本发明专利技术公开了CST1mRNA和CST4mRNA或其编码的蛋白质在制备尿道癌标志物中的应用及其试剂盒，将CST1mRNA和CST4mRNA或其所编码的蛋白质联合用于诊断和预示尿道癌，其特异性和灵敏度高于使用其中一个标志物；本发明专利技术还公开了联合检测上述标志物的试剂盒，其试剂盒使用方便，能够直接收集尿液进行检测，不需要采集血清，减少患者的取样痛苦，并且具有特异性好和灵敏度高的特点，能够用于尿道癌诊断，治疗过程中的疗效评估及其治疗后的转移复发监控，为医生提前进行干预提供了指导。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术公开了CST1mRNA和CST4mRNA或其编码的蛋白质在制备尿道癌标志物中的应用及其试剂盒，将CST1mRNA和CST4mRNA或其所编码的蛋白质联合用于诊断和预示尿道癌，其特异性和灵敏度高于使用其中一个标志物；本专利技术还公开了联合检测上述标志物的试剂盒，其试剂盒使用方便，能够直接收集尿液进行检测，不需要采集血清，减少患者的取样痛苦，并且具有特异性好和灵敏度高的特点，能够用于尿道癌诊断，治疗过程中的疗效评估及其治疗后的转移复发监控，为医生提前进行干预提供了指导。【专利说明】CSTImRNA和CST4mRNA或其编码的蛋白质在制备尿道癌标志物中的应用及其试剂盒
本专利技术属于诊断领域,具体涉及Cystatin SN和Cystatin S在制备尿道癌标志物中的应用，还涉及诊断尿道癌的试剂盒。
技术介绍
尿道癌属于尿道上皮肿瘤，在两性中均可发病，临床上比较少见，其中男性居多。它是尿道肿瘤里最常见的肿瘤，为恶性肿瘤。按其起源不同:分为鳞状上皮癌，移行上皮癌，腺癌，透明细胞癌，尿道泄殖腔源性癌，腺样囊性癌，类癌，混合性癌，cowper尿道附属腺癌。以鳞状上皮癌最多见，多发生于前段或中段尿道，移行上皮癌多发生于后尿道，腺癌多发生于中段尿道。尿道癌主要为手术治疗，放射治疗可以作为术前术后辅助治疗和已有转移无法行手术治疗的患者，亦可联合化疗。但是效果不是很理想，早发现早治疗将最大程度的提高生存率。因此，寻找到特异的尿道癌肿瘤标志物成为亟待解决的问题。半胱氨酸蛋白酶抑制剂Cystatin SN和Cystatin S是人类Cystatin家族成员，分别由CSTl基因和CST4基因编码。Cystatin SN和Cystatin S为典型的分泌蛋白，分布于体液和分泌物中，如眼泪、唾液、血清、血浆等，可以作为乳腺癌标志物。而CSTl和CST4在胃肠肿瘤组织中的表达量高于正常组织，并且CSTl和CST4的表达与浸润深度、远处转移以及肿瘤分期(?M分析)相关；生存分析表明，CSTl和CST4高表达患者的5年生存率显著高于无表达组；Cox回归分析表明，CSTl和CST4是一个独立预后因子；从而提示CSTl和CST4可能在胃肠肿瘤的发生、发展过程中发挥类似肿瘤抑制因子的作用。但迄今为止，未见CSTl和CST4与尿道癌相关性的报道。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的之一在于提供CSTlmRNA和CST4mRNA在制备诊断和预示尿道癌标志物中的联合应用，通过CSTlmRNA和CST4mRNA联合检测，提高诊断和预示尿道癌的特异性；本专利技术的目的之二在于提供CSTlmRNA和CST4mRNA联合检测尿道癌的试剂盒，该试剂盒具有特异性高，使用方便等优点；本专利技术的目的之三在于提供Cystatin SN和Cystatin S在制备诊断和预示尿道癌标志物中的联合应用。为实现上述专利技术目的，本专利技术提供如下技术方案:1.CSTlmRNA和CST4mRNA在制备诊断和预示尿道癌标志物中的联合应用，所述CSTlmRNA的核苷酸序列如SEQ ID N0.1所示，所述CST4mRNA的核苷酸序列如SEQ ID N0.2所示。优选的，CSTlmRNA和CST4mRNA联合应用的判断公式为P =exp (-1.283+0.002a+0.001b) /，其中 a = CSTl 拷贝数，b=CST4拷贝数。 优选的，所述诊断和预示为诊断、疗效评估或转移复发监控。2、CSTImRNA和CST4mRNA联合检测尿道癌的试剂盒，包括CSTlmRNA和CST4mRNA的定量检测试剂；所述CSTlmRNA定量检测试剂包括如SEQ ID N0.7和SEQ ID N0.8所示的检测引物和核苷酸序列如SEQ ID N0.20所示的TaqMAN探针；所述CST4mRNA定量检测试剂包括如SEQ ID N0.9和SEQ ID N0.10所示的检测引物和核苷酸序列如SEQ ID N0.22所示的TaqMAN 探针。优选的，所述试剂盒还包括SDHA mRNA定量检测试剂，所述SDHA mRNA定量检测试剂包括如SEQ ID N0.11和SEQ ID N0.12所示的检测引物和核苷酸序列如SEQ ID N0.24所示的TaqMAN探针。优选的，所述试剂盒还包括特异捕获CSTImRNA、CST4mRNA和SDHA mRNA的磁珠，所述特异捕获CSTlmRNA的磁珠结合有如SEQ ID N0.4所示的探针，所述特异捕获CST4mRNA的磁珠结合有如SEQ ID N0.5所示的探针，所述特异捕获SDHA mRNA的磁珠结合有如SEQ IDN0.6所示的探针。更优选的，靶序列捕获液中磁珠的浓度为500 μ g/mL，特异捕获探针的浓度为2μ M0优选的，所述试剂盒还包括10 XBuffer，dNTP, MgCl2, DMSO, DTT, Taq 酶、UDG、逆转录酶和RNA酶抑制剂。3、Cystatin SN和Cystatin S在制备诊断和预示尿道癌标志物中的联合应用，编码Cystatin SN的核苷酸序列如SEQ ID N0.1所示，编码Cystatin S的核苷酸序列如SEQID N0.2 所示。优选的，Cystatin SN和Cystatin S联合应用的判断公式为P =exp (-6.508+0.023a+0.022b) /，其中 a = Cystatin SN浓度，b = Cystatin S 浓度。优选的，所述诊断和预示为诊断、疗效评估或转移复发监控。本专利技术的有益效果在于:本专利技术公开了诊断和预示尿道癌的新标志物，即CSTlmRNA和CST4mRNA或其所编码的蛋白质，利用两个标志物联合检测的特异性和灵敏度高于使用其中一个标志物；本专利技术还公开了诊断和预示尿道癌标志物的试剂盒，该试剂盒使用方便，能够直接收集尿液进行检测，不需要采集血清，减少患者的取样痛苦，并且具有特异性好和灵敏度高的特点，其诊断结果与临床诊断结果一致，在监控过程中还可以及早发现转移复发情况，为医生提前进行干预提供了指导。【专利附图】【附图说明】为了使本专利技术的目的、技术方案和有益效果更加清楚，本专利技术提供如下附图:图1为磁珠法从尿液中特异性富集mRNA原理图。图2为特异性探针和非特异性探针富集CSTl基因比较结果。图3为特异性探针和非特异性探针富集CST4基因比较结果。图4为特异性探针和非特异性探针富集SDHA基因比较结果。图5为尿道癌组织与癌旁组织CSTl相对表达量的比值结果图。图6为尿道癌组织与癌旁组织CST4相对表达量的比值结果图。 图7为CSTl绝对定量标准曲线。图8为CST4绝对定量标准曲线。图9为受试者CSTl基因和CST4基因联合检测ROC曲线。图10为ELISA检测Cystatin SN在尿道癌组织及癌旁组织表达情况(1-T和2-T表示尿道癌组织，1-N和2-N表示癌旁组织)。图11为ELISA检测Cystatin S在尿道癌组织及癌旁组织表达情况(1-T和2-T表示尿道癌组织，1-N和2-N表示癌旁组织)。图12为Cystatin SN蛋白标准曲线。图13为Cystatin S蛋白标准曲线。图14为Cystatin SN和Cystatin S标志物单独检测及联合检测的ROC曲本文档来自技高网...
【技术保护点】
CST1mRNA和CST4mRNA在制备诊断和预示尿道癌标志物中的联合应用，所述CST1mRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述CST4mRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：王弢，渠香云，何林富，高鹏，
申请(专利权)人：上海度微医学技术有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31
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