本发明专利技术涉及基因工程领域，具体地，本发明专利技术涉及一种中低温中性单宁酶TanXZ7及其基因和应用，其氨基酸碱基序列如SEQ ID NO.1所示。本发明专利技术的单宁酶TanXZ7最适pH为6.0，在pH3.0～8.0稳定性较好；最适温度为40℃,在25-60℃范围内具有较高的酶活力，且在40℃稳定性好；其中低温中性特性，可使其在食品工业生产上应用。
【技术实现步骤摘要】
—种中低温中性单宁酶TanXZ7及其基因和应用
本专利技术涉及基因工程领域，具体地，本专利技术涉及一种中低温中性单宁酶TanXZ7及其基因和应用。
技术介绍
单宁广泛分布于植物体内，包括根，木材，树皮，水果和叶部。作为植物体内的主要次级代谢产物，单宁的含量仅低于纤维素，半纤维素和木质素。根据其化学结构，可分为可水解的桔酸单宁和鞣花单宁和相对稳定的由聚黄烷醇类多酚或原花色素(即羟基黄烷醇类单体)组成的缩合鞣质单宁。单宁含有大量的苯环和酚羟基，易与金属鏊和，形成更大的多聚体，且可与多糖和蛋白结合产生收敛和沉降的效果。在食品和动物饲料方面，单宁是抗营养因子之一，可以引起茶，饮料，咖啡，酒水等的混浊。而含有单宁的工业废水也难以降解，导致水质富营养化从而严重破坏生态环境。而另一方面，作为单宁主要水解产物的没食子酸是一种附加值高，市场前景广阔的医药原料，具有抗癌和抗生素的活性。因此对单宁的有效利用和深层开发已成为目前国内外的研究热点。单宁酶的研究始于1780年，主要来源于植物、动物和微生物。植物来源的单宁酶可以从含单宁丰富的水果、叶子、枝干和树皮中获得；动物来源的单宁酶可以从动物肠道和瘤胃粘液中提取；微生物来源的单宁酶主要是从细菌和真菌中获得。由于单宁酶的广泛应用潜力，在动物饲料中可以有效破坏单宁-多糖/蛋白质大分子复合物中的共价交联，降低食糜的粘度，改善饲料性 能，降低因粘度增加而引起的抗营养作用；在食品方面起到澄清和改善风味的效果；是抗癌药物和抗生素的主要成份；同时可以改善废水中单宁的有效降解，因此越来越受到人们的关注。微生物来源的单宁酶有很长的研究历史，但进展缓慢，目前已报道了 58株可以产单宁酶的真菌/细菌，25个单宁酶做过性质研究，只有3个单宁酶实现了异源表达，I个完成了结构解析。单宁酶的最适PH值在偏酸和中性范围内，极少数细菌单宁酶在碱性条件下有活性，最适温度在20-60°C之间。食品生产过程中为了不破坏营养，需在中低温中性条件下利用单宁酶处理，破坏单宁的酯键，从而澄清果汁饮料和茶饮品等。因此，所需的单宁酶需要在中性PH和中温条件下具有高活性。本专利技术中TanXZ7最适pH6.0，在pH5.0 - 7.0之间有60%以上的酶活力；最适温度40°C，在25-60°C具有80%以上的酶活力。该酶具有在低温条件下高活力的特点，符合在食品工业中尤其果汁饮料和茶饮品低温处理的工业要求。另外，在饲料、医药和废水处理等领域具有潜在的应用价值。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种中低温中性单宁酶。本专利技术的再一目的是提供编码上述中低温中性单宁酶的基因。本专利技术的另一目的是提供包含上述基因的重组载体。本专利技术的另一目的是提供包含上述基因的重组菌株。本专利技术的另一目的是提供一种制备上述中低温中性单宁酶的基因工程方法。本专利技术从梭孢菌(Thielavia subthermophila XZ7)中分离得到一种新的中低温中性单宁酶TanXZ7。本专利技术提供了一种中低温中性单宁酶TanXZ7，其氨基酸序列如SEQ ID N0.1所示。SEQ ID N0.1:MPSWLKLTAKALSLSDVCTVSNVQAALPSNGTLLGLNLIPSSVTATMTNSSTSGGMGGGMPMMKRQSSSTQYCAVTVTYTHPGQGDEVNLKYAFPSPSEFKNRFYVGGGGGFSLSSSATGGLSYGAAGGATDAGYDAFDQSYDQVVLYGNGSINWYATHMFGYQALGEMTKIGKYITKGFYGLSNDTKVYTYFEGCSDGGREGMSQVQRWGDEYDGVIAGAPAFRFAQQQVHHVFSSAVEKTLGYLPPPCELDTIVNATIKGCDKLDGREDGVISRTDLCKLNFNMKSIIGQSYYCAEKNSTSLGFGFQKRQQTSGSTTSYQPAQKGTVTKEGVAVAQAIYDGLHNTAGERAYLSWQIGSQLSDANPTYSSESGEWEPNIPSTGGEYVTKFIQLLDLDNLSDLDGVTYDTLVEWMTIGMYRYLDSLQTTLPDLTTFKSSGGKLLHYHGESDPSIPSASSVHYWQSVRSVMYPDVADDKALKDMAKWYQFYLVPGAGHCGSNSLQPGPYPQNNMDIMIDWVENGVQPTRLNATVSS⑶YSGETQMLCQWPTRPLWKKANSFECMTDKKSIEAWTYDFPAFKVPVY其中，该酶包括 584个氨基酸，N端无信号肽序列。因此，成熟的中低温中性单宁酶TanXZ7的理论分子量为66.4kDa。本专利技术的单宁酶TanXZ7同时具有好的酸碱低高温适应性而在常温下在酸性的范围内均具有高活性等特性。本专利技术的单宁酶，其最适PH值为6.0，在pH3.0-8.0的范围内稳定；最适温度为40°C，40°C处理Ih酶活基本保持不变，50°C处理Ih后仍可剩余30%以上的酶活。本专利技术提供了编码上述中低温中性单宁酶tanXZ7。具体地，该基因的基因组序列如 SEQ ID N0.2 所示:atgccctcctggctcaagctcaccgccaaagccctgtctctgagcgacgtctgcaccgtatcaaacgtgcaggctgcattgccctccaatggcactctgttgggtctcaatctcattccgtcctctgtcacagccacgatgaccaattcctccaccagtggcggcatgggcggcggcatgccaatgatgaaaagacagtcttcctctacccaatactgcgctgtcaccgtcacatatacgcaccctggccagggcgacgaggtcaatctaaagtacgcttttccgagcccttcggaattcaagaaccgtttctatgtcggcggtggaggcggtttctccctctcgtcgtctgccacgggaggtctcagctatggtgccgccggcggggccaccgatgctggatacgacgccttcgaccagtcgtacgaccaggtcgtcctttatggcaacggatccatcaactggtatgccacccacatgttcggctaccaagcactgggcgagatggtagcgagttggagttactactgtgttggaaccatcaggaagaaagatggctgacgtcgttggcagaccaagatcggaaagtacatcaccaagggattctacggactctccaacgacaccaaggtctacacgtacttcgagggctgctctgacggtggacgcgagggcatgagccaggttcagcgctggggcgacgagtacgacggtgtcattgcaggcgccccggccttccgctttgcccagcagcaagtccaccacgtcttctcctccgcagtggaaaaaactctcggctatctcccgcccccctgcgagctcgatacgattgtcaacgccacaatcaagggctgcgataagctcgatggacgcgaggacggcgtca本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种中温中性单宁酶TanXZ7，其特征在于，其氨基酸碱基序列如SEQ ID NO.1所示。
【技术特征摘要】
1.一种中温中性单宁酶TanXZ7，其特征在于，其氨基酸碱基序列如SEQ ID N0.1所示。2.一种中温中性单宁酶TanXZ7，其特征在于，编码权利要求1所述的中温中性单宁酶TanXZ7。3.如权利要求2所述的中温中性单宁酶TanXZ7，其特征在于，其碱基序列如SEQIDN0.2 或 SEQ ID N0.3 所示。4.包含权利要求2所述高温中温中性单宁酶TanXZ7的重组载体。5.包含权利要求2所述中温中性单宁酶TanXZ7的...
【专利技术属性】
技术研发人员：姚斌，马锐，张三燕，石鹏君，黄火清，柏映国，罗会颖，王亚茹，杨培龙，孟昆，
申请(专利权)人：中国农业科学院饲料研究所，
类型：发明
国别省市：北京;11
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