一种检测炔雌醇、己烯雌酚、壬基酚和苯甲酸雌二醇的方法技术

本发明专利技术公开了一种检测炔雌醇、己烯雌酚、壬基酚和苯甲酸雌二醇的方法，属于雌激素检测领域。所述方法包括：将样品溶于乙腈中得到浓度为50%的混合液，将混合液采用超声波萃取和离心萃取后过滤，得到滤液，取滤渣重复进行超声波萃取和离心萃取后过滤，将得到的多次滤液混合均匀；采用高效液相色谱仪对混合均匀的滤液进行梯度洗脱并得到炔雌醇、己烯雌酚、壬基酚和苯甲酸雌二醇的浓度；将得到的炔雌醇、己烯雌酚、壬基酚和苯甲酸雌二醇的浓度与对应的标准曲线比对，从而确定样品中的四种雌激素的浓度。所述检测方法，通过乙腈将上述四种雌激素充分溶解，使得样品的前处理过程简单，对于检测的四种雌激素损失小，且回收率高。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及雌激素检测领域，特别涉及。
技术介绍
雌激素包括内源性雌激素和外源性雌激素，雌激素广泛存在于各种食品、饲料中，若食品中所含的雌激素过高，则可能导致儿童性早熟，成年人发生乳腺或者妇科肿瘤以及前列腺癌。现有技术中采用的对雌激素进行检测的方法，需要将目标化合物经过均质、酶解、甲醇-水溶液提取，再经固相萃取富集净化，最后经液相-质谱联用法测定其目标化合物中是否含有一种或几种雌激素。在实现本专利技术的过程中，专利技术人发现现有技术至少存在以下问题:现有技术中的检测过程需要经过多个步骤对目标化合物进行处理，使得该检测过程较为繁琐，降低了检测雌激素的效率。
技术实现思路
为了解决现有技术中检测雌激素的效率低的问题，本专利技术实施例提供了。所述技术方案如下:本专利技术实施例提供了，所述方法包括:将样品溶于乙腈中得到浓度为50%的混合液，将所述混合液采用超声波萃取和离心萃取后过滤，得到滤液和滤渣，取所述滤渣重复进行超声波萃取和离心萃取后过滤，将得到的多次所述滤液混合均匀；对混合均匀的所述滤液进行梯度洗脱并得到炔雌醇、己烯雌酚、壬基酚和苯甲酸雌二醇的浓度；将所述得到的炔雌醇、己烯雌酚、壬基酚和苯甲酸雌二醇的浓度与对应的标准曲线比对，从而确定所述样品中的所述炔雌醇、己烯雌酚、壬基酚和苯甲酸雌二醇的浓度，所述标准曲线是通过炔雌醇、己烯雌酚、壬基酚和苯甲酸雌二醇的标准品绘制的。具体地，采用高效液相色谱仪对混合均匀的所述滤液进行梯度洗脱。进一步地,所述样品为食品。具体地，所述食品为:奶粉、豆奶粉、牛奶、鸡肉或鱼肉。具体地，所述超声波萃取的时间为20min。具体地,所述离心的转速为4000r/min,所述离心的时间为lOmin。具体地，将得到的多次所述滤液混合均匀后，于40°C用氮气吹至近干，得到残余物，将所述残余物用所述乙腈溶解并定容至lmL，经过滤膜过滤后，再经所述高效液相色谱仪进行梯度洗脱。进一步地，所述滤膜的孔径为0.45 μ m。具体地,所述高效液相色谱仪的参数为:色谱柱为Thermo C18柱；流速lmL/min ；柱温30°C ;检测波长224nm ;进样量20 μ L ;流动相为所述乙腈和pH值为5的0.043mol/L磷酸二氢钠缓冲液。进一步地，所述梯度洗脱程序为:0-5min，所述流动相体积比从乙腈:磷酸二氢钠缓冲液=11:9变至乙腈:磷酸二氢钠缓冲液=17:3 ;5-15min,所述流动相配比从乙腈:磷酸二氢钠缓冲液=17:3变至乙腈:磷酸二氢钠缓冲液=11:9。进一步地,所述Thermo C18 柱的尺寸为:250mmX 0.46mmX 5 μ m。本专利技术实施例提供的技术方案带来的有益效果是:本专利技术提供的检测炔雌醇、己烯雌酚、壬基酚和苯甲酸雌二醇的方法，通过乙腈将上述四种雌激素充分溶解，使得样品的前处理过程简单，对于检测的炔雌醇、己烯雌酚、壬基酚和苯甲酸雌二醇损失小，且回收率闻。【附图说明】为了更清楚地说明本专利技术实施例中的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。图1是本专利技术实施例提供的炔雌醇、己烯雌酚、壬基酚和苯甲酸雌二醇混合标准溶液色谱图。图中:1-炔雌醇，2-己烯雌酚，3-壬基酚，4-苯甲酸雌二醇。【具体实施方式】为使本专利技术的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合附图对本专利技术实施方式作进一步地详细描述。实施例1本专利技术实施例提供了，该方法包括:称取2g奶粉样品(奶粉来源于多美滋优阶妈妈，批号2H3149)置于IOmL具塞刻度离心管中，再向该离心管中加入4ml乙腈中并混合均匀，得到浓度为50%的混合液，将该混合液采用超声波萃取和离心萃取后过滤，得到滤液和滤渣，其中，超声波萃取的时间为20min (超声波由超声波清洗器提供，该超声波清洗器型号KQ-250，由昆山市超声仪器有限公司生产)，离心的转速为4000r/min，离心的时间为IOmin (离心所用离心机为800型中国深圳国华仪器生产)，取滤渣重复3次超声波萃取和离心萃取后过滤，将得到的3次滤液混合均匀，于40°C用氮气吹至近干，得到残余物，将该残余物用乙腈溶解并定容至lmL，经过孔径为0.45 μ m的滤膜过滤后，再采用高效液相色谱仪(D10NEX高效液相色谱仪，配有GP50型梯度泵，TCC-100柱温箱，UVD170U型紫外检测器)对混合均匀的滤液进行梯度洗脱并得到炔雌醇、己烯雌酚、壬基酚和苯甲酸雌二醇的浓度；将得到的炔雌醇、己烯雌酚、壬基酚和苯甲酸雌二醇的浓度与对应的标准曲线比对，从而确定样品中的炔雌醇、己烯雌酚、壬基酚和苯甲酸雌二醇的浓度，标准曲线是通过炔雌醇、己烯雌酚、壬基酚和苯甲酸雌二醇的标准品绘制的。具体地，高效液相色谱仪的参数为:色谱柱为Thermo C18柱(Thermo C18柱的尺寸为:250_X0.46mmX5 μ m);流速lmL/min ;柱温30°C;检测波长224nm ;进样量20 μ L ;流动相为乙腈和pH值为5的0.043mol/L磷酸二氢钠缓冲液(其中磷酸二氢钠为分析纯,用磷酸调至pH为5)。且实验用水为双蒸水。进一步地，梯度洗脱程序为:0-5min，流动相体积比从乙腈:磷酸二氢钠缓冲液=11:9变至乙腈:磷酸二氢钠缓冲液=17:3 ;5-15min,流动相体积比从乙腈:磷酸二氢钠缓冲液=17:3变至乙腈:磷酸二氢钠缓冲液=11:9。绘制标准曲线的方法:以乙腈为溶剂，将不同浓度的各组分标准溶液在上述色谱条件下分别进行分析。采用外标法，用标准溶液的峰面积Y为纵坐标，与其对应的浓度X为横坐标进行线性回归，针对四种雌激素分别做标准曲线，四条标准曲线参见表1。表1为四种雌激素的线性范围、线性方程及相关系数本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测炔雌醇、己烯雌酚、壬基酚和苯甲酸雌二醇的方法，其特征在于，所述方法包括：将样品溶于乙腈中得到浓度为50%的混合液，将所述混合液采用超声波萃取和离心萃取后过滤，得到滤液和滤渣，取所述滤渣重复进行超声波萃取和离心萃取后过滤，将得到的多次所述滤液混合均匀；对混合均匀的所述滤液进行梯度洗脱并得到炔雌醇、己烯雌酚、壬基酚和苯甲酸雌二醇的浓度；将所述得到的炔雌醇、己烯雌酚、壬基酚和苯甲酸雌二醇的浓度与对应的标准曲线比对，从而确定所述样品中的所述炔雌醇、己烯雌酚、壬基酚和苯甲酸雌二醇的浓度，所述标准曲线是通过炔雌醇、己烯雌酚、壬基酚和苯甲酸雌二醇的标准品绘制的。

【技术特征摘要】
1.一种检测炔雌醇、己烯雌酚、壬基酚和苯甲酸雌二醇的方法，其特征在于，所述方法包括: 将样品溶于乙腈中得到浓度为50%的混合液，将所述混合液采用超声波萃取和离心萃取后过滤，得到滤液和滤渣，取所述滤渣重复进行超声波萃取和离心萃取后过滤，将得到的多次所述滤液混合均匀； 对混合均匀的所述滤液进行梯度洗脱并得到炔雌醇、己烯雌酚、壬基酚和苯甲酸雌二醇的浓度； 将所述得到的炔雌醇、己烯雌酚、壬基酚和苯甲酸雌二醇的浓度与对应的标准曲线比对，从而确定所述样品中的所述炔雌醇、己烯雌酚、壬基酚和苯甲酸雌二醇的浓度，所述标准曲线是通过炔雌醇、己烯雌酚、壬基酚和苯甲酸雌二醇的标准品绘制的。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，采用高效液相色谱仪对混合均匀的所述滤液进行梯度洗脱。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述样品为食品。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述超声波萃取的时间为20min。5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述离心的转速为4000r/min，所述离心的时间为IOmin。6.根据...

【专利技术属性】
技术研发人员：谭芳，郑琦，陈荷莲，黄璐，万昆，刘继延，
申请(专利权)人：江汉大学，
类型：发明
国别省市：湖北;42