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重组灵芝免疫调节蛋白(rLZ-8)在制备治疗骨质疏松药物中的应用制造技术

技术编号:10336477 阅读:126 留言:0更新日期:2014-08-20 19:48
本发明专利技术涉及重组灵芝免疫调节蛋白(rLZ-8)在制备治疗骨质疏松药物中的应用。本发明专利技术建立了大鼠骨质疏松保护作用、逆转作用模型,经过rLZ-8给药治疗,实验研究结果表明,rLZ-8大幅提高骨矿物质密度,有效调节代谢相关血清学指标。说明rLZ-8具有显著改善地塞米松引起的骨质疏松的严重程度并且对骨质疏松有一定逆转作用。

【技术实现步骤摘要】
重组灵芝免疫调节蛋白(rLZ-8)在制备治疗骨质疏松药物中的应用
本专利技术属于生物制药领域,本专利技术涉及重组灵芝免疫调节蛋白(rLZ-8)在制备治疗骨质疏松药物中的应用,具体涉及骨质疏松模型的建立,治疗程序的设计以及治疗结果的统计分析,重点涉及重组灵芝免疫调节蛋白在治疗骨质疏松模型中的应用。
技术介绍
骨质疏松(Osteoporosi s,OP )症是骨组织的微观结构出现退化、骨组织含量减少、脆性增加,而易于发生骨折的一种全身性的退行性疾病。骨质疏松是由多种因素引发的疾病,它与性激素、遗传、营养摄入以及生活方式等因素有着密切的关系。据新加坡举行的国际骨质疏松症基金会(IOF)第一届亚洲地区骨质疏松症研讨会和《骨质疏松症中国白皮书(2009)》报道,2006年中国50岁以上人群中约有6944万人患有骨质疏松,其中男性1534万(8.8%),女性5410万(30.8%)。骨量减少的人数达2.139亿,其中男性1.004亿,女性1.135亿。预计2020-2050年,中国患有骨质疏松症为2.87亿,骨量减少的人数为5.33亿。骨质疏松的发病机制主要是由于性激素的缺乏,导致破骨细胞生成的细胞因子网络系统发生改变。促使破骨细胞的活性增强,而成骨细胞活性遭到抑制,骨的吸收速度超过形成速度,造成骨组织中的有机物和无机物减少。随着全球人口的老龄化,骨质疏松症及其引起的骨折也随之普遍,OP已经对人类健康乃至社会的公共健康构成了严重的威胁。灵芝免疫调节蛋白(FungalImmunomodulatory Protein of Ganodermalucidium, LZ_8)是19 89年Kino等从灵芝菌丝体提取物中分离到第一个真菌免疫调节蛋白。以往研究表明,LZ-8具有抑制小鼠系统性过敏反应,刺激人类外周血淋巴细胞增殖和IL-2、TNF-a和IFN-Y等细胞因子产生的免疫学活性。利用已构建的毕赤酵母GS115菌株重组表达LZ-8及相应的中试纯化工艺获得重组灵芝免疫调节蛋白(rLZ-8)。rLZ-8作为重组蛋白免疫调节制剂,具有多种免疫功能,它可避免化疗在发挥抗癌、抑癌作用的同时所带来的一系列毒副反应。
技术实现思路
本专利技术目的是提供重组灵芝免疫调节蛋白(rLZ-8)在制备治疗骨质疏松药物中的应用,重点考察了保护作用、逆转作用、不同给药剂量等因素对治疗效果的影响,采用数学统计软件对数据进行检验处理,得出rLZ-8在治疗骨质疏松过程中具有显著疗效。具体
技术实现思路
如下: 骨质疏松模型的建立:1)保护作用模型:选用健康的雌性Wistar大鼠,6周龄,体重180±20g,SPF级。大鼠腹腔注射地塞米松(2.5mg/kg),给药体积0.00125ml/g,每周2次,连续给药13次(连续给药7周)。2)逆转作用模型:选用健康的雄性Wistar大鼠,体重250-300g, SPF级。大鼠腹腔注射地塞米松(2.5mg/kg),给药体积0.00125ml/g,每周2次,连续给药13次(连续给药7周)。实验分组与给药方法: O保护作用分组与给药方法:大鼠60只随机分为6组(n=10):生理盐水组、模型组、阳性药组、rLZ-8低剂量组、rLZ-8中剂量组、rLZ-8高剂量组。大鼠造模开始前3天给药。生理盐水组:大鼠腹腔注射生理盐水0.00245ml/kg ;模型组:大鼠腹腔注射生理盐水0.00245ml/kg ;阳性药组:大鼠灌胃阿伦磷酸钠1.0mg/kg ;rLZ_8低剂量组:大鼠腹腔注射rLZ-8 28 μ g/kg ;rLZ-8中剂量组:大鼠腹腔注射rLZ_8 56 μ g/kg ;rLZ_8高剂量组:大鼠腹腔注射rLZ-8 112 μ g/kg。阳性药组每天给药I次,其余各组每天给药2次。连续给药45天。)逆转作用分组与给药方法:大鼠20只随机分为2组(n=10):rLZ-8逆转模型组、rLZ-8逆转组。大鼠造模结束后开始给药。rLZ-8逆转模型组:大鼠腹腔注射生理盐水0.00245ml/kg,每天给药2次,连续给药21天;rLZ_8逆转组:大鼠腹腔注射rLZ_8 112 μ g/kg,每天给药2次,连续给药21天。实验结果统计:本专利技术主要通过大鼠体征观察、大鼠体重、骨矿物密度、血液生化指标及脏器指数等指标考察rLZ-8骨质疏松模型的治疗效果的影响。以上述指标的实验数据为基础采用SPSS统计软件进行数据分析,对各治疗组间进行分析检验得出结论。体征观察方面:通过每天上午、下午对大鼠的状态观察,发现地塞米松对正常大鼠的毛色无影响,但对正常大鼠的活动有一定影响,实验过程中发现,与正常组的大鼠相比给地塞米松的大鼠进食情况明显减少,伴有脱毛现象。体重方面:每天称量并记录大鼠的体重。I)保护作用大鼠体重变化:体重数据由实验前三天大鼠体重及实验时间大鼠体重组成。实验过程中每组大鼠体重均有大幅变化,由此可知地塞米松对正常大鼠的体重有影响。2)逆转作用大鼠体重变化:体重数据由实验前三天大鼠体重及实验时间大鼠体重组成。造模过程中两组大鼠体重均有浮动,逆转给药过程中两组大鼠体重成稳定上升趋势,由此可知地塞米松对正常大鼠的体重具有一定影响。股骨矿物含量方面:实验第46天,生理盐水组、模型组、阳性药组、rLZ-8低剂量、中、高组大鼠使用水合氯醛麻醉。腹主动脉取血后迅速分离骨组织。实验第46天、第64天,rLZ-8逆转模型组、rLZ-8逆转组大鼠使用水合氯醛麻醉。腹主动脉取血后迅速分离骨组织。测定骨矿物密度值。I)保护作用大鼠股骨矿物密度:rLZ-8中剂量组、rLZ-8高剂量组的骨矿物质密度显著升高,说明rLZ-8可以显著改善地塞米松引起的骨质疏松的严重程度。2)逆转作用大鼠股骨矿物密度:给药46天,相比于rLZ-8逆转模型组,rLZ-8逆转组大鼠股骨矿物质密度显著增加,说明rLZ-8对地塞米松诱导的骨质疏松具有一定的逆转作用。血液生化指标方面:实验第46天、67天分别测定血液生化指标,rLZ-8可以降低血清碱性磷酸酶活性,rLZ-8可以升高血清钙离子含量,rLZ-8可以降低血清无机磷含量,rLZ-8可以降低血清抗酒石酸酸性磷酸酶活性。与骨代谢密切相关的血清学指标测定结果显示,rLZ-8可以通过调节上述指标来改善骨质疏松的状况。【附图说明】: 图1保护作用大鼠体重变化 图2逆转作用大鼠体重变化图3保护作用实验46天各组大鼠股骨矿物质密度的测定结果注:*与生理盐水组相比,rLZ-8给药组、阳性药组及模型组大鼠股骨矿物质密度都明显减少,具有显著性差异01),Λ与模型组相比,rLZ-8给药组及阳性药组大鼠股骨矿物质密度显著增加0X0.01),# rLZ-8给药组与阳性药组相比,rLZ-8低剂量组股骨矿物质密度有显著性差异0X0.01)。图4逆转作用实验46天各组大鼠股骨矿物质密度测定结果 注:*与生理盐水组相比,rLZ-8逆转组及逆转模型组大鼠股骨矿物质密度都显著降低,且具有显著性差异(P<0.01 )。图5逆转作用实验64天各组大鼠股骨矿物质密度的测定结果 注:**与模型组相比,rLZ-8逆转组的骨矿物质含量显著增加,且有显著性差异,(p<0.01),## rLZ-8逆转组与生理盐水组相比,无显著性差异,逆转模型组与生理盐水本文档来自技高网
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【技术保护点】
重组灵芝免疫调节蛋白(rLZ‑8)在制备治疗骨质疏松药物中的应用。

【技术特征摘要】
1.重组灵芝免疫调节蛋白(rLZ-8)在制备治疗骨质疏松药物中的应用。2.如权利要求1所述的应用,其特征在于增加骨矿物密度。3.如权利要求1所述的应用,其特征在于调节骨代谢相关血清学指标。4.如权利要求1所述的应用,其特征在于该药物制...

【专利技术属性】
技术研发人员:孙非梁重阳张喜田
申请(专利权)人:张喜田孙非
类型:发明
国别省市:上海;31

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