一株节杆菌及其在降解黄曲霉毒素中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一株节杆菌及其在降解黄曲霉毒素中的应用。本发明专利技术提供了一株节杆菌(Arthrobacter sp.)L15，其保藏编号为CGMCC No.8869。本发明专利技术的实验证明，本发明专利技术发现了一株节杆菌L15，将其发酵液与黄曲霉毒素溶解混匀，其可以高效降解黄曲霉毒素，因此该菌作为黄曲霉毒素降解的生物材料，无论在开发新的生物降解菌剂还是生物降解无菌制剂方面都具有很好的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
一株节杆菌及其在降解黄曲霉毒素中的应用
本专利技术涉及生物
，尤其涉及一株节杆菌及其在降解黄曲霉毒素中的应用。
技术介绍
黄曲霉毒素(Aflatoxin, AFT)是一类主要由黄曲霉(Aspergillus flavus)和寄生曲霉(A.parasiticus)真菌产生的有毒次级代谢产物，具有致癌、致畸、致细胞突变的作用，仅0.294mg/kg剂量就能引起敏感动物的急性中毒死亡(Bondy and Pestka, 2000 ；ffanget al., 2002 ；Rawal, et al., 2010),其主要的作用祀标是肝脏,是诱发恶性肿瘤原发性肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)的主要因素之一,此外还可以引起肾脏和肾上腺的急性病变(Poirier et al., 2000 ；Kensler et al.,2011)。黄曲霉毒素的基本结构是二呋喃环和氧杂萘邻酮(香豆素)，前者为基本毒性结构，后者有加强毒性及致癌作用。目前已发现的黄曲霉毒素约有20种，在紫外光下发蓝色光(Blue)的为B族(黄曲霉毒素B1和B2),发绿光(Green)的为G族(黄曲霉毒素G1和G2)。黄曲霉毒素M1是AFB1的羟基化衍生物。其中AFB1分布最广、含量最高、毒性最强，其毒性是氰化钾的10倍、砒霜的68倍。传统的黄曲霉毒素去毒方法有物理和化学方法，包括氨化法、碱法、高温法、射线辐照法及超滤-渗滤法等，这些方法存在效果不稳定、营养成分损失大、降解产物复杂、降解产物毒性难以确定， 以及难以规模化生产等缺点；此外，还有吸附法，吸附法在吸附毒素的同时也会吸附营养成分。生物法，是利用微生物及其分泌的酶等代谢产物降解黄曲霉毒素的方法。生物法具有效率高、特异性强以及对食品、饲料和环境没有污染的特点，是黄曲霉毒素降解的方向。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是提供一株节杆菌。本专利技术提供的一株节杆菌(Arthrobacter sp.) L15,其保藏编号为CGMCCN0.8869。上述节杆菌L15和/或其菌悬液和/或其发酵液和/或其代谢产物在降解黄曲霉毒素中的应用也是本专利技术保护的范围。上述节杆菌L15和/或其菌悬液和/或其发酵液和/或其代谢产物在制备降解黄曲霉毒素的产品中的应用也是本专利技术保护的范围。上述应用中，所述黄曲霉毒素为黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素G2或黄曲霉毒素Μ:。本专利技术的另一个目的是提供一种降解黄曲霉毒素的方法。本专利技术提供的方法，包括如下步骤:用上述的节杆菌L15对黄曲霉毒素进行降解处理。上述方法中，所述降解处理的方式为将所述节杆菌L15的菌悬液和/或其发酵液和/或其代谢产物与含有黄曲霉毒素的样品和/或产品混合。所述含有黄曲霉毒素的样品和/或产品具体为含有黄曲霉毒素的农产品加工原料、饲料、食品及环境样品和/或产品。上述方法中，所述黄曲霉毒素为B族黄曲霉毒素、B族黄曲霉毒素的衍生物和/或G族黄曲霉毒素，其中，所述B族黄曲霉毒素为黄曲霉毒素B1或黄曲霉毒素B2 ;所述G族黄曲霉毒素为黄曲霉毒素G1或黄曲霉毒素G2。所述B族黄曲霉毒素的衍生物为黄曲霉毒素M1O在本专利技术中，所述黄曲霉毒素为黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素G2或黄曲霉毒素Μ:。所述含有黄曲霉毒素的样品和/或产品具体为含有黄曲霉毒素的农产品加工原料、饲料、食品及环境样品和/或产品。在本专利技术的实施例中，所述降解处理为节杆菌L15的培养液与黄曲霉毒素溶液混合；黄曲霉毒素溶液由黄曲霉毒素和色谱纯甲醇组成，且黄曲霉毒素在黄曲霉毒素溶液中的终浓度为IOOppb。节杆菌L15 培养液为将节杆菌(Arthrobacter sp.) L15 (CGMCC N0.8869)接种于液体NB培养基中，在温度为28°C和转速为200rpm(旋转半径20mm)的条件下振荡培养24h后，培养容器内的所有物质记作L15培养液。菌株L15已于2014年2月28日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCCJia:北京市朝阳区北辰西路I号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101)，保藏号 为CGMCC N0.8869，分类命名为节杆菌Arthrobacter sp.。本专利技术的实验证明，本专利技术发现了一株节杆菌L15，将其发酵液与黄曲霉毒素溶解混匀，其可以高效降解黄曲霉毒素，因此该菌作为黄曲霉毒素降解的生物材料，无论在开发新的生物降解菌剂还是生物降解无菌制剂方面都具有很好的应用前景。【附图说明】图1为黄曲霉毒素B1降解效果液相色谱图图2为黄曲霉毒素B2降解效果液相色谱图图3为黄曲霉毒素G1降解效果液相色谱图图4为黄曲霉毒素G2降解效果液相色谱图图5为黄曲霉毒素M1降解效果液相色谱图【具体实施方式】下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。NB液体培养基:由溶剂和溶质组成；溶质为蛋白胨、牛肉膏和NaCl，溶剂为水；蛋白胨在NB液体培养基中的浓度为I %，牛肉膏在NB液体培养基中的浓度为0.3%，NaCl在NB液体培养基中的浓度为0.5%，所述％均为质量体积百分比(g/100ml)。NA固体培养基:在NB液体培养基中加入琼脂(琼脂与液体培养基的比例为1.5g:100ml)，得到NA固体培养基。实施例1、菌的分离与鉴定一、菌的分离( 一)2013年6月，在超净工作台中，将采集自北京郊区土壤样品放在无菌蒸馏水中震荡15分钟制备菌悬液，摇床转速为180rpm。( 二)将菌悬液用无菌蒸馏水进行浓度梯度稀释后涂布在NA培养基平板上，300C条件下培养24小时，菌落布满整个平板，用接种环挑取平板上形态、大小、颜色、透明度不同的菌株平板划线纯化，点接纯化后的菌株应用于黄曲霉毒素降解实验。得到的一株黄曲霉毒素降解能力强的菌株命名为L15。二、鉴定1、形态和生理生化特性按照“伯杰细菌鉴定手册”(第八版)和“常见细菌系统鉴定手册”(东秀珠，蔡妙英等编著，北京:科学出版社，2001.2)中描述的方法，对菌株L15进行形态特征和生理生化特性鉴定，具体结果如下:菌体的形态和生理生化特性:呈杆状；革兰氏阳性；氧化酶:_ ;接触酶:+ ;淀粉水解:+ ;酪素水解:_ ;硝酸盐还原:+ ;50°C生长:_。Biolog GEN II 生长实验表明，菌株L15可以利用a_D_葡萄糖、p-羟基苯乙酸、糊精、D-甘露糖、丙酮酸甲酯、D-麦芽糖、D-果糖、L-丙氨酸、D-乳酸甲酯、D-海藻糖、D-半乳糖、L-精氨酸、L-乳酸、D-纤维二糖、L-天冬氨酸、柠檬酸、龙胆二糖、D-岩藻糖、L-谷氨酸、α -酮戊二酸、蔗糖、L-岩藻糖、L-组氨酸、松二糖、L-鼠李糖、L-焦谷氨酸、L-苹果酸、水苏糖、肌苷、L-丝氨酸、溴代丁二酸、D-棉子糖、果胶、D-甘露醇、Y -氨基丁酸、D-蜜二糖、α-羟丁酸、β-甲基-D-葡糖苷、D-葡糖酸、β-羟基-D，L-丁酸、D-水杨苷、甘油、D-葡萄糖醛酸、α - 丁酮酸、N-乙酰-D-葡糖胺、乙酰乙酸、丙酸、奎宁酸和乙酸。Biolog GEN III化学敏感实验表明，菌株L15对I %乳酸钠、萘啶酸、ρΗ6.0本文档来自技高网...

【技术保护点】
一株节杆菌(Arthrobacter sp.)L15，其保藏编号为CGMCC No.8869。

【技术特征摘要】
1.一株节杆菌(Arthrobacter sp.) L15，其保藏编号为 CGMCC N0.8869?2.权利要求1所述的节杆菌L15和/或其菌悬液和/或其发酵液和/或其代谢产物在降解黄曲霉毒素中的应用。3.权利要求1所述的节杆菌L15和/或其菌悬液和/或其发酵液和/或其代谢产物在制备降解黄曲霉毒素的产品中的应用。4.根据权利要求2或3所述的应用，其特征在于:所述黄曲霉毒素为黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1、黄...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘阳，赵月菊，兰茨纳·桑格，娅娃·米妮·埃尔迪·富丽，邢福国，周露，王龑，
申请(专利权)人：中国农业科学院农产品加工研究所，
类型：发明
国别省市：北京;11