基于样品高效保鲜的提取水生植物DNA的方法技术

本发明专利技术公开了一种基于样品高效保鲜的提取水生植物DNA的方法，涉及分子生物学领域中提取水生植物DNA的方法。本方法主要是：放弃硅胶保存植物样品的方式，将水生植物新鲜叶片浸入到CTAB溶液中，加入β-巯基乙醇防止氧化，常温下保存。分别在10d、20d和30d后提取叶片的总DNA：经常温研磨、65℃水浴、氯仿和异戊醇萃取、-20℃无水乙醇沉淀后，得到絮状DNA沉淀物；75%乙醇洗涤和室温干燥后，加TE缓冲液溶解DNA，于-20℃保存备用。本发明专利技术主要针对水生植物提供了一种新型简便的样品保存方法，所获得的DNA纯度高，产量大。因此，本发明专利技术适用于水生植物基因组测序等方面研究所需高质量DNA的提取。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种基于样品高效保鲜的提取水生植物DNA的方法，其特征在于：本方法的样品分别是海菜花、光叶眼子菜、睡莲和菱四种水生植物的新鲜叶片，每一种实验材料的提取均包括下列步骤：①称取0.3g的样品放入1.5mL的离心管中，加入800μL的CTAB溶液，并加入2.5μL的β‑巯基乙醇，将叶片完全浸没，常温下保存；②分别在10d、20d和30d后将样品和样品保存液一起转入研钵，加入0.1g的石英砂，常温研磨成细浆转入2mL离心管中，65℃水浴1h，每15min摇晃一次；③在12000rpm下常温离心5min，转移上清液到新的1.5mL离心管中，加入750μL的体积比为24∶1的氯仿：异戊醇，充分混匀后，在摇床上摇晃10min，常温12000rpm离心5min，再重复抽提1次；④经过两次抽提后的上清液转入新的离心管中，加入1/10体积的3M醋酸钠溶液，然后加入两倍体积的提前预冷到‑20℃的无水乙醇，置于‑20℃冰柜1‑3h，让DNA沉淀充分析出；⑤常温12000rpm离心5min，然后倾斜离心管，小心倒出上清液，加入1mL的75%的乙醇，漂洗1‑2次，每次30‑60min，倒干酒精；⑥常温10000rpm离心5min，加入50μL无水乙醇洗涤5min，离心倒去乙醇，将离心管置于超净工作台上3‑4h，以吹干离心管内残留的乙醇洗涤液，并干燥DNA沉淀物；⑦向离心管中加50μL的1×TE缓冲液，轻轻摇动，将离心管放入4℃冰箱内过夜使DNA充分溶解，然后加入0.5μL浓度为10μg/mL的RNA酶37℃消化1h，然后将离心管放入‑20℃冰柜中保存。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：樊香绒，陈媛媛，刘艳玲，李伟，
申请(专利权)人：中国科学院武汉植物园，
类型：发明
国别省市：湖北;42