本发明专利技术涉及一种降低电化学传感器背景信号的方法及应用其的传感器，属于生物分析技术领域。本发明专利技术通过在传感器构建或检测过程中形成类似于自然界中常见的“荷叶效应”，将尺寸较小的分子信号探针固定到纳米金颗粒表面合成尺寸较大的纳米探针，从而在传感过程中形成与荷叶表面类似的纳米结构，有效防止了信号探针插入电极表面上的DNA单分子层的分子间隙而引起的吸附，使得电化学传感器背景信号基本清除。结果表明，在检测可卡因和三磷酸腺苷时，采用纳米探针后两者的背景信号几乎完全清除，相应地大大提高了检测的灵敏度，两者的检测灵敏度分别为6nM和5nM，分别提高了2000倍和1000倍；而在检测Hg2+时，其信号残留也从原来的30％下降到了6％以下。
【技术实现步骤摘要】
一种降低电化学传感器背景信号的方法及应用其的传感器
本专利技术涉及一种降低电化学传感器背景信号的方法及其应用，属于生物分析
。
技术介绍
基于固相基质的传感器，如微阵列，试纸条，平面波导系统和电极等因具有高通量，测量简单，便携和自动化、微型化兼容性好等优点而被广泛应用于基础研究和实际检测。但此类传感器也存在不少技术上的难题而限制了它们的应用。最普遍和严重的问题是在固相基质表面信号探针的非特异性吸附引起强的背景信号而造成传感器的检测灵敏度下降。自组装分子层钝化表面(Sens Actuators B Chem.2008,129 (I), 225-230.)高分子聚合物(Anal.Chem.2005，77 (23)，7758-7762.)，DNA 探针(Ahal.Chem.2011,83(17),6464-6467.)和其他封闭试剂是常用的减少传感器表面吸附的方法。但在很多情况下这些方法并不能有效降低背景信号。因此发展一种通用而又十分简单有效地清除电化学传感器背景信号的方法仍是对广大科研人员的挑战。纳米金颗粒是一种直径在I?lOOnm，具有高电子密度、介电特性和催化作用，能与多种生物大分子结合，且不影响其生物活性的纳米材料。因为具有高的比表面积，良好的生物相容性和电催化活性等独特性质而被广泛应用于生物传感器中进行分子识别和信号放大等。
技术实现思路
荷叶具有自清洁的效果，研究表明这种“荷叶效应”是由于荷叶表面具有纳米结构，纳米柱之间的距离远远小于水珠的直径，使得水珠无法进入纳米柱间从而无法沾污荷叶的表面。本专利技术将小尺寸的分子信号探针通过Au-S键固定到纳米金颗粒表面合成纳米探针，这样就可以在传感过程中形成与荷叶表面类似的纳米结构，达到清除(降低)电化学背景信号的目的。具体地说:分子探针固定到纳米金表面后其直径将超过13nm以上，而按常规方法组装的电化学传感器自组装单分子层探针间距离为4?8nm。此时纳米探针的尺寸超过单分子层探针间距离，在组装或传感过程中将形成与荷叶相似的仿生纳米结构，达至IJ类似“荷叶效应”的自清洁效应，以清除电极表面的非特异性吸附而大幅提高传感器检测性能。本专利技术的主要内容是通过将分子探针固定到纳米金表面合成为纳米探针，构建对电化学传感器电极表面非特异性吸附进行自清洁的方法及展示其应用，本专利技术提供一种降低电化学传感器背景信号的方法，其中，该方法包括如下步骤:步骤一:将化学修饰的捕获探针固定到金电极的表面；步骤二:将分子信号探针通过化学自组装固定到纳米金颗粒表面合成纳米探针。进一步，根据所述的方法，其中，所述捕获探针或所述分子信号探针为较短链的探针。进一步，根据所述的方法，其中，步骤一如下:1 μ M的末端巯基修饰的捕获探针在含有IOOyM三[2-羧乙基]膦(TCEP)的缓冲溶液中(IOmM磷酸盐缓冲溶液(PB)，1.0MNaCl, pH = 7.0)室温下还原lh，将干净的裸金电极浸泡到其中，室温下过夜自组装，组装后的电极用超纯水冲洗三遍，然后将电极放到含ImM巯基己醇(MCH)的水溶液中封闭30分钟，再用超纯水冲洗三遍，吹干后放置于缓冲溶液中(IOmM PB, 1.0M NaCl,pH = 7.0)备用。进一步，根据所述的方法，其中，步骤二如下:将标记电化学氧化还原基团的分子信号探针，溶入到50mM 二硫苏糖醇(DTT)，体积比2%三乙胺(TEA)的水溶液中，室温下反应20min。使用NAP_5column过柱纯化,然后通过在260nm处紫外可见吸收峰值对分子信号探针定量，加入到粒径为13nm的9nM纳米金溶液(分子信号探针与纳米金摩尔比例为100: I)，在室温下静置老化16小时，老化后在分子杂交仪中振荡下分多次加入氯化钠缓冲溶液(IOmM PB, IM NaCl，pH = 7.4)，使 NaCl 终浓度为 0.3M，振荡 16h 后，9000rpm 离心20min，用IOmM PB (pH = 7.4)洗涤三次，置于4°C下备用。进一步，根据所述的方法，其中，所述捕获探针为探针5:HS- (CH2) 6-AGACAAGGAAAA ;所述分子信号探针为探针 6:HS- (CH2) 6-A5TCCTTCAATGAAGTGGGTCG- (CH2) 6-MB。进一步，根据所述的方法，其中，所述捕获探针为探针7:HS- (CH2) 6-A5ACCTGGGGGAGTAT ;所述分子信号探针为探针 8:HS_ (CH2) 6_A5TGCGGAGGAAGGT_ (CH2) 6-MB。进一步，根据所述的方法，其中，所述捕获探针为探针9 =T15-(CH2)6-SH;所述分子信号探针为探针 10:Fc-(CH2)6-A2tl-(CH2) 6-SH。本专利技术还提供一种电化学传感器，其中，将所述的纳米探针溶于IOmM PB,0.2MNaCl, pH7.0的缓冲溶液中为电解液，纳米金的终浓度为5nM，以所述的固定捕获探针的金电极作为工作电极组成三电极体系。本专利技术还提供一种电化学传感器，其中，将包被了所述的探针10的纳米金用杂交液(1/15M PB, 0.3M NaCl,pH7.4)稀释成2nM，与组装了所述探针9的金电极在25°C下抚育3h，再用杂交液冲洗三次，即制得传感器。本专利技术中利用纳米探针清除电极表面非特异性吸附来降低电化学传感器背景信号的方法如下:(I)将化学修饰的捕获探针固定到金电极的表面；I μ M的末端巯基修饰的捕获探针在含有100 μ M三[2_羧乙基]膦(TCEP)的缓冲溶液中(IOmM磷酸盐缓冲溶液(PB)，1.0M NaCl, pH = 7.0)室温下还原lh，将干净的裸金电极浸泡到其中，室温下过夜自组装。组装后的电极用超纯水冲洗三遍，然后将电极放到含ImM巯基己醇(MCH)的水溶液中封闭30分钟，再用超纯水冲洗三遍，吹干后放置于缓冲溶液中(IOmM PB, 1.0M NaCl，pH = 7.0)备用。(2)将分子信号探针通过化学自组装固定到纳米金颗粒表面合成纳米探针；将标记电化学氧化还原基团的分子信号探针，溶入到50mM 二硫苏糖醇(DTT)，体积比2%三乙胺(TEA)的水溶液中，室温下反应20min。使用NAP-5column过柱纯化，然后通过在260nm处紫外可见吸收峰值对分子信号探针定量，加入到粒径为13nm的9nM纳米金溶液(分子信号探针与纳米金摩尔比例为100: I)，在室温下静置老化16小时。老化后在分子杂交仪中振荡下分多次加入氯化钠缓冲溶液(IOmM PB, IM NaCl，pH = 7.4)，使NaCl终浓度为0.3M，振荡16h后，9000rpm离心20min，用IOmM PB (pH = 7.4)洗涤三次，置于4°C下备用。(3)传感器的构建与靶标的电化学检测。本专利技术中清除(降低)电化学传感器背景信号方法分别在信号增加检测平台(A)和信号减小检测平台(B)上应用，具体操作分别包括如下步骤:(A)可卡因和三磷酸腺苷的检测:将纳米探针溶于缓冲溶液中(IOmM PB,0.2MNaCl, pH7.0)为电解液，纳米金的终浓度为5nM，以固定捕获探针的金电极作为工作电极组成三电极体系，往电解液加入一定浓度的可卡因或者三磷酸腺苷，待体系平衡5分钟后，进本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种降低电化学传感器背景信号的方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：步骤一：将化学修饰的捕获探针固定到金电极的表面；步骤二：将分子信号探针通过化学自组装固定到纳米金颗粒表面合成纳米探针。
【技术特征摘要】
1.一种降低电化学传感器背景信号的方法，其特征在于，该方法包括如下步骤:步骤一:将化学修饰的捕获探针固定到金电极的表面；步骤二:将分子信号探针通过化学自组装固定到纳米金颗粒表面合成纳米探针。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述捕获探针或所述分子信号探针为较短链的探针。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤一如下:1μ M的末端巯基修饰的捕获探针在含有IOOyM三[2-羧乙基]膦(TCEP)的缓冲溶液中(IOmM磷酸盐缓冲溶液(PB)，1.0M NaCl, pH = 7.0)室温下还原lh，将干净的裸金电极浸泡到其中，室温下过夜自组装，组装后的电极用超纯水冲洗三遍，然后将电极放到含ImM巯基己醇(MCH)的水溶液中封闭30分钟，再用超纯水冲洗三遍，吹干后放置于缓冲溶液中(IOmM PB, 1.0M NaCl, pH = 7.0)备用。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤二如下:将标记电化学氧化还原基团的分子信号探针，溶入到50mM 二硫苏糖醇(DTT)，体积比2%三乙胺(TEA)的水溶液中，室温下反应20min。使用NAP-5column过柱纯化,然后通过在260nm处紫外可见吸收峰值对分子信号探针定量，加入到粒径为13nm的9nM纳米金溶液(分子信号探针与纳米金摩尔比例为100: I)，在室温下静置老化16小时，老化后在分子杂交仪中振荡下分多次加入氯化钠缓冲溶液(IOmM PB, IM NaCl，pH = 7.4)，使 NaCl 终浓...
【专利技术属性】
技术研发人员：娄新徽，赵滔，刘然，何苗，
申请(专利权)人：首都师范大学，清华大学，
类型：发明
国别省市：北京;11
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