用于原代培养肿瘤细胞的细胞培养组合物及用途制造技术

本发明专利技术提供了一种用于原代培养肿瘤细胞的细胞培养组合物及用途。在本发明专利技术的细胞培养组合物在上皮来源的肿瘤细胞原代培养中的用途中，所述的细胞培养组合物包含角质细胞无血清培养基和神经细胞培养用无血清添加剂，并且所述的细胞培养组合物中不包含血清。本发明专利技术的细胞培养组合物能够成功地对上皮来源的肿瘤细胞进行体外原代培养，大大地提高了上皮来源的肿瘤细胞原代培养的成功率，并且能够抑制癌组织中的间质细胞如成纤维细胞和内皮细胞的生长，例如，应用本发明专利技术所述的细胞培养组合物能在10天内使上皮来源的肿瘤细胞原代培养成功，培养的成功率大部分在80％以上；并基本上能稳定传代至8代以上，可成功建系。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术提供了一种。在本专利技术的细胞培养组合物在上皮来源的肿瘤细胞原代培养中的用途中，所述的细胞培养组合物包含角质细胞无血清培养基和神经细胞培养用无血清添加剂，并且所述的细胞培养组合物中不包含血清。本专利技术的细胞培养组合物能够成功地对上皮来源的肿瘤细胞进行体外原代培养，大大地提高了上皮来源的肿瘤细胞原代培养的成功率，并且能够抑制癌组织中的间质细胞如成纤维细胞和内皮细胞的生长，例如，应用本专利技术所述的细胞培养组合物能在10天内使上皮来源的肿瘤细胞原代培养成功，培养的成功率大部分在80％以上；并基本上能稳定传代至8代以上，可成功建系。【专利说明】
本专利技术属于生物
，具体而言，涉及一种、原代培养方法。
技术介绍
目前肿瘤细胞培养技术中，对肿瘤细胞进行原代培养及建系最常用的技术是应用添加了 10%的胎牛血清(可简称FCS)的基础培养基对肿瘤细胞进行培养。但是目前应用该肿瘤细胞培养技术培养原代肿瘤细胞，其成功率非常低。例如，应用10% FCS+RPMI1640培养原代肺癌和前列腺癌细胞，其成功率均低于10%，能传代建系的成功率就更低。因此，目前肿瘤研究中多应用已经建成的细胞系。由于已建成的细胞系多经过了长期的体外培养和传代，它们 已丧失了很多肿瘤细胞原有的生物学特性，这极大地限制了肿瘤的生物学特性的研究。另外，肿瘤免疫治疗现在进展迅速，而自体肿瘤细胞疫苗无疑是最好的肿瘤抗原，但由于肿瘤细胞原代培养的困难性，限制了该技术的应用。最近发展了应用无血清培养基培养脑胶质瘤细胞，使脑胶质瘤原代细胞培养的成功率有所提高。但是应用无血清或低血清培养基培养原代癌细胞，其成功率仍十分低下，多数不超过20%，且培养时间多需在I月以上。
技术实现思路
为解决上述现有技术中存在的问题，本专利技术提供了一种、原代培养方法。具体而言，本专利技术提供:(I) 一种细胞培养组合物在上皮来源的肿瘤细胞原代培养中的用途，其中所述的细胞培养组合物包含角质细胞无血清培养基和神经细胞培养用无血清添加剂，并且所述的细胞培养组合物中不包含血清。(2)根据(I)所述的用途，其中，所述的角质细胞无血清培养基为选自干系@角质细胞培养基n( stemline? Keratinocyte MediumI I)、角质细胞无血清培养基(keratinocyte-SFM)以及成分确定的角质细胞无血清培养基(DefinedKeratinocyte-SFM)中的一种。(3)根据⑴所述的用途，其中，所述的无血清添加剂为选自B27添加剂(B27supplement)、不包含维生素 A 的 B27 添加剂(B27supplement without Vitamin A)以及N-2添加剂(N-2supplement)中的一种；优选为B27添加剂。(4)根据(I)所述的用途，其中，以所述的细胞培养组合物的总体积计，当所述的角质细胞无血清培养基以I倍稀释比例使用时，所述的神经细胞培养用无血清添加剂以0.2-1倍的稀释比例使用。(5)根据⑴所述的用途，其中，所述的上皮来源的肿瘤细胞选自肺癌细胞、乳腺癌细胞、前列腺癌细胞及食管癌细胞中的一种。(6)根据(1)-(5)中任意一项所述的用途，其中，所述的细胞培养组合物中还包含:表皮细胞生长因子、成纤维细胞生长因子以及转化生长因子β中的一种或多种；其中，如果存在的话，所述的表皮细胞生长因子的含量优选为5_50ng/ml ;所述的成纤维细胞生长因子的含量优选为2.5-50ng/ml ;所述的转化生长因子β的含量优选为2-10ng/ml。(7) 一种用于原代培养上皮来源的肿瘤细胞的细胞培养组合物，其包含:角质细胞无血清培养基和神经细胞培养用无血清添加剂，并且所述的细胞培养组合物中不包含血清。 (8)根据(7)所述的细胞培养组合物，其中，所述的角质细胞无血清培养基为选自干系@角质细胞培养基n( stemline? KeratinocyteMedium II)、角质细胞无血清培养基(keratinocyte-SFM)以及成分确定的角质细胞无血清培养基(DefinedKeratinocyte-SFM)中的一种。(9)根据(J)所述的细胞培养组合物，其中，所述的无血清添加剂为选自B27添加剂(B27supplement)、不包含维生素 A 的 B27 添加剂(B27supplement without Vitamin A)以及N-2添加剂(N-2supplement)中的一种；优选为B27添加剂。(10)根据(7)所述的细胞培养组合物，其中，以所述的细胞培养组合物的总体积计，当所述的角质细胞无血清培养基以I倍稀释比例使用时，所述的神经细胞培养用无血清添加剂以0.2-1倍的稀释比例使用。(11)根据(7)-(10)中任意一项所述的细胞培养组合物，其中，所述的细胞培养基还包含:表皮细胞生长因子、成纤维细胞生长因子以及转化生长因子β中的一种或多种；其中，如果存在的话，所述的表皮细胞生长因子的含量优选为5_50ng/ml ;所述的成纤维细胞生长因子的含量优选为2.5-50ng/ml ;所述的转化生长因子β的含量优选为2-10ng/ml。(12) 一种上皮来源的肿瘤细胞的原代培养方法，其包括:使用根据(7)-(11)中任意一项所述的细胞培养组合物对所述的上皮来源的肿瘤细胞进行原代培养。(13)根据(12)所述的原代培养方法，其中，所述的原代培养方法包括以下步骤:I)在体外用胶原酶对肿瘤组织进行消化，从而得到单个肿瘤细胞；以及2)用所述的细胞培养组合物对步骤I)得到的肿瘤细胞进行培养，从而得到肿瘤细胞系。(14)根据(12)或(13)所述的原代培养方法，其中，所述的上皮来源的肿瘤细胞选自肺癌细胞、乳腺癌细胞、前列腺癌细胞或食管癌细胞。本专利技术的细胞培养组合物及上皮来源的肿瘤细胞的原代培养方法与现有技术相比具有以下优点和积极效果:本专利技术的细胞培养组合物能够成功地对上皮来源的肿瘤细胞进行体外培养,特别是进行原代培养，并且大大地提高了上皮来源的肿瘤细胞的原代培养成功率，从而相应地克服了现有技术中癌细胞难以进行原代培养或培养成功率极低的缺陷，因此对肿瘤研究具有非常重要的现实意义和实用价值。例如，应用本专利技术所述的细胞培养组合物可使(例如)肺癌、乳腺癌、前列腺癌及食管癌的原代肿瘤细胞在10天内培养扩增成功，肿瘤细胞培养的成功率大部分在80%以上，最高可达100% ;并能稳定传代，成功建系。此外，本专利技术的细胞培养组合物还能够抑制癌组织中的间质细胞如成纤维细胞和内皮细胞的生长，从而选择性地培养癌组织中的肿瘤细胞。因此，本专利技术的细胞培养组合物使原代培养的癌细胞纯度非常高，解决了现有的原代培养的癌细胞中常常污染有大量间质细胞的问题。本专利技术的上皮来源的肿瘤细胞的原代培养方法，能在10天内使上皮来源的肿瘤细胞(包括但不限于肺癌、乳腺癌、前列腺癌及食管癌)原代培养成功，肿瘤细胞培育的成功率大部分在80 %以上，最高可达100 % ;并基本上能稳定传代至8代以上，可成功建系。【专利附图】【附图说明】图1为试验例I中原代培养的4种类型的肺癌细胞的光镜图(200X，即200倍)，其使用的是实施例1的培养基进行培养的；其中，A为肺鳞癌；B为小细胞肺癌；C为大细胞肺癌；D为肺腺癌；本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种细胞培养组合物在上皮来源的肿瘤细胞原代培养中的用途，其中所述的细胞培养组合物包含角质细胞无血清培养基和神经细胞培养用无血清添加剂，并且所述的细胞培养组合物中不包含血清。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：高全立，
申请(专利权)人：高全立，
类型：发明
国别省市：河南;41