一种提高动物窝产仔数的方法技术

本发明专利技术公开了一种提高动物窝产仔数的方法，本发明专利技术证明转FSHR基因小鼠的窝产仔数高于非转基因小鼠。本发明专利技术公开的一种提高动物窝产仔数的方法，包括如下步骤：将FSHR基因插入动物染色体，经鉴定得到转FSHR基因动物，与非转基因动物相比，转FSHR基因动物的窝产仔数提高。FSHR基因能促进小鼠窝产仔数的提高。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及，属于生物
。
技术介绍
卵泡刺激素(Follicle Stimulating Hormone, FSH) 一般功能是促进雌性卵泡发育、产生雌激素；或调控雄性支持细胞和生精作用。由于FSH为生物大分子，不能透过细胞膜，因此必须借助细胞膜上的特异性受体-促卵泡素受体(Follicle stimulatinghormone receptor, FSHR)通过cAMP通路介导发挥功能。FSH信号通过FSHR作用于卵巢组织后，可发生颗粒细胞增生、内膜细胞分化、卵泡液形成、卵泡腔扩大等一系列生理反应，发挥其促进卵泡生长的生物学功能。而超数排卵就是在高浓度的FSH作用下，有适当的黄体生成素(Luteinizing Hormone, LH)协同下实现的。FSH对于雌性哺乳动物正常的青春期启动和雌性生育是必需的，尤其是对窦状卵泡之外的卵泡发育非常重要。在卵泡逐渐变大成为有腔卵泡的过程中，FSH均有维持作用。FSH和FSHR数目增加后，小窦状卵泡中环状cAMP分泌量累积，芳香化酶被激活，诱导LH受体形成，从而促进卵泡的进一步成熟和排卵。对于雄性动物，FSH的作用主要是促进精子发生，同时对正常雄激素合成过程是必需的。FSH可以通过活化位于支持细胞膜上的FSHR受体来调控生殖细胞的有丝分裂和初级精母细胞的减数分裂，刺激曲细精管上皮和次级精母细胞发育，与LH和雄激素协同作用，促进精子成熟与释放。FSH在调控精子数目上有重要作用，通过体内的凋亡通路抑制精子细胞凋亡。近年研究发现FSHR的多态性与FSHii亚基的多态性结合在一起能更大程度的影响雄性生育力。研究表明:FSHR发生过表达后，男性的生殖活动不受影响，女性可能出现卵巢过度刺激症。FSHii亚基突变可引起精子缺乏，而FSHR突变或敲除的小鼠会影响睾丸功能，但是该小鼠是完全可育的。FSHR-/-雌鼠表现为子宫发育不全，卵泡成熟过程受损，缺少成熟卵泡，小鼠子宫、卵巢和阴道重均低于杂合子及野生型。FSHR+/-小鼠的窝产仔数减少50%，同时妊娠时间延长；后代窝产仔数只有野生型的35% -50%。然而，与野生型小鼠相t匕，转FSHR基因母鼠的窝产仔数未见报道。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供，本专利技术证明转FSHR基因小鼠的窝产仔数高于非转基因小鼠。本专利技术提供，包括如下步骤:将FSHR基因插入动物染色体，经鉴定得到转FSHR基因动物，与非转基因动物相比，转FSHR基因动物的窝产仔数提闻。上述方法中，所述转FSHR基因动物是将含有FSHR基因的DNA片段通过显微注射的方法导入得到该动物的受精卵中得到的； 所述含有FSHR基因的DNA片段含有抗缪勒氏管激素的启动子序列、FSHR基因序列和终止子序列；所述抗缪勒氏管激素的启动子序列如SEQ ID N0.1中自5’末端起第696位至第4213位核苷酸所示。上述任一所述的方法中，所述FSHR基因序列如SEQ ID N0.1中自5’末端起第4214位至第6302位核苷酸所示。上述任一所述的方法中，所述终止子序列如SEQ ID N0.1中自5’末端起第6303位至第6527位核苷酸所示。上述任一所述的方法中，所述含有FSHR基因的DNA片段如SEQ ID N0.1中自5’末端起第691位至第6528位核苷酸所示；或，所述含有FSHR基因的DNA片段如SEQ ID N0.1中自5’末端起第696位至第6527位核苷酸所示；所述动物为小鼠；所述小鼠具体为母鼠。SEQ ID N0.1中自5’末端起第4214位至第6302位核苷酸所示的DNA分子在提高动物窝产仔数中的 应用也属于本专利技术的保护范围。SEQ ID N0.1中自5’末端起第691位至第6528位核苷酸所示的DNA分子在提高动物窝产仔数中的应用也属于本专利技术的保护范围；或，SEQ ID N0.1中自5’末端起第696位至第6527位核苷酸所示的DNA分子在提高动物窝产仔数中的应用也属于本专利技术的保护范围；或，SEQ ID N0.1中自5’末端起第696位至第6302位核苷酸所示的DNA分子在提高动物窝产仔数中的应用也属于本专利技术的保护范围。上述任一所述的应用中,所述动物为小鼠；所述小鼠具体为母鼠。一种提高动物窝产仔数的表达盒也属于本专利技术的保护范围，为如下(I)或(2)所示的DNA分子:(I) SEQ ID N0.1中自5’末端起第691位至第6528位核苷酸所示的DNA分子；(2) SEQ ID N0.1中自5’末端起第696位至第6527位核苷酸所示的DNA分子。所述动物具体为小鼠。SEQ ID N0.1中自5’末端起第696位至第6302位核苷酸所示的DNA分子也属于本专利技术的保护范围。FSHR基因能促进小鼠窝产仔数的提高。【附图说明】图1 为 pGH_A1366Gn 质粒。图2为目的序列示意图。图3为转FSHR基因小鼠的PCR鉴定。图4为转FSHR基因小鼠的Southern blot鉴定。图5为转FSHR基因小鼠的Genome Walking分析。图6为第2号小鼠目的序列插入染色体的位置分析。图7为第16号小鼠目的序列插入染色体的位置分析。图8为第33号小鼠目的序列插入染色体的位置分析。【具体实施方式】下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。[0041 ] DNA组织提取缓冲液:由溶剂和溶质组成，溶剂为50mM pH8.0的Tris-HCl缓冲液，溶质为EDTA、NaCl和SDS ;所述EDTA在所述DNA组织提取缓冲液中的浓度为IOOmM,所述NaCl在所述DNA组织提取缓冲液中的浓度为IOOmM,所述SDS在所述DNA组织提取缓冲液中的浓度为10mg/ml。RNaseA 购自 Sigma 公司。 RNase溶液按照如下方法配制:将RNaseA按照体积比1:100的比例溶于蒸馏水中，分装至1.5mL离心管中，-20°C保存。蛋白酶K溶液按照如下方法配制:将蛋白酶K用水配成20mg/ml，_20°C保存。NaAc (3M, pH5.2)按照如下方法配制:将 408.1g 的 NaAc.3Η20 溶于 800mL 的 ddH20中，用冰乙酸将pH调至5.2后，用ddH20定容至1L，高压灭菌。中和液(ρΗ9.5)按照如下方法配制:TRISBase60.57g(0.5Μ)，NaC187.675g(l.5M)，溶于ddH20中，然后用HCl将pH调至9.5后，用ddH20定容至1L，灭菌。Washing buffer (pH7.5)按照如下方法配制:马来酸 11.607g(0.1M),NaC18.768g(0.15M)，然后用NaOH的水溶液将pH调至7.5后，用ddH20定容至1L，灭菌，再加入 0.3g/100ml 的 Tween20 水溶液 3mL。Maleic acid buffer (pH7.5)按照如下方法配制:马来酸 11.607g(0.1 Μ)，NaC18.768g(0.15M)，然后用NaOH的水溶液将pH调至7.5后，用ddH20定容至1L，灭菌。Detection buffer (pH9.5)按照如下方法配制:TRIS Basel2.114g(0.1M),本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种提高动物窝产仔数的方法，包括如下步骤：将FSHR基因插入动物染色体，经鉴定得到转FSHR基因动物，与非转基因动物相比，转FSHR基因动物的窝产仔数提高。

【技术特征摘要】
1.一种提高动物窝产仔数的方法，包括如下步骤:将FSHR基因插入动物染色体，经鉴定得到转FSHR基因动物，与非转基因动物相比，转FSHR基因动物的窝产仔数提高。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于:所述转FSHR基因动物是将含有FSHR基因的DNA片段通过显微注射的方法导入得到该动物的受精卵中得到的； 所述含有FSHR基因的DNA片段含有抗缪勒氏管激素的启动子序列、FSHR基因序列和终止子序列； 所述抗缪勒氏管激素的启动子序列如SEQ ID N0.1中自5’末端起第696位至第4213位核苷酸所示。3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于:所述FSHR基因序列如SEQID N0.1中自5’末端起第4214位至第6302位核苷酸所示。4.根据权利要求1-3任一所述的方法，其特征在于:所述终止子序列如SEQID N0.1中自5’末端起第6303位至第6527位核苷酸所示。5.根据权利要求1-4任一所述的方法，其特征在于:所述含有FSHR基因的DNA片段如SEQ ID N0.1中自5’末端起第691位至第6528位核苷酸所示； 或， 所述含有FSHR基因的DNA片段如SE...

【专利技术属性】
技术研发人员：储明星，狄冉，刘秋月，王耀武，杨志敏，金慧慧，
申请(专利权)人：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所，
类型：发明
国别省市：北京;11