四君子散在制备提高兔免疫性能的药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了四君子散在制备提高兔免疫性能的药物中的应用，具体为在基础日粮中添加重量百分比为1％～5％的四君子散，然后饲喂家兔，饲喂后能够提高家兔圆小囊指数、胸腺指数、脾脏指数或引突指数，提高家兔的免疫力，同时饲喂后还可以提高抗菌蛋白基因的表达量，为四君子散提高兔免疫性能提供了理论指导。

【技术实现步骤摘要】
四君子散在制备提高兔免疫性能的药物中的应用
本专利技术属于中药应用领域，具体涉及四君子散在制备提高兔免疫性能的药物中的应用。
技术介绍
兔的回肠末端形成一厚壁的圆形囊状结构，称为圆小囊，是兔特有一个集消化、免疫和神经内分泌为一体的多功能器官，也是兔特有的肠道相关性淋巴组织。研究表明在兔圆小囊组织中发现有大量抗菌肽类物质存在，国内外学者已对家兔体内分离提取抗菌活性物进行了积极探索。比如，1984年，Selsted等应用RP-HPLC结合酸性尿素电泳技术纯化了兔中性粒细胞防御素的六种组分；另外，Ooi等从兔中性粒细胞中分离到了分子量为15KDa的抗菌蛋白等。国内学者佘锐萍和王可洲等用酸提取法从兔子的圆小囊组织中提取到了有抗菌活性的兔小囊肽。四君子散为党参、白术、茯苓、甘草四味中药的散剂，传统配方中党参、白术、茯苓、甘草的重量比为2:2:2:1，主治脾胃气虚。现代研究表明，四君子散具有调整肠胃、增强机体免疫机能，促进骨骼造血功能，促使血压上升等作用。但是四君子散是对兔免疫性能的影响未见报道。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于提供四君子散在制备提高兔免疫性能的药物中的应用。为实现上述专利技术目的，本专利技术提供如下技术方案：1、四君子散在制备提高兔免疫性能的药物中的应用，所述四君子散由党参、白术、茯苓、甘草的重量比为2:2:2:1制成的散剂。优选的，所述免疫性能为圆小囊指数、胸腺指数、脾脏指数或引突指数。优选的，所四君子散在制备提高抗菌蛋白H2bc-like基因表达量的试剂中的应用。优选的，所述四君子散的添加量为基础日粮中四君子散的重量百分比为1％-5％。优选的，所述四君子散的添加量为基础日粮中四君子散的重量百分比为1％-5％。本专利技术的有益效果在于：本专利技术公开了四君子散在制备提高兔免疫性能的药物中的应用，通过在兔基础日粮中添加四君子散，能够提高兔圆小囊指数、胸腺指数、脾脏指数或引突指数，由于圆小囊是兔特有的免疫器官，对兔圆小囊进一步研究发现，四君子散能够提高兔圆小囊抗菌蛋白基因的表达量，与空白对照组相比添加3％和5％的四君子散后抗菌蛋白H2bc-like表达量分别提高了90.77％和90.34％，为抗菌蛋白含量与兔免疫性能相关提供了证据(陈红伟，钟文杰，李英伦等，兔抗菌组蛋白对小白鼠生长和细胞免疫功能的影响，中国兽医学报，2014年5月第3卷第5期)，同时也对动物饲料的“无抗生素化”进程具有积极意义。附图说明为了使本专利技术的目的、技术方案和有益效果更加清楚，本专利技术提供如下附图：图1为四君子散对家兔圆小囊组织中H2bc-likemRNA表达的影响。具体实施方式下面将结合附图，对本专利技术的优选实施例进行详细的描述。实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如分子克隆实验指南(第三版，J.萨姆布鲁克等著)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。本专利技术中的四君子散的由党参、白术、茯苓、甘草按重量比2:2:2:1组成，其制备方法是将处方量的党参、白术、茯苓和甘草用植物粉碎机粉碎成粒径为250μm-850μm粗粉。基础日粮参照NRC(1977)家兔饲养标准配制而成，具体组分如表1所示。表1、基础日粮组成及其营养水平(风干基础，％)原料含量营养成分营养水平B玉米24.9消化能10.46MJ/kg麸皮17.0粗蛋白质16.00花生秧38.3粗纤维10.00豆粕17.0粗脂肪2.00食盐0.5蛋氨酸+胱氨酸0.60磷酸氢钙1.5赖氨酸0.65预混料A0.8精氨酸0.95总计100钙0.40磷0.22注：A：预混料为每千克饲粮提供：VA8000IU；VD31000IU；VE50mg；Lys1.59；Met1.5g；Cu50mg；Fe100mg；Mn30mg；Mg150mg；I0.1mg；Se0.1mg。B：营养水平为计算值。实施例1选用60只断奶后30日龄新西兰白兔，按体重相近、公母各半原则随机分成5个处理组，每个处理设3个重复，每个重复4只家兔。对照组(处理1)饲喂不添加任何药物的基础饲粮，抗菌药组(处理2)在基础日粮上添加重量百分数为0.025％的磺胺对甲氧嘧啶钠(SMD-Na)，处理3、4、5组分别在基础日粮上添加重量百分数为1％、3％、5％四君子散，饲料充分混合均匀。饲养试验：饲养试验在西南大学教育部直属高校农林试点实践基地专用兔舍内进行，采取自由采食饲草、饮水，免疫消毒程序按兔场常规方法进行，试验场由专人负责和管理。日喂2次(7：00，19：30)，以食槽中无剩余料为原则，连续饲喂30天。每天清扫笼舍1次，整个笼舍采取自然采光、通风，所有笼舍进行不定期消毒。适应性饲养7天，期间对试验兔进行驱虫、防疫。饲养试验结束后，通过Real-timePCR检测实验家兔H2bc-likemRNA相对表达量。根据GenBank中登录的抗菌蛋白H2bc-like(GeneID:XM_002714148.1)的基因序列和看家基因Gapdh序列，利用Primer5.0软件设计其特异性引物，具体如表2所示：表2、PCR扩增引物序列特征将设计的引物送苏州金维智生物有限公司合成。然后提取实施例1中实验家兔的RNA，具体为：将家兔处死，采集圆小囊组织，用DEPC(焦碳酸二乙酯)水浸泡的剪刀，迅速剪碎，然后根据天根动物组织总RNA提取试剂盒说明书提取总RNA，提取后将总RNA置于-70℃保存备用。将提取的总RNA用Bio-rad公司反转录试剂盒(iSCRIPTAdvancedcDNASYNTHESIS)合成cDNA，操作步骤详见说明书。将合成的cDNA利用Real-timePCR反应检测H2bc-like基因的表达量，反应体系如表3所示。表3、Real-timePCR反应体系并按如下程序检测，95℃预变性2分钟，95℃变性10秒、59℃退火15秒、72℃延伸15秒，循环40次，最后在65℃～95℃(0.5℃/cycle，每个循环保持1秒)分析溶解曲线。每个处理检测6个样本，每个样本重复检测三次，并统计检测结果，结果如表4。表4、不同处理组H2bc-likemRNA相对表达量的汇总表根据H2bc-likemRNA表达量统计四君子散对家兔圆小囊组织中H2bc-likemRNA表达的影响，结果如表5和图1所示。表5、四君子散对家兔圆小囊组织中H2bc-likemRNA表达的影响处理组样本数平均值(Means±SD)空白对照组60.168±0.085Bc抗菌药组60.576±0.339Bc5％四君子散组61.739±0.693Aab3％四君子散组61.821±1.236Aa1％四君子散组60.960±0.409ABbc注：同一列上标不同大写字母的数据间差异极显著(P＜0.01)；标有不同小写字母的数据间差异显著(P＜0.05)；标有相同小写字母的数据间差异不显著(P＞0.05)。结果表明，对比空白对照组和抗菌药对照组，四君子散三个添加组对家兔圆小囊组织中H2bc-like基因mRNA表达均明显促进作用。其中，3％、5％四君子散添加组H2bc-like基因mRNA表达量，分别比空白对照组提高了90.77％和90.34％(P＜0.01)；与抗菌药组相比，分别提高了68.38％和66.88％(P＜0.01)。另外，3％四君子添加组比1％添加组提高了本文档来自技高网...

【技术保护点】
四君子散在制备提高兔免疫性能的药物中的应用，其特征在于：所述四君子散由党参、白术、茯苓、甘草的重量比为2:2:2:1制成的散剂。

【技术特征摘要】
1.四君子散在制备提高兔免疫性能的药物中的应用，其特征在于：所述四君子散由党参、白术、茯苓、甘草的重量比为2:2:2:1制成的散剂；所述免疫性能为圆小囊指数、胸腺指数、脾脏指数或引突指数。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述四君子散在制备提高抗菌蛋白H...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈红伟，吴俊伟，李英伦，刘娟，黄庆洲，
申请(专利权)人：西南大学，陈红伟，
类型：发明
国别省市：重庆;85