与磷脂酰乙醇胺结合的肽及其治疗病毒感染和癌症的用途制造技术

本发明专利技术涉及与阴离子磷脂和氨基磷脂结合的选定抗体和耐久霉素肽以及它们在治疗病毒感染和癌症中的用途。本发明专利技术公开了关于阴离子磷脂和氨基磷脂在肿瘤血管结构和病毒入侵及传播中的作用的惊人发现，以及将这些发现用于治疗癌症和病毒感染的组合物和方法。本发明专利技术还公开了可结婚并抑制阴离子磷脂和氨基磷脂的有益抗体、免疫缀合物和基于耐久霉素的组合物和联合，可用于安全有效的治疗癌症、病毒感染和相关疾病。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
与阴离子磷脂和氨基磷脂结合的选定抗体及其治疗和诊断用途专利技术背景本申请要求于2002年7月15日提交的、系列号为60/396263的共同待审美国临时申请的优先权，该文件的公布内容，包括说明书、权利要求、附图和序列在此都特别收编作为参考而并未放弃。1.专利
本专利技术涉及氨基磷脂和阴离子磷脂生物学、肿瘤血管和病毒感染领域。它提供了惊人的新组合物、方法和组合，可用于肿瘤血管的靶向和癌症治疗、抑制病毒侵入和扩散以及治疗病毒感染。本专利技术另外还提供了许多结合并抑制氨基磷脂和阴离子磷脂的优选抗体、免疫缀合物和基于耐久霉素的组合物，可用于治疗癌症、病毒感染和有关疾病。2.相关领域描述肿瘤细胞对化疗剂的抗性在临床肿瘤学中是一个重要问题。在肿瘤治疗中要解决的另一主要问题是期望“全部细胞杀死”，即，杀死所有能不受控生长并取代通过治疗可去除的任何肿瘤块的所谓“克隆源性”恶性细胞。尽管在此领域内有了一定的进展，但这仍是为何许多普遍形式的人类癌症依然耐受有效的化学治疗干预的两个主要原因。对于开发接近全部细胞被杀死的疗法这一目的而言，某些类型的肿瘤比其它类型更易受治疗的影响。例如，淋巴瘤等软组织肿瘤和白血病等血液和血液形成器官的肿瘤通常比癌瘤等实体瘤对化学疗法更有反应性。软组织肿瘤和以血液为基础的肿瘤对化学疗法的易感性的一个原因是淋巴瘤和白血病细胞更易于接受化学疗法干预。简而言之，大部分化疗剂到达实体瘤块的所有细胞比到达软组织肿瘤和以血液为组织的肿瘤的所有细胞要难得多，因此完成全部细胞杀死也要困难得多。增加化疗剂的剂量大部分情况下常常会导致毒副作用，这通常限制了常规抗肿瘤剂的效力。另一肿瘤治疗方法是使用“免疫毒素”，其中用抗肿瘤细胞抗体将毒素投递至肿瘤细胞。不过，和化学治疗方法一样，免疫毒素疗法在应用于实体瘤时也存在着重要的缺点。例如，抗原阴性或抗原缺乏的细胞能继续存活并再生成肿瘤或导致进一步的转移。实体瘤对基于抗体的疗法有耐受性的另一原因是肿瘤块对于抗体和免疫毒素等大分子剂来说通常是不能通过的。肿瘤内的物理扩散距离和间质压力都造成了对此类型疗法的限制。改良的治疗方法是靶向于实体瘤的血管结构。靶向于肿瘤血管而非肿瘤细胞本身具有一定的优越之处，即这不太可能导致抗性肿瘤细胞的发生，而且被靶向的细胞容易接近。此外，血管的破坏导致了抗肿瘤效果的扩大，因为许多肿瘤细胞依赖单一血管来提供其氧气和养分。例示性的血管靶向剂(VTAs)如美国专利5855866、5965132、6261535、6051230和6451312中所述，这些文献描述了抗细胞剂和毒素向肿瘤血管结构标记物的靶向投递。另一有效的血管靶向方案是将凝血因子靶向于肿瘤血管结构或基质中表达或吸附的标记物(Huang等，1997；美国专利申请6093399、6004555、5877289和6036955)。将凝血剂而非毒素投递至肿瘤血管结构具有另外的优越之处，即降低了免疫原性，甚至减少了产生毒副作用的风险。如美国专利5877289中所述，用于所说的肿瘤特异性“凝血配体”中的优选凝固因子是截短形式的人凝血诱导蛋白质，组织因子(TF)，即血液凝结的主要起始因子。最近，氨基磷脂磷脂酰丝氨酸(PS)和磷脂酰乙醇胺(PE)被确定为肿瘤血管结构的特殊标记(Ran等，1998)。这引起了对用于投递抗细胞剂、毒素和凝血因子至肿瘤血管的新型抗PS和抗PE免疫缀合物的开发(美国专利6312694)。此外，还发现未缀合的抗PS和PE抗体无需与治疗剂附着就可发挥抗癌作用，这已知为针对肿瘤血管靶向和治疗的氨基磷脂“裸抗体”方法(美国专利6406693)。尽管前述免疫缀合物和氨基磷脂血管靶向方法代表了肿瘤治疗中的重大进展，但某些外周肿瘤细胞在这些疗法所造成的普遍肿瘤破坏当中仍能幸存。因此考虑将抗血管发生的方法与美国专利5855866、6093399、6312694和6406693中的VTA、凝血配体和氨基磷脂靶向方法结合使用，前者抑制了从原先存在的血管和/或循环内皮干细胞中发展出新的血管结构。血管发生不仅在胚胎发生、伤口愈合和月经等生理学过程中起着重要的作用，还涉及肿瘤生长、关节炎、牛皮癣和糖尿病性视网膜病等病理活动(Ferrara，1995)。应用于肿瘤治疗中时，抗血管发生的方法是以抑制开始发生的血管的增殖(通常在实体瘤的外围)为基础的。这些疗法通常用于在较常规的干预治疗(如外科手术或化疗)后降低实体微小转移的风险或抑制实体瘤的进一步生长。美国专利6342219、6524583、6342221和6416758描述了与血管发生的一种主要刺激物血管内皮生长因子-A(VEGF，以前已知为血管渗透因子VPF)结合的抗体和免疫缀合物。这些抗体具有只抑制VEGF与两个主要VEGF受体中的一个结合的重要优势。通过阻断VEGF与VEGF2而非VEGF1的结合，这些抗体在提高安全性的同时，保持了例如巨噬细胞、破骨细胞和破软骨细胞功能中由VEGFR1所介导的有利功效。尽管前述方法促进了肿瘤治疗领域的发展，仍然需要开发另外的或可选择的血管靶向疗法。为了扩大治疗选择的数目，需要鉴定肿瘤血管结构的新标记。具有抗癌特性的新的裸抗体的开发会是一个尤其重要的进展，因为它允许相同的靶向部分既作为单一治疗剂也作为血管靶向剂用于投递其它的药物。在同一分子内具有抗血管发生和抗血管，即肿瘤破坏性特征的治疗剂是很有价值的。更重要的进展将是在其它系统中具有抗癌特性和治疗作用的治疗剂的确定。开发既能治疗癌症又能治疗病毒感染(这是此阶段最重要的医学疑症中的两种)的制剂应是一个引人注目的重要突破。专利技术简述本专利技术通过提供新方法和组合物用于安全有效的肿瘤血管靶向、抗血管发生和破坏肿瘤来致力于解决现有技术中的前述需要及其它需要，所说的方法和组合物对于抑制病毒入侵和扩散以及治疗病毒感染和疾病也出乎意料地非常有效。本专利技术在某种程度上基于的是关于肿瘤血管结构中阴离子磷脂的表达和作用以及病毒入侵和扩散中氨基磷脂和阴离子磷脂的参与这些惊人发现。本专利技术另外还提供了结合氨基磷脂和阴离子磷脂的特别有效的抗体和免疫缀合物，以及与磷脂酰乙醇胺结合的以肽为基础的一类新型衍生物。综述：在第一个全面的实施方案中，本专利技术根据下述意外的发现，即诸如磷脂酰肌醇(PI)、磷脂酸(PA)和磷脂酰甘油(PG)(以及磷脂酰丝氨酸PS)等的阴离子磷脂是肿瘤血管结构上的易接近且可稳定靶向的标记物，提供了用于肿瘤血管靶向、肿瘤成像和治疗的新方法。此实施方案起因于抗PA、PI、PG和其它阴离子磷脂组分的抗体特异地定位于实体瘤的血管结构的意外发现。本实施方案的其它方面源自另一意外发现，即，在缺乏与毒素或凝血剂等效应分子缀合的的情况下，抗PA、PI和PG(以及PS)等阴离子磷脂的裸抗体可特异性抑制体内肿瘤血管发生并诱发血管结构的毁坏和肿瘤坏死。本专利技术因此提供了利用结合阴离子磷脂的单一组分且基于抗体的治疗剂进行血管靶向、抗肿瘤发生和肿瘤治疗的安全有效的方法。本专利技术的根本不寻常的特征是，至少在很大程度上，阴离子磷脂向肿瘤血管内皮细胞表面的转位与细胞损伤和细胞凋亡或其它细胞死亡机制无关。因此肿瘤血管结构中阴离子磷脂的表达不是细胞死亡和毁坏的结果或触发物，而是发生于形态完整的血管内皮细胞中。这意味着肿瘤血管结构中阴本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种包含基本上细胞不透性磷脂酰乙醇胺(PE)‑结合肽的组合物，其中所述基本上细胞不透性PE‑结合肽包含可操作性地连接了细胞不透性基团的PE结合羊毛硫抗生素肽。

【技术特征摘要】
2002.07.15 US 60/396,2631.纯化的抗体、其抗原结合片段或其免疫缀合物，所述抗体是保藏号为ATCCPTA4545的单克隆抗体3G4，或包含可操作性地连接于人抗体恒定区的单克隆抗体3G4的抗原结合区的嵌合抗体。2.根据权利要求1所述的抗体、抗原结合片段或免疫缀合物，其中，所述抗体是所述包含可操作性地连接于人抗体恒定区的单克隆抗体3G4的抗原结合区的嵌合抗体。3.根据权利要求1所述的抗体、抗原结合片段或免疫缀合物，其中，所述抗体是双特异性抗体、重组抗体或基因工程化抗体，或者其抗原结合片段。4.根据权利要求1所述的抗体、抗原结合片段或免疫缀合物，其中，所述抗体是scFv、Fv、Fab’、Fab、Fab二聚体、二体、线性抗体或抗体的F(ab’)2抗原结合片段或者CDR、单价片段，骆驼源化或单一结构域抗体。5.根据权利要求1至4中任一项所述的抗体、抗原结合片段或免疫缀合物，其中，所述抗体或其抗原结合片段可操作性地连接于生物学药剂。6.根据权利要求5所述的抗体、抗原结合片段或免疫缀合物，其中，所述抗体或其抗原结合片段可操作性地连接于治疗剂或诊断剂。7.根据权利要求6所述的抗体、抗原结合片段或免疫缀合物，其中，所述抗体或其抗原结合片段可操作性连接于体内诊断剂，所述体内诊断剂是利用非侵入式成像可检测的。8.根据权利要求6所述的抗体、抗原结合片段或免疫缀合物，其中，所述抗体或其抗原结合片段可操作性地连接于细胞毒素、化疗剂、放疗剂、类固醇、抗代谢物、抗生素、细胞因子或凝血剂。9.根据权利要求8所述的抗体、抗原结合片段或免疫缀合物，其中，所述抗体或其抗原结合片段可操作性地连接于抗血管发生剂、凋亡诱导剂、抗微管蛋白药或烷化剂。10.根据权利要求9所述的抗体、抗原结合片段或免疫缀合物，其中，所述抗体或其抗原结合片段可操作性地连接于考布司汀。11.包含权利要求1至10中任一项所述的抗体、其抗原结合片段或其免疫缀合物的组合物。12.根据权利要求11所述的组合物，其中，所述组合物是药学上可接受的组合物。13.根据权利要求12所述的组合物，其中，所述组合物是气雾组合物。14.根据权利要求12所述的组合物，其中，所述组合物是脂质体或纳米颗粒组合...

【专利技术属性】
技术研发人员：P·E·索普，M·M·苏亚雷斯，黄贤明，何进，S·兰，
申请(专利权)人：得克萨斯大学体系董事会，
类型：发明
国别省市：美国;US