一株具有抑菌活性的变色曲霉，涉及一株变色曲霉。本发明专利技术提供一株变色曲霉，对枯草芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌等细菌有较好的抑制作用，为开发新的抗菌药物及食品防腐剂提供依据。本发明专利技术具有抑菌活性的变色曲霉为变色曲霉CWJ2，保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏日期为2014年4月16日，保藏编号为CCTCC NO：M2014130。本发明专利技术变色曲霉CWJ2对枯草芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌等细菌具有较强的抑制作用。
【技术实现步骤摘要】
一株具有抑菌活性的变色曲霉
[0001 ] 本专利技术涉及一株变色曲霉。
技术介绍
作为一类重要的微生物资源，植物内生菌已经成为研究的热点，其在植物组织器官中分布广泛，是极具代谢多样性的微生物菌群。自科学家Fleming发现第一种抗生素-青霉素以来，抗生素的发现与应用成功地防治了微生物引起的疾病感染。但是，近年来，随着青霉素、头孢菌素等广谱抗生素的广泛应用，各种抗生素不断更新换代，以及临床上存在不合理使用抗生素，导致微生物的抗药性不断增强，耐药菌株的出现限制了现有抗生素的临床效果，要解决这一问题，最有效的办法就是加大力度，筛选开发新型的抗生素。由于传统研究方法重复发现天然抗菌活性产物的机率不断增加，从普通环境来源的微生物中分离新的抗菌活性物质日 益困难。因此，研究者们逐渐将目光投向了研究相对较少植物内生菌。研究表明，药用植物内生真菌是新型抗菌药物的微生物来源，其中很多已经在社会多领域内产生了巨大的经济价值。
技术实现思路
本专利技术提供一株变色曲霉，对枯草芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌等细菌有较好的抑制作用，为开发新的抗菌药物及食品防腐剂提供依据。本专利技术具有抑菌活性的变色曲霉为变色曲霉CWJ2Aspergillus versicolor CffJ2,保藏在中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏地址是武汉市武汉大学，保藏日期为2014年4月16日，保藏编号为CCTCCNO:M2014130o本专利技术变色曲霉CWJ2属于丝抱菌科(Hyohomycetaceae)曲霉属(Aspergillus)变色曲霉(Aspergillus versicolor) ?本专利技术变色曲霉CWJ2在PDA固体培养基上培养5天后，质地丝绒状；具大量的分生孢子结构，绿色，边缘白色；无渗出液；有轻霉味；菌落反面呈不同程度的微黄到橘色。变色曲霉CWJ2的分生孢子梗顶端膨大成为顶囊，呈球形。顶囊表面长满辐射状小梗。本专利技术变色曲霉CWJ2可在PDA培养基上生长，最适生长温度为28 °C。本专利技术变色曲霉CWJ2对枯草芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、粪肠球菌、屎肠球菌、单增李斯特菌、酿脓链球菌、大肠杆菌、铜绿假单孢菌和肺炎克雷伯菌具有较强的抑制作用，具有较好的开发应用价值，为新型抑菌活性物质的筛选提供参考。本专利技术变色曲霉CWJ2属于曲霉属(Aspergillus)，保藏在中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏地址是武汉市武汉大学，保藏日期为2014年4月16日，保藏编号为CCTCCNO:M2014130o【附图说明】图1为本专利技术变色曲霉CWJ2的菌落形态照片；图2为本专利技术变色曲霉CWJ2的孢子形态照片；图3为本专利技术变色曲霉CWJ2和相近菌株进行同源性比对构建的系统发育树。【具体实施方式】本专利技术技术方案不局限于以下所列举【具体实施方式】，还包括各【具体实施方式】间的任意组合。【具体实施方式】一:本实施方式具有抑菌活性的变色曲霉为变色曲霉(Aspergillusversicolor) CWJ2，保藏在中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏地址是武汉市武汉大学，保藏日期为2014年4月16日，保藏编号为CCTCCNO:M2014130。本实施方式变色曲霉CWJ2在PDA固体培养基上培养5天后，质地丝绒状；具大量的分生孢子结构，绿色，边缘白色(如图1);无渗出液；有轻霉味；菌落反面呈不同程度的微黄到橘色。变色曲霉CWJ2的分生孢子梗顶端膨大成为顶囊，呈球形(如图2)。顶囊表面长满福射状小梗。本实施方式变色曲霉CWJ2可在PDA培养基上生长，最适生长温度为28°C。【具体实施方式】二:本实施方式变色曲霉(Aspergillus versicolor)CWJ2由中国黑龙江省帽儿山地区健康的刺五加植株中筛选得到。筛选按以下步骤进行:选取健康的刺五加根用自来水冲洗干净后，以无菌滤纸吸干水分，切成Icm小段，按以下无菌操作程序对其进行表面消毒:体积浓度75%的 酒精漂洗Imin—体积浓度10%的双氧水漂洗15min—体积浓度75%的酒精漂洗Imin—无菌水冲洗3次。将消毒后的实验材料置于PDA固体培养基中，于28°C恒温培养箱中，培养10~15天，待实验材料周围长出菌丝，挑取菌丝转入平板(PDA固体培养基)多次划线分离纯化，将纯化后的菌株置于斜面培养基(PDA固体培养基)中，4°C保存。为了检查表面消毒是否彻底，取最后一次无菌水冲洗液涂布培养平板(PDA固体培养基)作对照，另将消毒后的实验材料在培养平板上滚动一周作对照，于相同的条件下培养，结果对照平板无任何菌长出，多次重复均如此，证明所分到的菌是植物内生菌，而不是表面的附生菌。获得的纯化后的菌株即为变色曲霉CWJ2。PDA培养基(1000mL)由200g马铃薯、20g蔗糖和余量的蒸馏水组成。PDA固体培养基(1000mL)由200g马铃薯、20g蔗糖、16g琼脂粉和余量的蒸馏水组成。对分离纯化得到的变色曲霉CWJ2进行分子生物学鉴定，按以下步骤进行:提取菌株的总DNA，采用真菌通用引物NS1、NS6扩增18SrDNA片段，PCR产物纯化后进行测序，其序列如SEQIDN0:1所示，将测序结果在NCBI数据库中应用BLAST分析进行同源性比较，然后通过应用软件MEGA6.0构建系统发育树(如图3所示)，与曲霉属菌株的同源性都达到了 99%以上，通过结合菌体形态特征、生长条件确定变色曲霉CWJ2属于曲霉属(Aspergillus)。NSl:GTAGTCATATGCTTGTCTCNS6: GCATCACAGACCTGTTATTGCCTC以下对本实施方式变色曲霉CWJ2及其发酵液进行抑菌活性测定，具体步骤如下:1、发酵液的制备:将变色曲霉CWJ2接种于50mLPDA培养基中，作3个重复，置于280C 120r/min空气浴摇床中，培养10天取出，在无菌条件下依次用8层无菌纱布和无菌滤纸过滤，收集过滤液作为发酵液，备用；取PDA培养基同法制成阴性对照样品。2、含供试细菌平板的制备:将11株供试细菌活化2~3次后，接种于斜面培养基(牛肉膏蛋白胨琼脂培养基)上，于37°C恒温培养箱中培养I~2天，用血球计数板计数法，在每种供试细菌的斜面试管中加入5mL生理盐水中，充分振荡摇匀后，滴一滴放在血球计数板载玻片与盖玻片之间的计数室中，在显微镜下进行计数，然后稀释到菌体浓度为IX 107CFU/mL，得到11株供试细菌的菌悬液；再按每IOOmL培养基中加入ImL菌悬液的比例向50°C左右的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基中加入菌悬液，混匀后，迅速的分装到灭菌后的空平板中，冷却，制成含菌平板，备用。同法，取活化2-3次供试真菌一白假丝酵母菌，接种于斜面培养基(PDA固体培养基)上，在28°C培养箱内培养l-2d，用血细胞计数板计数法，在供试真菌的斜面培养基试管中分别加入5mL生理盐水，充分振荡摇匀，取一滴滴于血细胞计数板载玻片与盖玻片之间的计数室中，在显微镜下进行计数，然后稀释到菌体浓度为I X 107CFU/mL,得到供试真菌的菌悬液；将菌悬液按每IOOmL培养基中加入ImL菌悬液的比例加入到50°C左右的PDA固体培养基中，混匀后，迅速的分装到灭菌后的空平板中，冷却，制成含菌平板，备用。所述11株供试细本文档来自技高网...
【技术保护点】
一株具有抑菌活性的变色曲霉，其特征在于该菌株为变色曲霉(Aspergillus versicolor)CWJ2，保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏地址是武汉市武汉大学，保藏日期为2014年4月16日，保藏编号为CCTCCNO：M2014130。
【技术特征摘要】
1.一株具有抑菌活性的变色曲霉，其特征在于该菌株为变色曲霉(Aspergillusversicolor) CffJ2,保藏在中...
【专利技术属性】
技术研发人员：郑春英，郭晓璐，崔宇，徐慧超，
申请(专利权)人：黑龙江大学，
类型：发明
国别省市：黑龙江;23
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。