一种从天冬中提取游离氨基酸的方法技术

本发明专利技术公开了一种从天冬中提取游离氨基酸的方法，该方法包括：将天冬药材去皮后用蒸馏水冲洗干净，烘干粉碎，过滤，称取天冬粉末放入微波消解罐内，按天冬粉末与水的比例1∶15～1∶25加入水后置于微波消解仪内升温提取，过滤提取液后定容，离心取其上清液即得游离氨基酸提取液。将该游离氨基酸提取液于4℃储存，以天冬酰胺药品为对照品，采用茚三酮比色法对该游离氨基酸进行测定。本发明专利技术以水为提取溶剂，采用微波消解提取的方法提取其中游离氨基酸，测得氨基酸的含量大约为5.75%，提取效率高，同时具有简便易行、用料少、提取用时短、提取成本低、环境友好等优点，有利于工业化生产，具有较好的经济效益、社会效益和生态效益。

【技术实现步骤摘要】
一种从天冬中提取游离氨基酸的方法
本专利技术涉及生物
，具体地涉及一种从天冬中提取游离氨基酸的方法。
技术介绍
天冬(RadixAsparagi)为百合科植物天门冬Asparaguscochinchinensis(Lour)Merr的干燥块根，是一种临床常用中药材，主要用于肺燥干咳、顿咳痰粘、骨蒸潮热、腰膝酸痛、咽干口渴、内热消渴、热病津伤、肠燥便秘等病症。天冬主要药理成分有氨基酸类（主要有天冬酰胺、谷氨酸、缬氨酸、苯丙氨酸、瓜氨酸、丝氨酸、苏氨酸、脯氨酸等19种氨基酸）、糖类、螺甾苷类等。天冬历代用野生品药用或制蜜饯食用，国内有多个中药厂都在使用天冬原料生产中成药，并且其需求量呈大幅度增长趋势，使原料极其紧俏。天冬提取物还具有抗肿瘤、抗炎、抗衰老、降血糖等作用。同时现代药理学研究发现氨基酸是作为发挥抗肿瘤、抗病毒、抗衰老等作用的物质基础之一，其中氨基酸是抗病毒、抗肿瘤的有效成分。游离氨基酸的提取方法常用的有超声提取、加热回流提取、浸提法等方法。提取溶剂一般为水、醇、醚等。由于氨基酸是水溶性成分，其在醇或醚中溶解度小于在水中，且醇提法和醚提提在成本及毒性方面均高于水提法，所以采用水提法更好。《天冬中总氨基酸的水提取工艺研究》（甘肃中医学院学报，2003年1期）对天冬中总氨基酸的水提取工艺进行了研究，其主要采用了水浸提法提取氨基酸，在最佳提取工艺条件下测定氨基酸的含量为2.11%，提取率较低，而且提取时间长、用料量大。
技术实现思路
本专利技术针对现有技术的不足，提供一种提取率高、用料少、提取时间短、提取成本低、环境污染小的从天冬中提取游离氨基酸的方法。为实现上述专利技术目的，本专利技术技术方案如下：一种从天冬中提取游离氨基酸的方法，包括烘干粉碎、微波提取、过滤定容、离心和测定工序，具体操作如下：（1）烘干粉碎：将天冬药材去皮后用蒸馏水冲洗干净，沥干水后，烘干，然后切剪成小段，用粉碎机粉碎，过筛，过筛得到天冬粉末备用；（2）微波提取：称取步骤（1）的天冬粉末放入微波消解罐内，加入一定比例的提取溶剂，将微波消解罐固定于防爆保护套中，旋紧盖子后置于微波消解仪内，升温提取，待温度降为室温时，从微波消解仪内取出微波消解罐；（3）过滤定容：过滤提取液，将滤液定容至50ml；（4）离心：将定容后的滤液离心，取其上清液，即得游离氨基酸提取液，将该游离氨基酸提取液于4℃储存，备用；（5）测定：以天冬酰胺药品为对照品，采用茚三酮比色法对该游离氨基酸进行测定。以上步骤（1）中所述的烘干条件是在恒温鼓风干燥箱内，控制烘干温度为40℃～50℃，烘干时间为8h～12h。以上步骤（1）中所述的过筛是将粉碎的天冬经二号筛过筛。以上步骤（2）中所述的提取溶剂为水，所述的一定比例的提取溶剂是天冬粉末与水的比例为1：15～1：25。以上步骤（2）中所述的升温提取是将温度设为50～70℃，控制时间为10～20min。以上步骤（4）中所述的离心控制离心转速为5000r/min～7000r/min，离心时间为10min～15min。与现有技术相比，本专利技术的优点和积极效果如下：1、本专利技术以水为提取溶剂，采用微波消解提取的方法提取其中游离氨基酸，测得氨基酸的含量大约为5.75%，提取效率高，制作简单。2、本专利技术具有简便易行、用料少、提取效率高、提取用时间短、提取成本低、环境友好等优点，有利于工业化生产，具有较好的经济效益、社会效益和生态效益。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术作进一步说明。实施例1：一种从天冬中提取游离氨基酸的方法，1.将天冬药材去皮后用蒸馏水冲洗干净，沥干水后，在烘干温度为40℃的恒温鼓风干燥箱内进行烘干8h，然后切剪成小段，用粉碎机粉碎，过二号筛，过筛得到天冬粉末备用。2.游离氨基酸的提取：（1）精密称取0.2500g天冬粉末放入微波消解罐内，用水作为提取溶剂，并按照天冬粉末与水重量比为1：20的比例向装有天冬粉末的微波消解罐为加入5ml水，将微波消解罐固定于防爆保护套中，旋紧盖子后置于微波消解仪内，升温提取，温度设为50℃，控制时间为15min。待温度降为室温时，从微波消解仪内取出微波消解罐；（2）采用抽滤的方式过滤出提取液，将滤液定至50ml；（3）将定容后的滤液离心，控制离心转速为5000r/min，离心时间为15min，取其上清液，即得游离氨基酸提取液。将该游离氨基酸提取液于4℃储存，备用；以上三个处理按顺序重复三次。3.标准溶液的制备：精密称取0.01000g（精确至0.00001g）的天冬酰胺标准物质，定容于100ml容量瓶中，此溶液质量浓度为0.1mg/ml。4.标准曲线的制备：精密量取0.1mg/ml的天冬酰胺标准溶液0,1.0ml，1.5ml，2.0ml，2.5ml，3.0ml，3.5ml分别置于25ml比色管中，各加水至10ml，再分别加入磷酸盐（pH为8.04）2ml和2%的茚三酮溶液2ml，摇匀，置于沸水中显色15min，取出后立即用冷水冷却至室温，静放5min，定容至25ml，摇匀，再放置15min，于566nm处测定各标准溶液的吸光度A，以试剂空白调零。以吸光度(A)为横坐标，质量浓度(C)为纵坐标进行线性回归。结果表明，天冬素在1～14µg／mL与吸光度呈良好的线性关系。回归方程为C=0.4953A-0.0029，R2=0．9992。5.游离氨基酸的测定：精密量取上述提取上清液（即游离氨基酸提取液）5ml置于25ml比色管中，并加水至10ml，再加入磷酸盐（pH为8.04）2ml和2%的茚三酮溶液2ml，摇匀，置于沸水中显色15min，取出后立即用冷水冷却至室温，静放5min，定容至25ml，摇匀，再放置15min，于566nm处测定其的吸光度（A）。将测定得到的吸光度值代入回归方程，该方法下测得游离氨基酸的含量为5.75%。实施例21.将天冬药材去皮后用蒸馏水冲洗干净，沥干水后，在烘干温度为45℃的恒温鼓风干燥箱内进行烘干9h，然后切剪成小段，用粉碎机粉碎，过二号筛，过筛得到天冬粉末备用。2.游离氨基酸的提取：（1）精密称取0.3334g天冬粉末放入微波消解罐内，用水作为提取溶剂，并按照天冬粉末与水重量比为1：15的比例向装有天冬粉末的微波消解罐为加入5ml水，将微波消解罐固定于防爆保护套中，旋紧盖子后置于微波消解仪内，升温提取，温度设为60℃，控制时间为15min。待温度降为室温时，从微波消解仪内取出微波消解罐；（2）采用抽滤的方式过滤出提取液，将滤液定至50ml；（3）将定容后的滤液离心，控制离心转速为6000r/min，离心时间为12min，取其上清液，即得游离氨基酸提取液。将该游离氨基酸提取液于4℃储存，备用；以上三个处理按顺序重复三次。3.标准溶液的制备同实施例1。4.标准曲线的制备同实施例1。5.游离氨基酸的测定同实施例1，将测定得到的吸光度值代入回归方程，该方法下测得游离氨基酸含量为5.22%。实施例31.将天冬药材去皮后用蒸馏水冲洗干净，沥干水后，在烘干温度为50℃的恒温鼓风干燥箱内进行烘干12h，然后切剪成小段，用粉碎机粉碎，过二号筛，过筛得到天冬粉末备用。2.游离氨基酸的提取：（1）精密称取0.2000g天冬粉末放入微波消解罐内，用水作为提取溶剂，并按照天冬粉末与水重量比为本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种从天冬中提取游离氨基酸的方法，其特征在于：包括烘干粉碎、微波提取、过滤定容、离心和测定工序，具体操作如下：（1）烘干粉碎：将天冬药材去皮后用蒸馏水冲洗干净，沥干水后，烘干，然后切剪成小段，用粉碎机粉碎，过筛，过筛得到天冬粉末备用；（2）微波提取：称取步骤（1）的天冬粉末放入微波消解罐内，加入一定比例的提取溶剂，将微波消解罐固定于防爆保护套中，旋紧盖子后置于微波消解仪内，升温提取，待温度降为室温时，从微波消解仪内取出微波消解罐；（3）过滤定容：过滤提取液，将滤液定容至50ml；（4）离心：将定容后的滤液离心，取其上清液，即得游离氨基酸提取液，将该游离氨基酸提取液于4℃储存，备用；（5）测定：以天冬酰胺药品为对照品，采用茚三酮比色法对该游离氨基酸进行测定。

【技术特征摘要】
1.一种从天冬中提取游离氨基酸的方法，其特征在于：包括烘干粉碎、微波提取、过滤定容、离心和测定工序，具体操作如下：（1）烘干粉碎：将天冬药材去皮后用蒸馏水冲洗干净，沥干水后，烘干，然后切剪成小段，用粉碎机粉碎，过筛，过筛得到天冬粉末备用；（2）微波提取：称取步骤（1）的天冬粉末放入微波消解罐内，加入一定比例的提取溶剂，将微波消解罐固定于防爆保护套中，旋紧盖子后置于微波消解仪内，升温提取，待温度降为室温时，从微波消解仪内取出微波消解罐；所述的提取溶剂为水，所述的一定比例的提取溶剂是天冬粉末与水的比例为1：15～1：25；所述的升温提取是将温度设为50℃～70℃，控制时间为10min～2...

【专利技术属性】
技术研发人员：付金娥，韦树根，柯芳，董青松，谢景千，
申请(专利权)人：广西壮族自治区药用植物园，
类型：发明
国别省市：广西;45