本发明专利技术公开了甲胎蛋白(AFP)自身抗体单独或与AFP联合作为肿瘤诊断、疗效评估和复发监控标志物的应用。研究发现，在用于肝癌、胰腺癌、肺癌等肿瘤的诊断和预示、疗效评估及复发监控时，单独检测血清或血浆AFP自身抗体的准确度、灵敏度和特异性较单独检测血清或血浆AFP高或与其基本相当，而联合检测血清或血浆AFP自身抗体与AFP的准确度、灵敏度和特异性高于上述二者单独检测。此外，本发明专利技术还提供了一种基于磁微粒分离酶联免疫检测技术的AFP自身抗体检测试剂盒以及AFP与AFP自身抗体联合检测试剂盒，具有检测准确、灵敏、特异，操作简便等优点。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术公开了甲胎蛋白(AFP)自身抗体单独或与AFP联合作为肿瘤诊断、疗效评估和复发监控标志物的应用。研究发现，在用于肝癌、胰腺癌、肺癌等肿瘤的诊断和预示、疗效评估及复发监控时，单独检测血清或血浆AFP自身抗体的准确度、灵敏度和特异性较单独检测血清或血浆AFP高或与其基本相当，而联合检测血清或血浆AFP自身抗体与AFP的准确度、灵敏度和特异性高于上述二者单独检测。此外，本专利技术还提供了一种基于磁微粒分离酶联免疫检测技术的AFP自身抗体检测试剂盒以及AFP与AFP自身抗体联合检测试剂盒，具有检测准确、灵敏、特异，操作简便等优点。【专利说明】甲胎蛋白自身抗体单独或与甲胎蛋白联合作为肿瘤诊断、疗效评估和复发监控标志物的应用
本专利技术属于医学
，涉及甲胎蛋白(AFP)自身抗体在医学领域中的新应用。
技术介绍
肝癌是死亡率仅次于胃癌、食道癌的第三大常见恶性肿瘤。相对于高死亡率，早期肝癌的发现比例却非常低，八成以上一经发现就已是晚期，其生存期大多只剩半年。因此，如何更早发现、及时干预，如何实现疗效评估和监测，以及如何对术后患者进行实时准确的复发监控等是肝癌防治中亟待解决的问题。而灵敏度高、特异性强的肝癌诊断试剂的研制是提高肝癌早期检出率、改善患者预后的关键之一。过去一直认为AFP是诊断原发性肝癌的特异性标志物，具有确立诊断、早期诊断、鉴别诊断的作用。近年来大量临床却发现，如果将cutoff值定为20 μ g/L，以AFP诊断肝癌的阳性率仅80%左右，在肠胃管肿瘤如胰腺癌、肺癌以及一些肝的良性病变如肝炎、肝硬化中也会出现不同程度的AFP增高现象，比如约有15-18%的慢性肝炎和11-47%的肝硬化患者其血清AFP在20-200 μ g/L水平。因此，以AFP诊断肝癌的特异性尚不理想。而提高cutoff值虽然可以提高诊断的特异性，但诊断灵敏度却会大幅下降。自身抗体是指针对自身组织、器官、细胞及细胞成分的抗体。人体的生长、发育和生存有完整的自身免疫耐受机制的维持，一旦自身耐受的完整性遭到破坏，则机体视自身组织、器官、细胞或细胞成分为“异物”而发生自身免疫反应，产生自身抗体。大量研究表明，肿瘤本身能诱导机体免疫反应，产生抗肿瘤相关抗原的自身抗体，在肿瘤抗原表达很低的时候也能够检测到。因此，检测与肿瘤抗原相关的自身抗体，有望及时地发现肿瘤。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的之一在于考察AFP自身抗体单独用于肝癌、胰腺癌、肺癌等肿瘤的诊断、疗效评估和复发监控的可能性，目的之二在于考察AFP与AFP自身抗体联合用于肝癌、胰腺癌、肺癌等肿瘤的诊断、疗效评估和复发监控的可能性，以达到准确、灵敏、特异的技术效果。经研究，本专利技术提供如下技术方案:1.甲胎蛋白自身抗体单独作为肿瘤诊断、疗效评估和复发监控标志物的应用，所述肿瘤为肝癌、肺癌和胰腺癌中的任一种。2.甲胎蛋白自身抗体检测试剂盒，包括磁分离试剂、生物素标记反应试剂、酶反应试剂和底物溶液；所述磁分离试剂为甲胎蛋白抗原III偶联磁性纳米微球，所述甲胎蛋白抗原III的氨基酸序列如SEQ ID N0.3所示；所述生物素标记反应试剂为生物素标记甲胎蛋白抗原I或II，所述甲胎蛋白抗原I的氨基酸序列如SEQ ID N0.1所示，甲胎蛋白抗原II的氨基酸序列如SEQ ID N0.2所示；所述酶反应试剂为酶标记亲和素；所述底物溶液为酶促化学发光底物溶液。进一步，所述甲胎蛋白自身抗体检测试剂盒还包括反应增强剂、样本稀释液和清洗浓缩液；所述反应增强剂为含有4.23g/L NaCU0.2mL/L Proclin-300和8.16g/L甲基异丙基酮的pH7.2-7.4的IOmM Tris-HCl缓冲液；所述样本稀释液为含有9g/L NaCU0.5mL/LProclin-300和50g/L BSA的pH6.8-7.2的水溶液；所述清洗浓缩液为含有42.8g/L NaCl、2mL/L Proclin-300 和 10mL/L Tween-20 的 ρΗ7.2-7.4 的 IOmM PBS 缓冲液。进一步，所述甲胎蛋白自身抗体检测试剂盒还包括标准品和质控品；所述标准品为浓度梯度分别为0、5、25、125、500、1000pg/mL的抗甲胎蛋白抗原III的单克隆抗体溶液；所述质控品为5pg/mL或125pg/mL的抗甲胎蛋白抗原III的单克隆抗体溶液。3.甲胎蛋白与甲胎蛋白自身抗体联合作为肿瘤诊断、疗效评估和复发监控标志物的应用，所述肿瘤为肝癌、肺癌和胰腺癌中的任一种。4.甲胎蛋白与甲胎蛋白自身抗体联合检测试剂盒，包括磁分离试剂A和B、生物素标记反应试剂A和B、酶反应试剂和底物溶液；所述磁分离试剂A为甲胎蛋白抗原III偶联磁性纳米微球，所述甲胎蛋白抗原III的氨基酸序列如SEQ ID N0.3所示；所述磁分离试剂B为抗甲胎蛋白抗原III的单克隆抗体偶联磁性纳米微球；所述生物素标记反应试剂A为生物素标记甲胎蛋白抗原I或II，所述甲胎蛋白抗原I的氨基酸序列如SEQ ID N0.1所示，甲胎蛋白抗原II的氨基酸序列如SEQ ID N0.2所示；所述生物素标记反应试剂B为生物素标记抗甲胎蛋白抗原I或II的单克隆抗体；所述酶反应试剂为酶标记亲和素；所述底物溶液为酶促化学发光底物溶液。进一步，所述甲胎蛋白与甲胎蛋白自身抗体联合检测试剂盒还包括反应增强剂、样本稀释液和清洗浓缩液；所述反应增强剂为含有4.23g/L NaCU0.2mL/L Pix)Clin-300和8.16g/L甲基异丙基酮的pH7.2-7.4的IOmM Tris-HCl缓冲液；所述样本稀释液为含有9g/L NaCU0.5mL/L Proclin-300和50g/L BSA的pH6.8-7.2的水溶液；所述清洗浓缩液为含有 42.8g/L NaCl、2mL/L Proclin-300 和 10mL/L Tween-20 的 ρΗ7.2-7.4 的 IOmM PBS 缓冲液。进一步，所述甲胎蛋白与甲胎蛋白自身抗体联合检测试剂盒还包括标准品A和B以及质控品A和B ;所述标准品A为浓度梯度分别为0、5、25、125、500、1000pg/mL的抗甲胎蛋白抗原III的单克隆抗体溶液；所述标准品B为浓度梯度分别为0、5、25、125、500、1000pg/mL的甲胎蛋白抗原III溶液；所述质控品A为5pg/mL或125pg/mL的抗甲胎蛋白抗原III的单克隆抗体溶液;所述质控品B为5pg/mL或125pg/mL的甲胎蛋白抗原III溶液。其中，磁分离试剂A、生物素标记反应试剂A、标准品A和质控品A配套用于AFP自身抗体的检测；磁分离试剂B、生物素标记反应试剂B、标准品B和质控品B配套用于AFP的检测。本专利技术的有益效果在于:本专利技术公开了 AFP自身抗体单独或与AFP联合作为肿瘤诊断、疗效评估和复发监控标志物的应用。研究发现，在用于肝癌、胰腺癌、肺癌等肿瘤的诊断和预示、疗效评估及复发监控时，单独检测血清或血浆AFP自身抗体的准确度、灵敏度和特异性较单独检测血清或血浆AFP高或与其基本相当，而联合检测血清或血浆AFP自身抗体与AFP的准确度、灵敏度和特异性高于上述二者单独检测。此外，本专利技术还提供了一种基于磁微粒分离酶联免疫检测技术的AF本文档来自技高网...
【技术保护点】
甲胎蛋白自身抗体单独作为肿瘤诊断、疗效评估和复发监控标志物的应用，所述肿瘤为肝癌、肺癌和胰腺癌中的任一种。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：王弢，乐飚，徐骏，渠香云，张国洲，盛稳稳，何林富，
申请(专利权)人：上海度微医学技术有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31
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