本发明专利技术涉及一株高抗逆性屎肠球菌及其应用。屎肠球菌(Enterococcus faecium)WEI-9 CGMCC No.7455分离自60日龄仔猪粪便，能够耐受低pH环境和高浓度猪胆盐，可以在胃肠消化液中长时间保持活性。本发明专利技术的屎肠球菌(Enterococcus faecium)WEI-9 CGMCC No.7455对大肠杆菌、沙门氏菌、藤黄微球菌、金黄色葡萄球菌均有抑菌作用，抑菌圈直径达到30-40mm。借此开发的微生态活菌制剂具有显著的益生特性，可以用于调节畜禽肠道微生态平衡，并在预防或辅助治疗畜禽细菌性腹泻有着广阔的应用前景。
【技术实现步骤摘要】
一株高抗逆性屎肠球菌及其应用
本专利技术涉及一种屎肠球菌，特别是涉及一株高抗逆性屎肠球菌及其应用。背景介绍食品安全已是人们越来越关注的问题。饲料作为动物的食品和人类的间接食品，成为食品安全工程的重要一环。我国已启动“饲料安全工程”，并禁用了一批毒性和残留较大的饲料添加剂产品。加快安全性较高的新型饲料添加剂产品的开发与生产，对于实现健康养殖及养殖业可持续发展具有重大的现实意义。微生态制剂作为一种绿色、安全的饲料添加剂受到人们的广泛关注，对于动物健康和养殖业的促进作用正在逐渐的显现出来。然而，目前市售微生态制剂产品质量参差不齐，很多产品所用菌种对胃肠消化液、胆盐耐受能力差，真正能够到达小肠发挥功效的菌种很少。为了提高产品效果，不少企业推出微囊化的微生态制剂产品，虽然提高了进入小肠的活菌数，但也大幅增加了生产成本。开发对胃肠消化液、胆盐有高耐受性的益生菌菌株能大大简化生产工艺，降低生产成本。屎肠球菌是农业部《饲料添加剂品种目录》所列菌种，可以在微生态制剂中安全使用。屎肠球菌具有 很强的产酸能力，是动物体内天然存在的有益乳酸菌之一，能够维持宿主肠道微生态平衡，抑制肠道病原菌的大量增殖，能够刺激肠道粘膜免疫，提高机体的抗病能力，产生有益的代谢产物，防止有害物质产生，改善机体健康水平。因此，开发一种能够耐受胃肠消化液和胆盐，并对病原微生物有较强抑菌活性的屎肠球菌菌株，对于降低微生态制剂生产成本，强化微生态制剂功效具有重要的意义。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一株可用于调节畜禽肠道微生态平衡及预防畜禽细菌性腹?写的高抗逆性屎肠球菌(Enterococcus faecium)WE1-9CGMCC N0.7745。从健康仔猪粪便中分离、筛选得到一株乳酸菌，经16S rDNA测序鉴定为屎肠球菌(Enterococcus faecium) WE1-9,并于2013年6月19日送中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，编号为CGMCC N0.7745，保藏地址:北京市朝阳区北辰西路I号院中科院微生物研究所邮编:100101电话:86-10-64807596。屎肠球菌(Enterococcusfaecium)WE1-9CGMCC N0.7745 属革兰氏阳性细菌，圆形或椭圆形，呈链状排列，无芽孢，无鞭毛。生长温度范围在30-40°C，适宜pH值的范围6.0-7.5，是兼性厌氧乳酸菌。该菌株在常规和改良MRS培养基中生长良好，繁殖速度快，在改良MRS培养基中的生长曲线如图1所示，2h后进入对数期，14h菌数增殖达到最高，稳定期活菌数为0.98X IO9-L 2X IO9CFU / mL。所述改良MRS配方为:每1000mL水中加入蛋白胨 10g，牛肉粉 5g，酵母粉 5g，葡萄糖 20g,吐温 801mL, K2HPO4.7H202g, NaAC.3H205g，柠檬酸铵 2g, MgSO4.7Η200.58g, MnSO4.H2O0.25g, pH6.8。屎肠球菌(Enterococcusfaecium) WE1-9CGMCC N0.7745 在 pH 为 2-3 的人工胃液中保持3h，存活率80%;在人工胃肠消化液中保持26h，活菌数可以维持在IO7CFU / mL，这个时间符合肠道生理周期，能够保证菌体发挥益生作用；在猪胆盐浓度为20g / L的人工猪胆盐溶液中，保持3h，存活率为51%，这个胆盐浓度远远高于动物体内的0.3g / L的平均胆盐浓度。上述特性评价试验中，所述人工胃液包括如下成分:每1000mL水中含有胃蛋白酶3g，NaC12g，调pH至2-3 ;所述人工胃肠消化液包括如下成分:人工胃液pH调至3，人工肠液包括如下成分:每1000mL水中含有胰蛋白酶10g，KH2P047gJ pH至7.5，测试过程中，菌体在人工胃液中保持2h，然后接入人工肠液中保持24h ;所述人工猪胆盐溶液成分包括:每1000mL水中含有胰蛋白酶lg，猪胆盐20g，NaC15g，调pH至7.0。屎肠球菌(Enterococcusfaecium) WE1-9CGMCC N0.7745 对大肠杆菌、沙门氏菌、藤黄微球菌、金黄色葡萄球菌均有抑菌作用，抑菌圈直径达到30-40mm。基于上述特性，本专利技术提供的屎肠球菌(Enterococcus faecium)WE1-9CGMCCN0.7745具有显著的益生特性，可以在畜禽肠道定殖，调节畜禽肠道微生态平衡，并在预防或辅助治疗畜禽细菌性腹泻有着广阔的应用前景。【附图说明】 图1 为屎肠球菌(Enterococcus faecium)WE1-9CGMCC N0.7745 在改良 MRS 培养基中的生长曲线。图2 为尿肠球菌(Enterococcus faecium)WE1-9CGMCC N0.7745 对人工胃肠消化液的耐受性。图中前2h是菌株在人工胃液中的存活曲线，随后的24h是菌株从人工胃液转接至人工肠液后的存活曲线。图3 为屎肠球菌(Enterococcus faecium) WE1-9CGMCC N0.7745 对金黄色葡萄球菌的抑菌效果，图中是两个相同剂量实验组。【具体实施方式】实施例一:屎肠球菌(Enterococcusfaecium)WE1-9CGMCC N0.7745 的分离和鉴定称取60日龄健康仔猪的粪便lg，放入盛有99mL灭菌的0.85%生理盐水的三角瓶中(三角瓶中预先放入20粒无菌玻璃珠)，37°C，180rpm震荡30min，吸取ImL悬浊液做十倍递增梯度稀释，选取2-3个适宜稀释度，吸取ImL稀释液于无菌培养皿中，每个稀释度做两个平行；向加有稀释液的培养皿中加入融化后冷却至46°C的MRS琼脂培养基，小心转动培养皿使试样与培养基充分混合，37°C培养48-72h。从培养皿上挑选不同形态的菌落划线纯化，分别保藏并进行16S rDNA的测序鉴定。实施例二:屎肠球菌(Enterococcusfaecium) WE1-9CGMCC N0.7745 耐受低 pH 胃液、人工胃肠消化液和猪胆盐从屎肠球菌(Enterococcusfaecium) WE1-9CGMCC N0.7745 的保藏斜面(常规MRS培养基)挑一环菌苔接于装有IOOmL改良MRS培养基的250mL三角瓶中，于37°C，180rpm振荡培养14h，将菌液在6000rpm的条件下离心10min，弃去上清，用灭菌的0.85%的生理盐水洗涤一次，再用同体积生理盐水悬浮。吸取IOmL悬浮菌液分别接于装有90mL pH分别为1、2、3、4、5的人工胃液和90mL人工猪胆盐溶液的250mL三角瓶中，猪胆盐浓度分别为3g/L、5g / LUOg / L、15g / L、20g/L，以不加胆盐的样品为对照。然后在37°C，静置培养180min,分别于初始接种、30min、60min、120min、180min对培养物进行活菌计数,绘制活菌数变化曲线，计算菌株在不同PH人工胃液和不同浓度人工胆盐中保温180min时的存活率。菌液在人工胃液中保温2h后吸取IOmL菌悬液接于装有90mL人工肠液的250mL三角瓶中，同样在371:，静置培养，分别于初始接种、311、611、2111、2411对培养物进行活菌计数，本文档来自技高网...
【技术保护点】
一株高抗逆性屎肠球菌及其应用，其特征在于，所述的屎肠球菌(Enterococcus faecium)为WEI‑9，保藏编号为CGMCC No.7745。
【技术特征摘要】
1.一株高抗逆性屎肠球菌及其应用，其特征在于,所述的屎肠球菌(Enterococcusfaecium)为 WE1-9，保藏编号为 CGMCC N0.7745。2.权利要求1所述的一株高抗逆性屎肠球菌及其应用，其特征在于所述的屎肠球菌WE1-9能够耐受pH为2-3的人工胃液，并在人工胃液中存活。3.根据权利要求2所述人工胃液，其特征在于:所述人工胃液包括如下成分:每1000mL水中含有胃蛋白酶3g，NaC12g，调pH至2-3。4.权利要求1所述的一株高抗逆性屎肠球菌及其应用，其特征在所述的屎肠球菌WE1-9能够在人工肠消液中存活。5.根据权利要求4所述人工肠液，其特征在于:所述人工肠液包括如下成分:每1000mL水中含有胰蛋白酶10g，KH2P047g，调pH至7.5。6.权利要求...
【专利技术属性】
技术研发人员：乔琳，姚宏明，高长斌，刘蕊，金忠辉，
申请(专利权)人：北京伟嘉人生物技术有限公司，沈阳伟嘉牧业技术有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。