一种鳜鱼传染性脾肾坏死病毒的LAMP检测方法技术

本发明专利技术公开了一种鳜鱼传染性脾肾坏死病毒的LAMP检测方法，该方法是针对传染性脾肾坏死病毒特异性片段的6个区域设计4种特异性引物，利用LAMP快速扩增模版DNA特异性区域，通过加入染料，在自然光下通过肉眼观察颜色变化就能判断结果，整个反应不超过2h，又由于LAMP呈瀑布式扩增，因此其扩增效率非常高，灵敏度是普通PCR的100倍，且无需复杂的检测仪器和检测过程，操作简单，可实现现场实时检测，因此本发明专利技术是一种检测快速、灵敏度高、操作简便、成本低，检测结果易于判断的传染性脾肾坏死病毒的LAMP检测方法。

【技术实现步骤摘要】
一种鳜鱼传染性脾肾坏死病毒的LAMP检测方法
本专利技术涉及病毒检测方法，具体涉及一种鳜鱼传染性脾肾坏死病毒的LAMP检测方法。
技术介绍
传染性脾肾坏死病毒(Infectiousspleen and kidney necrosis virus, ISKNV)于1998年从鳜鱼中分离出来。该病毒具有囊膜，直径为150nm，是细胞质双链线状DNA病毒，是鳜暴发性传染病的主要病原，主要流行于我国南方淡水养殖的鳜中，该病毒病流行性快、发病率高，且目前尚无有效控制措施，严重影响鳜鱼养殖业的发展。何建国等通过回归感染证明了该病毒的病原性，认为可能是一种虹彩病毒，并对其感染的组织范围进行了研究，发现脾肾是其主要感染器官，导致脾肾坏死，因此命名为传染性脾肾坏死病毒(infectiousspleen and kidney necrosis virus, ISKNV)。目前对于ISKNV的检测，主要有组织学检测方法和分子生物学技术检测方法，但这些检测方法在实际操作中，由于自身条件的限制，均不适合临床大量检测。
技术实现思路
本专利技术目的是针对已有的鳜鱼传染性脾肾坏死病毒检测方法的缺陷，提供一种具有检测快速、操作简便、成本低、灵敏度高、检测结果准确和检测周期短等优点的鳜鱼传染性脾肾坏死病毒的LAMP检测方法。本专利技术所采用的技术方案为:一种鳜鱼传染性脾肾坏死病毒的LAMP检测方法，其包括以下步骤:I) DNA提取:从染病鳜鱼的肾脏组织中提取基因组DNA ；2)DNA片段扩增:取I μ L提取的基因组DNA加入到25 μ L反应液中，混匀后置63°C恒温水浴中进行LAMP扩增lh，所述反应液由下述成分组成:本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种鳜鱼传染性脾肾坏死病毒的LAMP检测方法，其特征在于包括以下步骤：1）DNA提取：从染病鳜鱼的肾脏组织中提取基因组DNA；2）DNA片段扩增：取1μL提取的基因组DNA加入到25μL反应液中，混匀后置63℃恒温水浴中进行LAMP扩增1h，所述反应液由下述成分组成：其中，F3引物的核苷酸序列为GCCTGGAAGACATACCCGA；B3引物的核苷酸序列为CGTCATGTACGCGGACATG；FIP引物的核苷酸序列为CGCAG GCAATCCATAAGCGCTTTTCATACCGCCGGAATCTTACC；BIP引物的核苷酸序列为CCGGAGCCGTGCGCAATAAATTTTCGAGGAACGACACGTACTG；3）向反应体系中再加入0.5μL绿色荧光染料并进行阴阳性判断，若呈绿色为阳性，则鳜鱼中感染有传染性脾肾坏死病毒；若呈现橙色为阴性，则鳜鱼中无传染性脾肾坏死病毒。

【技术特征摘要】
1.一种鳜鱼传染性脾肾坏死病毒的LAMP检测方法，其特征在于包括以下步骤: 1)DNA提取:从染病鳜鱼的肾脏组织中提取基因组DNA ； ...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘学芹，刘广鑫，林蠡，袁军法，李泽明，柳力月，罗培骁，
申请(专利权)人：华中农业大学，
类型：发明
国别省市：湖北;42