQ ID N0.14 ； (iii)带有编码β_球蛋白部分的DNA序列(1C)，作为内控点，用于监控PCR体系是否成功，序列为SEQ IDN0.15:1C CACAAGTATCACTAAGCTCG SEQ ID N0.15; (2 )各种引物，用于扩增临床样本中的DNA序列，其特异性扩增引物的DNA序列为SEQID Nos.16-21，具体序列如下:名称序列号序列ZJ-1TS-F SEQ ID N0.16 TTCTCGCATCGATGAAGARCGCAZJ-1TS-R SEQ ID N0.17 TCCTCCGCTTATTGATATGCCP-F SEQ ID N0.18 GTAACAAGGTTTCCGTAGGTCP-R SEQ ID N0.19 GTTGAAAGTTTTGACTATTAIC-F SEQ ID N0.20 GCAGGCTGCCTATCAGAAAGTGIC-R SEQ ID N0.21 CACAAGTATCACTAAGCTCG 本专利技术针对各种探针的长度一般在14-25个碱基左右，探针5'或3'端进行胺基化处理。本专利技术设计的探针有着合理的碱基成分、Tm值相近，有利于在同一杂交温度下的同步性，不会因为温度的问题而影响杂交的结果，使检查的准确性大大增加。本专利技术上述的试剂盒，所述基因芯片包括用于定位探针的位置标记。本专利技术上述的试剂盒，所述基因芯片本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种念珠菌分型检测试剂盒，包括：（1）一个基因芯片，其上带有：(i)念珠菌的13个不同型别的核苷酸序列探针，其中探针为SEQ ID Nos：1‑13或与SEQ ID Nos: 1‑13互补的序列；(ii) 标记有生物素点的DNA序列，序列为SEQ ID No.14；(iii) 带有编码β‑球蛋白部分的DNA序列,序列为SEQ ID No.15；（2）各种引物，序列为SEQ ID Nos.16‑21。

【技术特征摘要】
1.一种念珠菌分型检测试剂盒，包括: (1) 一个基因芯片，其上带有: (i)念珠菌的13个不同型别的核苷酸序列探针，其中探针为SEQIDNos:1_13或与SEQIDNos: 1-13互补的序列； (ii)标记有生物素点的DNA序列，序列为SEQID N0.14 ； (iii)带有编码β-球蛋白部分的DNA...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭亮，朱娟娟，谢龙旭，
申请(专利权)人：广州凯普生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44