本发明专利技术公开了一种全人源抗HER2单克隆抗体及其制备方法与应用。本发明专利技术公开的一种抗体，该抗体包含轻链可变区和重链可变区，所述抗体的轻链可变区包含三个互补决定区CDRL1、CDRL2、CDRL3，所述抗体的重链可变区包含三个互补决定区CDRH4、CDRH5、CDRH6。本发明专利技术公开的全人源抗HER2单克隆抗体F0178C1具有显著的抑制HER2高表达的乳腺癌细胞体外增殖活性以及体内成肿瘤作用，该抗体在乳腺癌的治疗中具有广阔的应用前景。
【技术实现步骤摘要】
一种全人源抗HER2单克隆抗体及其制备方法与应用
本专利技术涉及一种抗体及其制备方法与应用；特别涉及一种全人源抗HER2单克隆抗体及其制备方法与应用，属于生物
。
技术介绍
乳腺癌是威胁女性健康的主要恶性肿瘤之一，资料统计表明其发病率占全身各种恶性肿瘤的7% -10%。每年全世界约有120万乳腺癌新发病例，约有50万女性死于乳腺癌。HER2基因为乳腺癌的主要致病相关基因，其产物在20% -30%的患者中有过表达现象，HER2过度表达提示患者预后不良，并对细胞毒性化疗药产生抵抗(Slamon DJ, ClarkGMj Wong SG,Levin WJj Ullrich A，McGuire WL.Human breast cancer:correlationof relapse and survival with amplification of the HER-2/neu oncogene.Science.1987Jan9 ；235 (4785):177-82)。 人类表皮生长因子受体(humanepidermal growth factor receptor)家族有 4个成员:EGFR、HER2 (人类表皮生长因子受体2)、ErbB3和ErbB4，广泛表达于上皮、间质及神经组织，生理状态下它们参与激活一系列复杂的细胞信号转导途径，调控正常组织细胞的生长、分裂、分化等重要生理过程。然而研究表明某些肿瘤的发生、发展及恶性生物学行为与EGFR家族的异常表达和活化关系密切(Albanell J, Codony J, Rovira A，MelladoB，Gascon P.Mechanism of action of ant1-HER2monoclonal antibodies: scientificupdate on trastuzumab and2C4.Adv Exp Med Biol.2003 ;532:253-68) DHER2 没有天然配体，在单体状态下无活性，当形成二聚体时可使酪氨酸激酶活化，激活MAPK和PI3K/Akt通路，最终导致肿瘤细胞增殖和存活(Hudis CA.Trastuzumab-mechanism of action and use in clinical practice.N Engl J Med.2007Jul5 ;357 (I):39-51)。抗HER2人源化单克隆抗体Trastuzumab (商品名Herceptin，曲妥珠单抗，赫赛汀)是美国Genentech公司研制的针对HER2的人源化单克隆抗体，于1998年获得美国FDA批准用于HER2高表达转移性乳腺癌的治疗。但Trastuzumab的客观反应率仅为30% (VogelCL，Cobleigh MAj Tripathy D，Gutheil JCj Harris LN，Fehrenbacher L，Slamon DJj MurphyMj Novotny WFj Burchmore M，Shak Sj Stewart SJ，Press M.Efficacy and safety oftrastuzumab as a single agent in first-line treatment of HER2-overexpressingmetastatic breast cancer.J Clin Oncol.2002Febl ;20(3):719-26 ；Nahta R，Yu D，HungMCjHortobagyi GNjEsteva FJ.Mechanisms of disease:understanding resistance toHER2_targeted therapy in human breast cancer.Nat Clin Pract Oncol.2006May ；3 (5): 269-80 ；Kiimler I, Tuxen MK，Nielsen DLA systematic review of dual targetingin HER2-positive breast cancer.Cancer Treat Rev.2014 ;40 (2):259-70.) ?而且Trastuzumab是一个人源化抗体，保留了鼠源⑶R区和少量FR区鼠源残基，仍未能达到全人源化。研制更为有效的抗HER2治疗性抗体是临床治疗的迫切需求。近年来，随着鼠单抗人源化技术、抗体库技术和转基因鼠技术的进展，人源抗体的研制技术正在得到解决，尤其是通过构建大容量、具有良好多样性的抗体库，为人源抗体的制备提供了有效的技术平台。噬菌体抗体库技术是全套抗体基因展示在噬菌体表面，并能在体外模拟抗体免疫系统的选择作用，呈现在噬菌体表面的抗体能够在体外用固相化抗原进行筛选。经过几轮“吸附一洗脱一扩增”的淘筛，可使特异性噬菌体抗体得到富集。利用噬菌体抗体库技术借助高效筛选系统，可以不经免疫方便地制备出人源抗体(王琰，化冰，刘群英，等.半合成抗体库的构建及鉴定.中华微生物学和免疫学杂志，1999;19 (3):23.) ο第一个来源于噬菌体抗体库的治疗性人源抗体(抗TNF- α，治疗类风湿性关节炎)已于2003年初批准上市，印证了用大容量噬菌体抗体筛选人源抗体的可行性。Pertuzumab是美国Genentech公司研制的另一株抗HER2人源化抗体(AdamsCWj Allison DE，Flagella K，Presta L，Clarke Jj Dybdal Nj McKeever Kj SliwkowskiMX.Humanization of a recombinant monoclonal antibody to produce a therapeuticHER dimerization inhibitor,pertuzumab.Cancer Immunol Immunother.2006Jun ；55 (6):717-27 ；Cortes J，Fumoleau P，Bianchi GVj Petrella TM，Gelmon Kj PivotX.Pertuzumab monotherapy after trastuzumab-based treatment and subsequentreintroduction of trastuzumab: activity and tolerability in patients withadvanced human epidermal growth factor receptor2-positive breast cancer.J Clin 0ncol2012 ;30:1594-600 ;Zagouri F，Sergentanis TNj Chrysikos D，ZografosCG，Filipits M，Bartsch R，Dimopoulos MA，Psaltopoulou T.Pertuzumab in breastcancer:a systematic review.Clin Breast Cancer.2013, 13(5):315-24 ；Metzger-F本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种抗体，该抗体包含轻链可变区和重链可变区，所述抗体的轻链可变区包含三个互补决定区CDRL1、CDRL2、CDRL3，所述抗体的重链可变区包含三个互补决定区CDRH4、CDRH5、CDRH6；所述CDRL1的氨基酸序列如SEQ ID No.8中自N末端起第23位至第33位氨基酸所示；所述CDRL2的氨基酸序列如SEQ ID No.8中自N末端起第49位至第56位氨基酸所示；所述CDRL3的氨基酸序列如SEQ ID No.8中自N末端起第90位至第100位氨基酸所示；所述CDRH1的氨基酸序列如SEQ ID No.6中自N末端起第30位至第35位氨基酸所示；所述CDRH2的氨基酸序列如SEQ ID No.6中自N末端起第50位至第66位氨基酸所示；所述CDRH3的氨基酸序列如SEQ ID No.6中自N末端起第99位至第107位氨基酸所示。
【技术特征摘要】
1.一种抗体，该抗体包含轻链可变区和重链可变区，所述抗体的轻链可变区包含三个互补决定区⑶RL1、⑶RL2、⑶RL3，所述抗体的重链可变区包含三个互补决定区⑶RH4、CDRH5、CDRH6 ； 所述⑶RLl的氨基酸序列如SEQ ID N0.8中自N末端起第23位至第33位氨基酸所示； 所述⑶RL2的氨基酸序列如SEQ ID N0.8中自N末端起第49位至第56位氨基酸所示； 所述⑶RL3的氨基酸序列如SEQ ID N0.8中自N末端起第90位至第100位氨基酸所示； 所述⑶RHl的氨基酸序列如SEQ ID N0.6中自N末端起第30位至第35位氨基酸所示； 所述⑶RH2的氨基酸序列如SEQ ID N0.6中自N末端起第50位至第66位氨基酸所示； 所述⑶RH3的氨基酸序列如SEQ ID N0.6中自N末端起第99位至第107位氨基酸所/Jn ο2.根据权利要求1所述的抗体，其特征在于:所述轻链可变区的氨基酸序列如SEQIDN0.8所示，所述重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID N0.6所示。3.根据权利要求1或2所述的抗体，其特征在于:所述抗体为一种全人源单克隆抗体，由两个相...
【专利技术属性】
技术研发人员：周丽君，付文燕，王欲晓，何立东，
申请(专利权)人：中国人民解放军海军总医院，
类型：发明
国别省市：北京;11
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