一种筛选抗回生水稻品种的方法技术

本发明专利技术公开了一种筛选抗回生水稻品种的方法，提供一种鉴别准确度，测定工序少的方法。将以大米原淀粉为原料制备得到的大米支链淀粉加入水中配成10％溶液，调节溶液pH值为6.0，然后加入溶液体积1‰的酶活力单位为120-180U/g的普鲁兰酶，酶解时加两滴0.2％氯化钙，在50℃酶解6-10小时，然后离心；离心后的上清液上凝胶色谱仪层析,测定支链淀粉链长分布；如果支链淀粉的A链长度分布集中于短链部分，该短链聚合度集中于3-5，则为抗回生水稻。本发明专利技术的方法采用从原淀粉中分离支链淀粉，继而通过测定支链淀粉链长分布来鉴别抗回生水稻品种，避开了糊化温度、时间等环境条件对测定结果的干扰，提高了鉴别准确度，减少了测定工序。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及食品生物
，特别是涉及一种高效筛选抗回生水稻品种的方法。
技术介绍
常见筛选抗回生水稻品种的方法是通过杂交、基因重组等生物技术手段培育新品种，继而测定新品种的回生特性。这类方法有两个缺陷：一是实验的盲目性，大量实验结果可能一个抗回生水稻品种也筛选不到；二是回生率测定过程淀粉浓度、糊化温度、时间、淀粉液pH值等因素影响不同批次水稻淀粉回生率测定结果的一致性、重现性，造成不同批次间测定结果可比性降低，从而给筛选抗回生水稻品种的界定带来不确定性。
技术实现思路
本专利技术的目的是针对现有技术中存在的技术缺陷，而提供一种高效筛选抗回生水稻品种的方法。 为实现本专利技术的目的所采用的技术方案是： 一种筛选抗回生水稻品种的方法，包括下述步骤： 将大米支链淀粉加入水中配成10-15％溶液，调节溶液pH值为6.0-7.0，然后加入溶液体积1-3‰的酶活力单位为120-180U/g的普鲁兰酶以分解1,6-糖苷键产生无分支的多糖，在45-55℃酶解6-10小时，然后离心；离心后的上清液上凝胶色谱仪层析,测定支链淀粉链长分布；如果大米支链淀粉的侧链长度分布集中于聚合度为3-6的范围的侧链比率高于60％，则为抗回生水稻，如果此比率低于20％则为高回生水稻品种；所述大米支链淀粉以大米原淀粉为原料制备得到。> 酶解时加两滴0.2-0.4％氯化钙以增强普鲁兰酶活力。 所述大米支链淀粉的制备方法为：用常规碱法从大米中提取大米淀粉，将大米淀粉制成淀粉乳液，将浓度为1-3％的淀粉乳液于90-98℃糊化30min，之后加水和正丁醇，离心后取上清液；所得上清液加入无水乙醇，调节酒精度为60-85％，搅拌离心后沉淀即为大米支链淀粉。 所述大米淀粉的制备方法为：将大米粉放入碱液中浸泡7-10h，之后离心得到大米淀粉。 所述碱液为NaOH溶液，NaOH溶液的质量分数为0.2-0.5％、NaOH溶液浸泡温度为25-35℃，大米与NaOH溶液的质量体积比为1:6-10。 糊化后水的加入量为：淀粉和水的比例为1:500-1000，正丁醇的加入量为淀粉乳液的3-5倍体积。 与现有技术相比，本专利技术的有益效果是： 1、本专利技术的方法采用从原淀粉中分离支链淀粉，继而通过测定支链淀粉链长分布来鉴别抗回生水稻品种，而非通过测定淀粉回生率，避开了糊化温度、时间等环境条件对测定结果的干扰，提高了鉴别准确度，减少了测定工序。 2、本专利技术的方法工艺简单，容易实现，筛选抗回生水稻品种的成本低。 附图说明 图1所示为实施例1中抗回生水稻品种ZP-35支链淀粉链长分布照片； 图2所示为实施例1中抗回生水稻品种ZP-36支链淀粉链长分布照片； 图3所示为实施例1中抗回生水稻品种ZP-19支链淀粉链长分布照片； 图4所示为实施例1中抗回生水稻品种ZP-13支链淀粉链长分布照片； 图5所示为实施例1中高回生水稻品种ZP-13支链淀粉链长分布照片； 图6所示为实施例1中高回生水稻品种ZP-8支链淀粉链长分布照片； 图7所示为实施例1中高回生水稻品种ZP-3支链淀粉链长分布照片； 图8所示为实施例1中高回生水稻品种ZP-32支链淀粉链长分布照片。 具体实施方式 以下结合具体实施例对本专利技术作进一步详细说明。 实施例1 (1)选取8种不同品种大米(ZP-36；ZP-35；ZP-15；ZP-19；ZP-13；ZP-3；ZP-32；ZP-8由天津市农作物研究所提供)，其中前四种回生率较低，后四种回生率较高。分别将不同品种的大米在90℃干燥3d后，经脱壳粉碎过100目筛子得到大米粉,然后将大米粉放入NaOH溶液中搅拌,其中料液比为1:6，NaOH质量分数0.2％，NaOH浸泡温度为25℃，NaOH浸泡时间7h。之后离心(3860r/min,5min)得到不同品种的大米淀粉。分别将不同品种的大米淀粉制成淀粉乳液。将不同品种的浓度为1％的淀粉乳液于90℃糊化30min，之后加水使淀粉和水的比例为1:500，加入淀粉乳液3倍体积的正丁醇，离心后沉淀为大米直链淀粉，取上清液加入无水乙醇，调节酒精度为60％，搅拌离心后沉淀即为不同品种的大米支链淀粉。 (2)分别将步骤(1)得到的不同品种的大米支链淀粉加入水中配成10％溶液，调节溶液pH值为6.0，然后加入溶液体积1‰(量相当于淀粉量的1/10)的普鲁兰酶(酶活力单位120/g)，每个样在酶解时加两滴0.2％氯化钙，在50℃酶解6小时，然后在高速离心机上离心。离心后的上清液上凝胶色谱仪层析,测定不同品种大米支链淀粉链长分布。其示意图如图1-图8所示，洗脱时间小的是侧链短的多糖，洗脱时间长的是侧链长的多糖。从图1和图2中看出，ZP-35和ZP-36两种回生率低的水稻支链淀粉短侧链明显较多,侧链小于6糖的百分率分别为100％和63.5％；从图3和图4中看出，ZP-19和ZP-13两种回生率低的水稻支链淀粉侧链链长小于6糖的百分率分别为61.7％和63.1％。而从图5和图6中可以看出，ZP-13和ZP-8两种回生率较高的水稻品种的支链淀粉长侧链比较多,侧链小于6糖的百分率分别为3.7％和3.2％；从图7和图8中看出，ZP-3和ZP-32两种回生率高的水稻支链淀粉侧链链长小于6糖的百分率分别为3.7％和13.7％。 实施例2 (1)选取40种不同品种大米(R31701-R31710；G47-G56；R30217-R30226；R17739.1-R17739.10；由四川省农业科学院作物研究所提供)，其中前20种回生率较低，后20种回生率较高。分别将不同品种大米在90℃干燥3d后，经脱壳粉碎过300目筛子得到大米粉,然后将大米粉放入NaOH溶液中搅拌,其中料液比1:10、NaOH质量分数0.5％、NaOH浸泡温度35℃、NaOH浸泡时间10h。之后离心(3860r/min,5min)得到不同品种的大米淀粉。分别将不同品种的大米淀粉制成淀粉乳液。将不同品种的浓度为1％的淀粉乳液于98℃糊化30min，之后加水使淀粉和水的比例为1:1000，加入淀粉乳液5倍体积的正丁醇，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种筛选抗回生水稻品种的方法，其特征在于，包括下述步骤：将大米支链淀粉加入水中配成10‑15％溶液，调节溶液pH值为6.0‑7.0，然后加入溶液体积1‑3‰的酶活力单位为120‑180U/g的普鲁兰酶，在45‑55℃酶解6‑10小时，然后离心；离心后的上清液上凝胶色谱仪层析,测定支链淀粉链长分布；如果大米支链淀粉的侧链长度分布集中于聚合度为3‑6的范围的侧链比率高于60％，则为抗回生水稻，如果此比率低于20％则为高回生水稻品种；所述大米支链淀粉以大米原淀粉为原料制备得到。

【技术特征摘要】
1.一种筛选抗回生水稻品种的方法，其特征在于，包括下述步骤：
将大米支链淀粉加入水中配成10-15％溶液，调节溶液pH值为6.0-7.0，然
后加入溶液体积1-3‰的酶活力单位为120-180U/g的普鲁兰酶，在45-55℃酶
解6-10小时，然后离心；离心后的上清液上凝胶色谱仪层析,测定支链淀粉链
长分布；如果大米支链淀粉的侧链长度分布集中于聚合度为3-6的范围的侧链
比率高于60％，则为抗回生水稻，如果此比率低于20％则为高回生水稻品种；所
述大米支链淀粉以大米原淀粉为原料制备得到。
2.根据权利要求1所述的筛选抗回生水稻品种的方法，其特征在于，酶解
时加两滴0.2-0.4％氯化钙以增强普鲁兰酶活力。
3.根据权利要求1或2所述的筛选抗回生水稻品种的方法，其特征在于，
所述大米支链淀粉的制备方法为：用常规碱法从大米中提取大米淀粉，将大...

【专利技术属性】
技术研发人员：连喜军，康海岐，孙海波，
申请(专利权)人：天津商业大学，
类型：发明
国别省市：天津;12